布病防治工作中檢測制劑和技術(shù)的新動向

阿依江·卡那提拜克 張丹 米吉提·莫合他爾汗

摘 要 布魯氏菌可在人和牲畜間傳染，所引發(fā)的布魯氏菌病具有人畜共患特點。被布魯氏菌感染的動物如果懷孕將會流產(chǎn)，未孕則會導(dǎo)致不孕不育，布魯氏菌感染引發(fā)的疾病將會導(dǎo)致畜牧業(yè)遭受重大經(jīng)濟損失，該病被人傳染后對于人體生命健康極大，布魯氏菌由于可在人群間傳播曾作為生物戰(zhàn)制劑，布魯氏菌檢測技術(shù)受關(guān)注程度較高。

關(guān)鍵詞 布魯氏菌；檢測制劑；檢測新技術(shù)

1 引言

布魯氏菌病可簡稱為補兵，布魯氏菌病臨床確診主要依賴于化驗結(jié)果，需要使用檢測制劑，可知布魯氏菌病的防治工作不能脫離生物檢驗技術(shù)，必須使用相應(yīng)的生物制品進行免疫防治。布魯氏菌診斷制品的質(zhì)量對與患者能否確診得到有效的對癥治療較為關(guān)鍵，對于患者預(yù)后影響較大，同時對于疫情監(jiān)測點評估影響較大[1]。本文旨在分析布魯氏菌的檢測制劑以及有關(guān)檢測新技術(shù)，詳見下文：

2 布魯氏菌檢測制品的淘汰與更新

應(yīng)用于人群中防治布魯氏菌病的生物制品需要秉承安全、敏感性好以及特異性高的之別原則，其中安全性屬于最為重要的原則，應(yīng)用體外診斷的生物制品則要求診斷結(jié)果可靠和準確。

2.1 新制純化布魯氏菌素替代舊菌素

1921年粗制菌素工藝無法測出菌素含量，各個批次間的品質(zhì)控制較難，病人使用后通常會出現(xiàn)嚴重的局部反應(yīng)，例如注射后周圍皮膚會發(fā)生水泡和脫皮，嚴重者還會引發(fā)淋巴結(jié)炎。注射者還會有全身不良反應(yīng)，發(fā)生體溫上升、四肢關(guān)節(jié)疼痛以及全身乏力。對現(xiàn)有菌素進行淘汰后，改進制品質(zhì)量，研制得到純化布魯氏菌素，經(jīng)過動物試驗表明安全性較好，后應(yīng)用于人體安全性好，不良反應(yīng)發(fā)生率較低。

2.2 酸性虎紅抗原取代舊玻片抗原

上世紀初，應(yīng)用玻片凝集試驗屬于檢驗人畜流行疾病的快速篩查方式，可快速檢測，將高濃度菌液放置于高濃度鹽水中，使用結(jié)晶紫與孔雀綠染料進行染色，操作頻繁的情況下將會導(dǎo)致假陽性時。應(yīng)用酸性緩沖玻片抗原可用以取代舊玻片抗原，可降低假陽性檢出率。酸性緩沖玻片抗原利用PH值呈酸性的高濃度軍爺，經(jīng)過標準血清化工序，應(yīng)用虎紅染料進行染色，活化IgG，操作簡便，基本不會產(chǎn)生假陽性現(xiàn)象，判定結(jié)果更加簡便。

3 布魯氏菌檢測技術(shù)

3.1 細菌學(xué)檢測技術(shù)

細菌學(xué)檢測技術(shù)常用于實驗室檢測，檢測所需的動物樣本可從流產(chǎn)胎兒、胎衣、奶樣以及血液中制取，而檢測人體病原菌所需樣本可從尿液、骨髓以及血液中取得。布魯氏菌種屬不同其生長狀況差異也越大，以牛型布魯氏菌為例，從宿主中分離后初期生長速率較慢，同時對于生長環(huán)境的要求較高，必須要適量的二氧化碳，上述特點導(dǎo)致應(yīng)用細菌學(xué)檢測技術(shù)檢測牛型布魯氏菌周期非常長，一般需要二至四周的無菌生長時間，才可得出最終檢測結(jié)果。研究指出應(yīng)用骨髓培養(yǎng)法可縮短培養(yǎng)時間，但該分離技術(shù)費時費力，同時檢測準確性也不高[2]。

