• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測雞鴨肉中己烯雌酚殘留

    2019-11-16 07:15:52莫紫梅寧芯陳寧周林丹
    肉類研究 2019年9期

    莫紫梅 寧芯 陳寧周 林丹

    摘 要:建立雞鴨肉中己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)殘留的QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。均質(zhì)樣品用水分散后加入乙腈提取,經(jīng)分散固相萃取凈化后,采用XBridge Phenyl-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm)分離,在電噴霧電離負離子模式下以多反應監(jiān)測方式檢測,流動相為水-乙腈。結(jié)果表明:DES在質(zhì)量濃度0.50~20.00 ng/mL范圍內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)為0.999 9;3 個加標水平的平均回收率為70.4%~81.6%,相對標準偏差為3.1%~3.9%;檢出限和定量限分別為0.1、0.4 μg/kg。

    關(guān)鍵詞:QuEChERS;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;己烯雌酚;雞鴨肉

    Abstract: This paper aims to establish a method for the determination of diethylstilbestrol (DES) in chicken and duck meat using QuEChERS sample preparation followed by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). The homogenized sample was dispersed in water and then subjected to the extraction of the analyte with acetonitrile. The chromatographic separation were performed on a XBridge Phenyl-C18 column (150 mm × 2.1 mm, 3.5 μm) by gradient elution after dispersive solid-phase extraction purification. The qualitative and quantitative analysis of DES were operated by electrospray ionization mass spectrometry under the negative mode using multiple reaction monitoring (MRM). Acetonitrile and water were used as the mobile phase. The correlation coefficient of the calibration curve was 0. 999 9 in the concentration range of 0.50 to 20.00 ng/mL. The average recoveries at three spiked concentration levels varied from 70.4% to 81.6% with relative standard deviations (RSD) of 3.1% to 3.9%. The limits of detection (LOD, RS/N ≥ 3) and quantitation (LOQ, RS/N ≥ 10) were 0.1 and 0.4 μg/kg, respectively.

    Keywords: QuEChERS; ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; diethylstilbestrol; chicken and duck meat

    DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20190523-114

    中圖分類號:TS251.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼:A 文章編號:1001-8123(2019)09-0048-05

    引文格式:

    莫紫梅, 寧芯, 陳寧周, 等. QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測雞鴨肉中己烯雌酚殘留[J]. 肉類研究, 2019, 33(9): 48-52. DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20190523-114. ? ?http://www.rlyj.net.cn

    MO Zimei, NING Xin, CHEN Ningzhou, et al. Determination of diethylstilbestrol residues in chicken and duck meat using QuEChERS combined with ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Meat Research, 2019, 33(9): 48-52. DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20190523-114. ? ?http://www.rlyj.net.cn

    己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)屬激素類化合物,是一種能夠縮短動物生長周期、提高養(yǎng)殖效率的生長促進劑,可導致機體代謝紊亂、發(fā)育異常或產(chǎn)生腫瘤,被德國、法國等歐盟國家在食用性動物飼養(yǎng)中列為禁用品[1-3]。農(nóng)業(yè)部193號公告《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》以及農(nóng)業(yè)部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》,均禁止在畜禽水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中使用DES等雌激素。目前,測定食品中DES殘留的方法有液相色譜(liquid chromatography,LC)[4-6]、氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)[7-9]、LC-MS/MS[10-12]等方法。LC法易產(chǎn)生假陽性結(jié)果;GC-MS法樣品需衍生化處理,步驟繁瑣;LC-MS/MS技術(shù)具有高選擇性和高靈敏度,且樣品前處理簡單。

    液-液分配或固相萃取等傳統(tǒng)前處理方法耗時長、有機溶劑損耗大,不利于環(huán)保。分散固相萃取QuEChERS(Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe)是近年發(fā)展起來的一種快速、簡便、有效、可靠、安全的樣品前處理技術(shù)[13]。本研究采用QuEChERS技術(shù)進行樣品前處理,建立QuEChERS-超高效液相色譜(ultra high performance liquid chromatography,UPLC)-MS/MS法檢測雞鴨肉中DES殘留的方法,可較好地排除樣品基質(zhì)干擾,提高檢測效率,節(jié)約時間,適合大批量雞鴨肉樣品的快速檢測。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    雞鴨肉,來自廣西區(qū)監(jiān)督抽檢及風險監(jiān)測樣品。實驗用水均為超純水;乙腈(色譜純) 德國Merck公司;無水乙酸鈉、無水硫酸鎂、中性氧化鋁、氯化鈉(均為分析純) 國藥集團化學試劑有限公司;N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)吸附劑?德國CNW公司;DES標準品(純度≥99.5%) 德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司;內(nèi)標物DES-D8標準品(純度≥98.0%) 美國CIL公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Shimadzu DGU-20A超高效液相色譜儀 日本島津公司;QTRAP 4500 MS四極桿質(zhì)譜儀(配備電噴霧離子源) 美國AB Sciex公司;S180H超聲波發(fā)生器德國Elma公司;3-30K離心機 德國Sigma公司;N-EVAP水浴式氮吹濃縮儀 美國Organomation Associates公司;Vortex-genie渦旋混勻器 美國Scientific Industries公司。

