奶牛乳腺炎病原菌的耐藥性分析思路總結(jié)

穆國冬 張忠湛 盧松巖 王晉 任銳

摘 要 在奶牛場(chǎng)中作為常見、危害最大的一種疾病為奶牛乳腺炎，由此會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)乳量不斷降低，還會(huì)對(duì)乳品質(zhì)造成嚴(yán)重影響，尤其是隱性乳腺炎，因在臨床上變化不明顯而很難被發(fā)現(xiàn)。由于長期使用藥物治療，促使致病菌產(chǎn)生的耐藥性很強(qiáng)，如大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、青霉素類、頭孢類、喹諾酮類藥物。為幫助獸醫(yī)做好臨床用藥工作，可對(duì)奶牛乳腺炎病原菌開展體外抑菌試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞 奶牛乳腺炎病原菌；耐藥性分析；思路總結(jié)

奶牛乳腺炎作為一種比較常見的奶牛疾病，會(huì)影響奶牛產(chǎn)奶量，導(dǎo)致奶牛養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益不斷降低，會(huì)喪失泌乳功能而被迫淘汰奶牛，且會(huì)對(duì)牛奶品質(zhì)造成影響，不利于人們的身體健康。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)生率大約控制在25-60%之間，每年所造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)20億美元。這類疾病的產(chǎn)生與多種非特定病原微生物感染有關(guān)，根據(jù)種類可分為四種，包括80多種病原微生物，其中23種最為常見，但是主要是細(xì)菌，如鏈球菌、大腸桿菌等，會(huì)對(duì)乳房造成直接感染。通過對(duì)病原菌分布地域的了解，便于更好的做好疾病診治工作[1]。

1 材料與方法

1.1 材料

使用細(xì)菌基礎(chǔ)與鑒別培養(yǎng)基、生化試驗(yàn)用培養(yǎng)基。取32個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)的牛奶樣品，采樣之前需使用消毒液對(duì)乳頭進(jìn)行擦拭，不用頭兩把乳汁，然后使用無菌試管取5-10ml乳汁送檢。

1.2 病原菌分離培養(yǎng)

在血瓊脂平板上接種所采集的無菌樣品，在37攝氏度溫度下進(jìn)行18-24小時(shí)的培養(yǎng)，選擇可疑菌落開展涂片、革蘭氏染色處理，鏡檢后進(jìn)行分離培養(yǎng)[2]。

1.3 分離菌的鑒別培養(yǎng)與形態(tài)觀察

在各種培養(yǎng)基上分別接種可疑菌落，如SS瓊脂培、伊紅美蘭、三糖鐵斜面以及Baird-parker等鑒別培養(yǎng)基中，同樣在37攝氏度下培養(yǎng)18-24小時(shí)。采用常規(guī)方法做好涂片、革蘭氏染色和鏡檢操作，對(duì)菌落形態(tài)與培養(yǎng)基顏色變化進(jìn)行密切觀察[3]。

1.4 API鑒定試驗(yàn)

分離菌通過24小時(shí)的血平板純培養(yǎng)之后，需嚴(yán)格根據(jù)操作要求在API細(xì)菌鑒定試劑條上分別接種，在37攝氏度濕盒內(nèi)進(jìn)行18-24小時(shí)的培養(yǎng)，試劑加入以后進(jìn)行認(rèn)真觀察，并將結(jié)果準(zhǔn)確記錄下來。

1.5 Vitek-32細(xì)菌鑒定試驗(yàn)

對(duì)分離菌開展血平板純培養(yǎng)24小時(shí)，根據(jù)要求分別接種在VITEK細(xì)菌鑒定卡上，設(shè)置培養(yǎng)箱溫度為37攝氏度，然后進(jìn)行為期18-24小時(shí)的培養(yǎng)，關(guān)于結(jié)果需使用計(jì)算機(jī)每小時(shí)分析一次。

1.6 藥敏試驗(yàn)

在合適的培養(yǎng)基瓊脂培平板上接種各細(xì)菌純培養(yǎng)物涂片，然后對(duì)各種藥敏紙片進(jìn)行均勻放置，在選擇24h、48h時(shí)間點(diǎn)將各藥敏片抑菌圈大小記錄下來。

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)特性與生化鑒定

在SS瓊脂、伊紅美蘭培養(yǎng)基中分別接種革蘭氏陰性球菌，通過一段時(shí)間的培養(yǎng)后對(duì)菌落形態(tài)進(jìn)行認(rèn)真觀察。取伊紅美蘭上黑色帶有金屬光澤的單菌落、白色半透明細(xì)小菌落，在三糖鐵斜面上進(jìn)行穿刺接種，關(guān)于初步生化鑒定需嚴(yán)格根據(jù)常規(guī)方法操作。

