保健食品逢泰膠囊中大黃素和大黃酚的含量測定

□ 湯麗昌 北海市食品藥品檢驗所

逢泰膠囊是以澤瀉、生何首烏、荷葉、絞股藍(lán)、紅曲、糊精、硬脂酸鎂為主要成分加工而成的膠囊劑，其中，澤瀉、何首烏是輔助降血脂的主要功效來源，使該膠囊作為保健食品具有降血脂的輔助功效。目前有文獻(xiàn)顯示，澤瀉含有大黃素，何首烏含有大黃素和大黃酚，而大黃素、大黃酚的含量對于臨床用藥的安全性和活性有較大的指導(dǎo)意義[1-3]。2015年版《中國藥典》將何首烏中的大黃素作為質(zhì)量控制成分[4]，然而保健食品的大多數(shù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)并無其含量測定項。本研究采用高效液相色譜法對逢泰膠囊中的大黃素和大黃酚進(jìn)行含量測定，以期為逢泰膠囊產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 儀器

LC-2010A HT型高效液相色譜儀（島津）；S1-T256渦旋混合器；CPX5800H-C超聲波清洗機(jī)（美國必能信上?？茖?dǎo)儀器有限公司）；XA205DU萬分之一電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

大黃素對照品（批號：110756-200110），中國藥品生物制品檢定所提供；大黃酚對照品（批號：110796-201319），中國食品藥品檢定研究所提供；逢泰膠囊，武漢市元大生物科技有限公司提供；甲醇為色譜純（Thermo），磷酸為色譜純（Tedia），超純水（Milipore制備）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Shim-pack VP-ODS色譜柱（4.6×250mm，5μm），以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。流動相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（80∶20），流速為1.0mL/min，紫外檢測波長為254nm。柱溫：30℃，進(jìn)樣量10μL，理論板數(shù)按大黃素計算不低于2000，大黃素和大黃酚的分離度＞1.5。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備

精準(zhǔn)稱取9.14mg大黃素對照品，置于50mL棕色容量瓶中，加入少量甲醇超聲溶解后繼續(xù)用甲醇定容至刻度。搖勻，即得每1mL含有大黃素182.8μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。精準(zhǔn)稱取10.02mg大黃酚對照品，置于250mL棕色容量瓶中，加入少量甲醇超聲溶解后繼續(xù)用甲醇定容至刻度。搖勻，即得每1mL含有大黃素40.08μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備

取批次為20180401的逢泰膠囊10粒，取其內(nèi)容物混合，精密稱取0.2g置于10mL棕色容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲提?。?00W，250KHZ）處理30min，靜置冷卻，用色譜純甲醇定容至容量瓶的刻度，搖勻后用0.22μm微孔濾膜過濾，取濾液即得標(biāo)準(zhǔn)的供試品溶液，備用。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

取不含大黃素、大黃酚的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。

表1 大黃素含量測定結(jié)果

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗

取制備好的對照品溶液、陰性樣品溶液、樣品溶液分別注入液相色譜儀，記錄。結(jié)果表明，陰性溶液在大黃素、大黃酚保留時間處并沒有出現(xiàn)相應(yīng)峰，對照品溶液和樣品溶液理論板數(shù)均大于2000，大黃素和大黃酚的分離度為7.6。

2.3.2 線性關(guān)系考察試驗

吸取對照品溶液（大黃素質(zhì)量濃度為182.8μg/mL，大黃酚質(zhì)量濃度為100.2μg/mL）1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mL，分別置于100mL棕色容量瓶中，然后加入甲醇并稀釋至刻度，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，按“2.1”步驟選定的色譜條件注入對照品待測液，記錄峰面積。以峰面積Y與對照品待測液濃度X進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程Y=19904X-1776.5（r=0.9999），大黃素在1.828～36.56μg/mL線性關(guān)系良好；Y=17692X-577.7（r=0.9999），大黃酚在0.4008～8.016μg/mL線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗

精密吸取“2.3.2”步驟下所得大黃素和大黃酚對照品混合液線性中第3個濃度5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測其峰面積，大黃素的RSD為0.93%，大黃酚的RSD為1.42%。結(jié)果表明，儀器和分析方法的可重復(fù)性均良好，即精密度較好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗

取同一批次供試品（批號：20180401）按“2.2.2”步驟下的制樣方法制備1份供試品溶液，按“2.1”選定的色譜條件分別在供試品溶液制備后0、4、8、12、16、20、24h進(jìn)樣5μL，測定大黃素、大黃酚峰面積，RSD分別為1.46%、1.24%，該結(jié)果表明試驗溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗

精密稱取6份批號為20180401的樣品，按“2.2.2”步驟的制樣方法制備6份供試品溶液，按“2.1”選定的色譜條件下測定大黃素、大黃酚峰面積。結(jié)果顯示，大黃素和大黃酚峰面積分別為RSD=0.97%、RSD=1.69%，表明該分析方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗

精密稱取批號為20180401的樣品6份，分別精密加入0.5mL大黃素、大黃酚對照品溶液。按“2.2.2”步驟的制樣方法制備，按“2.1”選定的色譜條件下，測定大黃素、大黃酚峰面積，按照樣品含量方法操作并計算，大黃素回收率為101.1%，RSD為1.21；大黃酚回收率為96.7%，RSD為1.53。

2.4 樣品測定

精密稱取供試品3批，按“2.2.2”步驟的制樣方法制備供試品溶液，然后按“2.1”選定的色譜條件，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，將所測得的大黃素和大黃酚峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，各樣品兩組分含量見表1。

3 結(jié)論

本研究與文獻(xiàn)報道方法對比發(fā)現(xiàn)[4-5]，樣品用加熱回流和超聲提取大黃素、大黃酚的提取完全程度基本一致。本研究采用的方法簡單便捷、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，試驗操作簡單且回收率高，可為保健食品逢泰膠囊質(zhì)量控制提供依據(jù)。