    1.3 方法

    1.3.1 溶液配制

    1.3.1.1 標準工作液的配制

    精密稱取DES標準品,置于25 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解定容至刻度,配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的DES標準儲備液,密封,于-18 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?,有效? 個月。精確吸取DES標準儲備液1.00 mL,配制成質(zhì)量濃度為50 ng/mL的DES標準工作液,備用。

    1.3.1.2 內(nèi)標工作液的配制

    精密稱取內(nèi)標物DES-D8標準品,置于100 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解定容至刻度,配制成質(zhì)量濃度為5 μg/mL的DES-D8內(nèi)標儲備液,密封,于-18 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。精確吸取DES-D8內(nèi)標儲備液1.00 mL,配制成質(zhì)量濃度為100 ng/mL的DES-D8內(nèi)標工作液,備用。

    1.3.1.3 混合標準工作溶液的配制

    精確吸取50 ng/mL的DES標準工作液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 mL,分別置于10 mL棕色容量瓶中,分別加入DES-D8內(nèi)標工作液(100 ng/mL)1.0 mL,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,配制成DES質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的混合標準工作溶液,其中DES-D8內(nèi)標的質(zhì)量濃度均為10 ng/mL。

    1.3.1.4 基質(zhì)匹配混合標準工作溶液的配制

    準確稱取空白基質(zhì)樣品5.00 g,按1.3.2節(jié)的方法進行樣品前處理,上清液轉(zhuǎn)移至氮吹管中,分別加入上述混合標準工作溶液各1.00 mL,氮氣吹干后,加入1.00 mL體積分數(shù)50%乙腈溶液復溶,超聲30 s,渦旋混勻,過0.22 μm濾膜,即得基質(zhì)匹配混合標準工作溶液。

    1.3.2 樣品前處理

    1.3.2.1 樣品提取

    雞鴨肉均質(zhì)后,準確稱取試樣5.00 g,置于帶螺旋蓋的50 mL聚丙烯離心管中,加入10 mL水,渦旋1 min后,準確加入10.00 mL乙腈,渦旋2 min,加入QuEChERS鹽析劑(4.0 g無水硫酸鎂、1.0 g氯化鈉),快速搖勻,冰水浴15 min降溫,4 000 r/min離心10 min,上清液轉(zhuǎn)移至15 mL聚丙烯離心管中,備用。

    1.3.2.2 樣品凈化

    將QuEChERS凈化粉(含500 mg無水硫酸鎂、500 mg中性氧化鋁及200 mg PSA)加入裝有上清液的15 mL離心管中,渦旋1 min,4 000 r/min離心10 min,離心后樣品分層,取上層清液至10 mL具塞刻度試管,45 ℃水浴,氮吹濃縮至近干;加入1.0 mL體積分數(shù)50%乙腈溶液復溶,超聲30 s,渦旋混勻,過0.22 μm濾膜,待上機測定。

    1.3.3 UPLC-MS/MS測定

    1.3.3.1 色譜條件

    色譜條件:XBridge Phenyl-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,3.5 μm);柱溫40 ℃;流速0.3 mL/min;進樣量10 μL;流動相A為水,流動相B為乙腈,梯度洗脫程序見表1。

    1.3.3.2 質(zhì)譜條件

    電噴霧電離負離子模式(electron spray ionization,ESI-),多反應監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM)模式,電噴霧電壓-4 500 V,離子源溫度650 ℃,氣簾氣壓241 kPa,霧化氣壓、輔助氣壓均為345 kPa。MRM相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表2。

    1.3.3.3 上機測定

    在上述測定條件下,分別對樣品溶液、基質(zhì)匹配混合標準溶液進行測定,以基質(zhì)匹配標準溶液保留時間和定性、定量離子為依據(jù)進行定性,以定量離子色譜峰面積與對應內(nèi)標峰面積的比值計算樣品中待測物的含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 樣品前處理條件的優(yōu)化