早Baird-parker培養(yǎng)基中接種革蘭氏陽性葡萄球菌，觀察菌落形態(tài)。取中心黑色，對(duì)于周圍的透明袋單菌落開展血漿凝固酶試驗(yàn)，若結(jié)果為陽性可初步鑒定為金黃色葡萄球菌。

在分離鑒定病原菌的過程中可見比較純的酵母樣菌落，通過涂片染色進(jìn)行鏡檢，也會(huì)發(fā)現(xiàn)卵圓形酵母菌樣微生物，可初步鑒定為酵母菌[4]。

2.2 API或Vitek-32鑒定結(jié)果

采用API 20E或Vitek-32來鑒定開展生化試驗(yàn)較難的菌株，葡萄球菌的檢出率最高，其中金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌最高，其次為鏈球菌、停乳與乳房鏈球菌，再次為革蘭氏陰性桿菌（大腸桿菌、肺炎/溶血巴氏桿菌）。

2.3 藥敏試驗(yàn)

研究發(fā)現(xiàn)，病原微生物金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌等為主要的病原菌，因此可針對(duì)性選擇14種藥物開展藥敏試驗(yàn)。結(jié)果可知，所分離株經(jīng)常使用的抗菌藥物會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的耐藥性，如復(fù)合磺胺、青霉素、鏈霉素等，同時(shí)類似于恩諾沙星、氧氟沙星等新型抗生素同樣也會(huì)產(chǎn)生一定的耐藥菌株。

3 討論

通過對(duì)32個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)的奶羊開展細(xì)菌分離鑒定，結(jié)果可知該地區(qū)的奶牛乳腺炎主要是葡萄球菌感染，這符合國內(nèi)其它省市和國外的報(bào)道。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)了少數(shù)酵母菌，且是臨床型乳腺炎，而酵母菌所造成的奶牛乳腺炎少之又少，究其原因在細(xì)菌性乳腺炎治療過程中因抗生素的大量反復(fù)使用有關(guān)，由此導(dǎo)致乳區(qū)微生物生態(tài)失衡，大量繁殖這類真菌。研究發(fā)現(xiàn)，本次分離所分離出來的酵母菌均不敏感應(yīng)用的全部抗生素，為此必須引起臨床的高度重視。

縱觀流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果可知，臨床型乳腺炎奶牛的表現(xiàn)以乳房炎癥反應(yīng)為主，如發(fā)病、疼痛、腫脹、觸診腫塊等，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)全身癥狀、乳汁不正常，存在不同程度的凝塊、絮片，重者會(huì)出現(xiàn)黃色漿液性物質(zhì)。同時(shí)，疾病的產(chǎn)生受各種因素的影響，如環(huán)境衛(wèi)生、飼養(yǎng)管理、季節(jié)、胎數(shù)、泌乳月等，其中發(fā)生率最高的當(dāng)屬第三季度、三胎，頭胎發(fā)生率低；牛易感性最強(qiáng)的泌乳月當(dāng)屬3-4月、第9月[5]。

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于臨床經(jīng)常使用的抗菌藥物所分離菌株所產(chǎn)生的耐藥性較強(qiáng)，且抗生素殘留會(huì)造成較大的食品安全隱患，為此人們需高度重視抗生素濫用，在免疫預(yù)防時(shí)積極的接種疫苗。但是，基于乳腺病原比較復(fù)雜，不利于有效的研制與選擇疫苗，為此在今后的工作中應(yīng)該重視消毒、飼養(yǎng)管理共組，對(duì)疫苗、抗生素進(jìn)行正確合理的選擇，制定綜合防治措施積極有效的預(yù)防奶牛乳腺炎。

參考文獻(xiàn)：

[1]王丹，楊峰，李新圃，羅金印，劉龍海，張哲，張亞茹，李宏勝.江蘇部分奶牛場(chǎng)乳腺炎病原菌的分離鑒定、耐藥性及血清型研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2018，40（08）：680-686.

[2]王雪梅，郭紅霞，郭莉娟，林琳，李建龍，代敏，孫豐慧.120株奶牛乳腺炎流行病原菌的分類和耐藥譜分析[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，12（05）：555-560.

[3]董翔宸，馬友記，張勇，胡俊杰，趙興緒.奶牛乳腺炎主要病原菌的藥物敏感性檢測(cè)[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，35（09）：1505-1510.

[4]尹婷慧，王熙濤，徐永平，王麗麗，陳紅莉，吳妍妍，李曉宇.奶牛乳腺炎病原菌的分離、耐藥性分析及其特異性卵黃抗體的體外抑菌效果[J].飼料與畜牧，2015（08）：31-35.

[5]趙香汝，崔紅玉，徐明舉，李繼連.奶牛乳腺炎病原菌的耐藥性分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2007（09）：68.