3.2 免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)檢測技術(shù)中有血清凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、補體結(jié)合試驗、免疫熒光試驗以及膠體金免疫層析技術(shù)。血液凝集中的試管凝集試驗由于特異性和靈敏度不高，檢驗結(jié)果受人為因素影響較大，實際操作不便捷，因此不主張使用試管凝集試驗，布魯氏菌病的檢驗應(yīng)用試管凝集試驗具有局限性，可采取綜合多種檢測手段的方式用以提升檢測正確率。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)屬于診斷特異性高，同時靈敏度也較高，因此臨床推廣應(yīng)用價值較高。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)可檢測IgG、IgM和IgA抗體，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，用于檢測包括牛、羊和豬在內(nèi)的iELISA檢測方法被建立，利用抗原抗體轉(zhuǎn)移性特點，檢測抗體，其中雙抗夾心法通常終于檢測大分子抗原，競爭法用于檢測小分子抗原。補體結(jié)合試驗雖然特異性強，但是操作較為復(fù)雜，檢測條件較為苛刻，導(dǎo)致實際應(yīng)用受限。免疫熒光檢測法利用布魯氏菌結(jié)合抗體后出現(xiàn)特異性的細菌性熒光特點急性檢測，由于其具有屬特異性，不能區(qū)分牛、羊和豬生物物種。膠體金免疫岑溪技術(shù)屬于新型標記技術(shù)，不僅操作簡單，同時需要的樣本量較少，可節(jié)省檢測資金，不僅適用于診斷布魯氏菌病，同時還可用于流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)場使用，近年來發(fā)展較為廣泛。

3.3 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）檢測、基因檢測以及核酸探針與分子斑點雜交技術(shù)均屬于分子生物學(xué)檢測技術(shù)，可用于檢測布魯氏菌。PCR技術(shù)檢測特異性強，靈敏度高且不會破壞樣本，加上檢驗操作較為簡便因而應(yīng)用范圍越來越廣。應(yīng)用PCR檢測技術(shù)可快速檢測鑒別布魯氏菌，多重PCR和熒光定量PCE由于在檢驗檢疫、診斷以及流行病學(xué)調(diào)查方面的應(yīng)用效果較好，而廣泛應(yīng)用。隨著信息技術(shù)的發(fā)展，PCR結(jié)合芯片技術(shù)和與微流體技術(shù)，進行技術(shù)融合，可同時快速處理和分析大量樣品，可極大程度上提高檢測效率，有助于布魯氏菌快速檢測與分型?；驒z測技術(shù)而非?？煽浚瑧?yīng)用微生物基因測定法測定GC含量與Tm值，通過核算雜交技術(shù)辨別微生物類型非常簡單[3]。核酸探針與分子斑點雜交技術(shù)利用PCR反應(yīng)擴增差異片段后設(shè)計探針，純化后進行斑點雜交。該方法用于檢測布魯氏菌非?？煽?，具備靈敏度好和重復(fù)性好的優(yōu)勢。

4 結(jié)語

綜上可知，當前并未有一種單一的檢測技術(shù)可用于布魯氏菌病檢疫，當前主要的檢測方法為細菌學(xué)檢測和免疫學(xué)檢測，PCR技術(shù)和ELISA檢測方法敏感性和特異性均較高，且具備檢測等待結(jié)果時間短的優(yōu)勢，因此常用于布魯氏菌防治。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，診斷技術(shù)還將會不斷精進，更加先進的檢測方式可用于布魯氏菌病防治中。

參考文獻：

[1]丁雪，王巖，劉麗蓉，肖肖，鄧洪寬，周曉翠.布魯氏菌病檢測和防治方法研究進展[J].中國動物檢疫，2019，36（05）：43-48.

[2]魏春霞，孫淼，趙煒，陳延飛，劉懷東，張敏，李嶺，陳建，才學(xué)鵬，曾巧英，薛青紅.牛布魯氏菌病、結(jié)核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹瀉黏膜病、副流感、傳染性鼻氣管炎可視化基因芯片檢測方法的建立[J].中國獸藥雜志，2019，53（04）：6-15.

[3]趙鴻雁，李積權(quán)，路殿英，樸東日，姜海.一種改良的布魯氏菌病抗體微量凝集檢測方法的建立與評價[J].中國人獸共患病學(xué)報，2019，35（02）：149-152.