    雞鴨肉中的脂肪、蛋白質(zhì)等組分會產(chǎn)生基質(zhì)抑制效應[14-15],造成被測物靈敏度降低,需對樣品中的目標物進行提取凈化。根據(jù)DES易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有機試劑的化學性質(zhì),比較甲醇、乙腈、甲醇水溶液、乙腈水溶液及乙酸乙酯的提取效果。結(jié)果表明:用乙酸乙酯提取的樣品,后續(xù)凈化困難,回收率低,與李雪等[16]報道的以乙酸乙酯提取牛乳樣品中的DES后續(xù)凈化較困難、回收率較低一致;甲醇、乙腈與水可以互溶,具有良好的蛋白沉淀能力,同時可將雞鴨肉中部分水溶性蛋白提取出來,帶來雜質(zhì);甲醇水溶液、乙腈水溶液、甲醇等由于沸點較高或與水互溶后沸點提高,不易蒸干,考慮到后續(xù)凈化過程,本研究采用乙腈為提取溶劑。

    樣品經(jīng)過乙腈沉淀蛋白質(zhì)后,除去了大部分干擾物,但仍有少量脂肪雜質(zhì)會對目標物造成一定影響。比較弗羅里硅土、中性氧化鋁、C18固相萃取小柱及QuEChERS技術(shù)等凈化方式。結(jié)果表明:單獨使用弗羅里硅土或中性氧化鋁的脂肪去除能力尚可,平均回收率在60%~72%之間,樣品基線較平整,回收率較好,能夠基本滿足分析要求[12,14];而采用C18固相萃取小柱凈化的樣品,DES回收率明顯較低且重復性差;采用QuEChERS技術(shù)凈化的樣品,DES回收率均在70%以上,重復性相對較高,故采用QuEChERS技術(shù)進行凈化。

    QuEChERS樣品前處理技術(shù)有機溶劑用量少、耗時短,加入中性氧化鋁和PSA除去樣品中的雜質(zhì),加入無水硫酸鎂吸收樣品中的水分等[16-18],同時可分散樣品,增加與萃取溶劑的接觸面[19-21],提高回收率。為了獲得最佳的樣品提取效果和回收率,研究PSA(50~300 mg)、無水硫酸鎂(500~1 000 mg)及中性氧化鋁(200~1 000 mg)按不同比例組合的凈化效果。結(jié)果表明,采用200 mg PSA、500 mg無水硫酸鎂及500 mg中性氧化鋁為凈化劑組合進行分散固相萃取時,樣品溶液澄清,基質(zhì)干擾較小,回收率最佳,為70.4%~81.6%,滿足目標物痕量分析的要求。

    2.2 基質(zhì)效應的消除

    基質(zhì)效應是客觀存在且不可能消除的,主要是由于基質(zhì)成分和目標化合物在電噴霧離子源進行離子化時相互競爭的結(jié)果,包括基質(zhì)增強效應和基質(zhì)抑制效應。在LC-MS分析中,基質(zhì)效應影響儀器的靈敏度和重復性,是影響可靠定性及準確定量的重要因素,這在動物源食品及生物樣本中表現(xiàn)尤為明顯。為了補償基質(zhì)效應給分析結(jié)果帶來的影響,通常采用同位素內(nèi)標、稀釋樣品溶液、配制基質(zhì)匹配標準溶液等方法。本研究采用配制基質(zhì)匹配標準溶液的方法,很好地抵消了樣品的基質(zhì)效應,得到的方法學指標能滿足殘留檢測的要求。

    2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    DES的化學結(jié)構(gòu)中含有酚羥基,易脫去一個H+而形成離子峰[M-H]-,適合選用ESI-模式,ESI-模式下產(chǎn)生的母離子為[M-H]-。采用注射泵直接進樣,將質(zhì)量濃度為1 μg/mL的標準溶液以5 μL/min流速注入離子源中進行一級質(zhì)譜分析(MS2 Scan),得到分子離子峰,再對準分子離子峰進行二級質(zhì)譜分析,得到相應的碎片離子,選擇3 個豐度較高的特征碎片離子,其中豐度最高的作為定量離子,其余做為定性離子,進行碰撞能量、去簇電壓、噴霧電壓等參數(shù)優(yōu)化,最后得到DES的3 個碎片離子MRM掃描時對應的質(zhì)譜參數(shù)[22-24]。

    2.4 色譜條件的優(yōu)化

    由于DES含有酚羥基結(jié)構(gòu),在ESI-模式下,流動相中加入乙酸、乙酸銨、甲酸等會抑制其響應[25-27],流動相中加入0.1%氨水則可提高靈敏度,但流動相pH值會達到10左右,超過普通硅膠基質(zhì)C18柱的pH值耐受范圍,需選用pH值耐受范圍廣的色譜柱[28-30]。在本研究優(yōu)化的色譜條件下,不加0.1%氨水也能獲得良好的峰形和靈敏度,故選取乙腈-水作為流動相。選用可耐受pH值范圍2.0~12.0的XBridge Phenyl-C18柱(2.1 mm×150 mm,3.5 μm)作為分離柱。

    流速大小影響色譜柱及系統(tǒng)的壓力、樣品組分的分離效果和出峰時間,流速太大,系統(tǒng)的壓力太高,容易引起柱頭塌陷,流速太小,出峰時間延長,通過查閱相關(guān)研究[18,20,23],流速確定為0.3 mL/min。采用優(yōu)化后的條件,DES及其內(nèi)標物DES-D8的MRM提取離子流如圖1所示。

    2.5 線性范圍、方法檢出限與定量限

    對配制好的DES標準工作溶液進行測定,以DES定量離子色譜峰面積與對應內(nèi)標峰面積的比值為縱坐標(y),標準溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(x,ng/mL),進行線性回歸分析。結(jié)果表明:DES在質(zhì)量濃度0.50~20.00 ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,線性方程為y=0.927 00x+0.004 76(r=0.999 9)。準確稱取雞鴨肉空白樣品,加入一定量DES和DES-D8標準溶液,按1.3.2節(jié)的方法進行樣品前處理,以3 倍信噪比(RS/N)計算得到DES的方法檢出限為0.1 μg/kg,以10 倍RS/N計算得到DES的方法定量限為0.4 μg/kg。

    2.6 回收率與精密度

    采用內(nèi)標定量法,準確稱取雞鴨肉空白樣品進行加標回收實驗,加標量分別為0.4、0.8、4.0 μg/kg,每個加標量設(shè)3 個平行,按1.3.2節(jié)的方法進行樣品前處理,并做空白實驗。

    由表3可知,雞鴨肉中DES的加標回收率為70.4%~81.6%,相對標準偏差為3.1%~3.9%,表明方法的準確度與精密度較好,符合殘留分析要求。圖2為加標量0.8 μg/kg的樣品總離子流圖。

    2.7 實際樣品分析

    應用建立的方法對廣西區(qū)監(jiān)督抽檢和風險監(jiān)測的103 批雞鴨肉樣品進行DES殘留量測定,結(jié)果表明,樣品中均未檢出DES。

    3 結(jié) 論

    建立了雞鴨肉中DES殘留量的QuEChERS-UPLC-MS/MS測定方法,以中性氧化鋁、無水硫酸鎂和PSA為基質(zhì)凈化劑,用乙腈對樣品進行提取,UPLC-MS/MS法檢測,內(nèi)標法定量。結(jié)果表明,樣品加標回收率和樣品間的測定重復性較好,樣品前處理過程相對簡單,可較好地排除樣品基質(zhì)的干擾,且分析時間僅6 min左右,提高了檢測效率,適合大批量雞鴨肉樣品的快速檢測。

    在樣品前處理條件和色譜條件優(yōu)化中,提取溶劑和凈化方式均與回收率和提取率有密切關(guān)系。合適的凈化方式可以有效將基質(zhì)干擾效應降低,減少雜質(zhì)對目標物的影響以及對儀器的污染和損害。色譜條件則影響目標物的響應和分離效果。故選擇合適的提取溶劑、凈化方式及色譜條件是日常食品檢測中必須考慮的因素。本研究建立的方法適合大批量雞鴨肉中的DES檢測,對于其他類型樣品則需進一步研究探討。

    參考文獻:

    [1] 龐國芳. 農(nóng)藥殘留高通量檢測技術(shù). 第2卷: 動物源產(chǎn)品[M]. 北京: 科學出版社, 2013: 14-27.

    [2] 李維紅, 熊琳, 高雅琴, 等. HPLC法同時測定牛羊肉中4 種雌激素的殘留量[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2014(6): 207-209. DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2014.0447.

    [3] 黃璐, 張勇民, 鄭琦. SPE-HPLC法檢測食品中多種痕量雌激素[J]. 江漢大學學報(自然科學版), 2014, 42(1): 55-58. DOI:10.16389/j.cnki.cn42-1737/n.2014.01.002.

    [4] 李嫻. 高效液相色譜測定牛肉中己烯雌酚殘留量方法的探討[J]. 福建分析測試, 2016, 25(4): 26-29. DOI:10.3969/j.issn.1009-8143.2016.04.05.

    [5] 李亞男. 高效液相色譜法測定雞肉中的己烯雌酚和甲睪酮殘留量[J]. 今日藥學, 2016, 26(7): 491-493.

    [6] 羅慧玉, 徐鵬, 閆偉偉, 等. 改進MSPD-HPLC法快速檢測豬血豆腐中鎮(zhèn)靜劑及雌激素殘留[J]. 食品研究與開發(fā), 2017, 38(4): 147-150. DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2017.04.032.

    [7] 錢宗耀, 張維維, 劉河疆. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水中己烯雌酚殘留[J]. 環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù), 2017, 29(2): 50-52. DOI:10.19501/j.cnki.1006-2009.20170322.003.

    [8] 王宇, 孔祥瑞, 李成久. 氣相色譜-質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中己烯雌酚的不確定度分析評定[J]. 水產(chǎn)科學, 2016, 35(3): 284-288. DOI:10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.03.016.

    [9] 林小莉, 李寧, 霍峰, 等. 氣相色譜-質(zhì)譜法同時測定飼料中6 種雌激素類藥物[J]. 分析測試學報, 2016, 35(3): 322-326. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.03.011.

    [10] 權(quán)伍英, 郭廓, 劉洋. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定牛奶中的己烯雌酚殘留量[J]. 河南預防醫(yī)學雜志, 2018, 29(9): 663-665. DOI:10.13515/j.cnki.hnjpm.1006-8414.2018.09.008.

    [11] 張?zhí)戽?馬雷, 玄兵, 等. 飼料中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮和己烯雌酚的測定: 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[J]. 現(xiàn)代畜牧獸醫(yī), 2018(2): 18-23.

    [12] 趙昕, 張占恩, 張磊, 等. 基質(zhì)固相分散萃取/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定污泥中的6 種雌激素[J]. 分析測試學報, 2015, 34(1): 56-61. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2015.01.008.

    [13] 羅輝泰, 黃曉蘭, 吳惠勤, 等. QuEChERS/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定雞鴨肉中30 種激素類及氯霉素類藥物殘留[J]. 分析測試學報, 2011, 30(12): 1329-1337. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2011.12.001.

    [14] 馬麗莎, 戴曉欣, 謝文平, 等. QuEChERS/GC-MS法同時測定魚、蝦中的雌二醇與己烯雌酚殘留[J]. 分析測試學報, 2015, 34(1): 62-66. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2015.01.009.

    [15] 白志榮, 李娜林, 高娃, 等. 高效液相色譜-質(zhì)譜法對水產(chǎn)品中孔雀石綠、隱性孔雀石綠及己烯雌酚的測定[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技, 2013, 43(5): 14-16. DOI:10.3969/j.issn.1007-0907.2015.05.004.

    [16] 李雪, 牟光慶, 陳歷俊, 等. 固相萃取-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定原料奶中5 種環(huán)境雌激素殘留量的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(9): 293-296. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2013.09.020.

    [17] 羅輝泰, 黃曉蘭, 吳惠勤, 等. 分散固相萃取/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測定飼料中87 種藥物殘留[J]. 分析測試學報, 2015, 34(9): 14-16. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2015.09.001.

    [18] 羅輝泰, 謝夢婷, 黃曉蘭, 等. 分散固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定畜禽肉中63 種獸藥殘留[J]. 色譜, 2015, 33(4):354-362. DOI:10.3724/SP.J.1123.2014.12005.

    [19] 王春輝, 蒲云霞, 徐曉楓, 等. 固相萃取-反相高效液相色譜法測定肌肉中的己烯雌酚[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2013, 23(18): 3492-3494.

    [20] 黃雪玲, 戚雋冤, 魏厚道, 等. 固相萃取-反相高效液相色譜法同時測定水產(chǎn)品中的己烯雌酚和甲基睪丸酮[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2015, 43(5): 285-286. DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2015.05.095.

    [21] 張曉璐, 丁建, 汪嘉麗. UPLC-QTOF-MS法快速測定化妝品中添加的7 種性激素[J]. 海峽藥學, 2015, 27(10): 36-39.

    [22] 崔向云, 張雪峰, 李照, 等. UPLC-MS/MS法測定牛乳中己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮殘留[J]. 中國乳品工業(yè), 2015, 43(10): 44-46.

    [23] 韓迪, 張艷, 周建于, 等. 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞肉中5 種雌激素殘留[J]. 昆明醫(yī)科大學學報, 2014, 35(7): 32-36.

    [24] 張秋菊, 曹林波, 翁少梅, 等. 固相微萃取-高效液相色譜法測定牛奶和肉類中己烯雌酚、丙酸睪酮和雙酚A[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2017, 27(5): 635-638.

    [25] 陽洪波, 古麗君, 林業(yè)剛. UPLC-MS/MS同時測定保健飲品中的3 種雌激素[J]. 食品工業(yè), 2015, 36(5): 271-274.

    [26] 張振霖. 高效液相色譜法檢測鱸魚中己烯雌酚含量[J]. 福建水產(chǎn), 2013, 35(2): 124-128. DOI:10.14012/j.cnki.fjsc.2013.02.002.

    [27] 李佩佩, 郭遠明, 陳雪昌, 等. 凝膠滲透色譜-固相萃取/高效液相色譜法同時測定水產(chǎn)品甲基睪丸酮和己烯雌酚[J]. 分析測試學報, 2013, 32(2): 267-270. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2013.02.023.

    [28] 朱金蘭, 王菁, 潘迎輝, 等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中己烯雌酚的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2015, 43(12): 328-330.

    [29] 魏斌, 陸井蓮, 魏云計, 等. 氣質(zhì)聯(lián)用法檢測水產(chǎn)品中己烯雌酚含量并用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜驗證[J]. 檢驗檢疫學刊, 2015, 25(1): 32-35; 66. DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2015.12.104.

    [30] 隆雪明, 匡光偉, 陳福華, 等. 高效液相色譜法測定飼料中雌二醇、炔雌醇和己烯雌酚的含量[J]. 飼料研究, 2017(2): 27-29. DOI:10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2017.02.007.

    黄片播放在线免费| 亚洲五月婷婷丁香| 成年美女黄网站色视频大全免费| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 免费观看a级毛片全部| 国产成人影院久久av| 视频在线观看一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲国产精品国产精品| 成年av动漫网址| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 晚上一个人看的免费电影| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲成av片中文字幕在线观看| xxx大片免费视频| 国产免费福利视频在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 成年人黄色毛片网站| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品自拍成人| 欧美另类一区| 亚洲三区欧美一区| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 日韩人妻精品一区2区三区| 电影成人av| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲av国产av综合av卡| 免费在线观看黄色视频的| 青春草亚洲视频在线观看| 手机成人av网站| 国产又爽黄色视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 另类亚洲欧美激情| 日本av免费视频播放| 久久热在线av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲人成电影免费在线| 国产免费视频播放在线视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黑丝袜美女国产一区| 午夜老司机福利片| 老司机深夜福利视频在线观看 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产99久久九九免费精品| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 少妇粗大呻吟视频| 免费看不卡的av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久九九热精品免费| 亚洲国产欧美在线一区| 精品国产国语对白av| 丝袜在线中文字幕| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产成人av教育| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 老司机亚洲免费影院| 自线自在国产av| 国产成人一区二区在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品亚洲av一区麻豆| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美日韩黄片免| 91精品三级在线观看| 一区在线观看完整版| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜精品国产一区二区电影| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜免费成人在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品人妻久久久影院| 热99国产精品久久久久久7| 免费少妇av软件| 亚洲黑人精品在线| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 老熟女久久久| a级毛片在线看网站| 久久久精品94久久精品| 婷婷成人精品国产| 叶爱在线成人免费视频播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品久久久久成人av| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产免费福利视频在线观看| 人人澡人人妻人| 欧美 日韩 精品 国产| 岛国毛片在线播放| e午夜精品久久久久久久| 无限看片的www在线观看| 免费少妇av软件| 一级片免费观看大全| 中国国产av一级| 久久久久久免费高清国产稀缺| 人妻一区二区av| 波多野结衣一区麻豆| 国产免费视频播放在线视频| 精品视频人人做人人爽| 国产精品一国产av| 最近手机中文字幕大全| 青春草视频在线免费观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 成人黄色视频免费在线看| 一本色道久久久久久精品综合| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲久久久国产精品| 精品国产乱码久久久久久小说| netflix在线观看网站| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品在线电影| 性高湖久久久久久久久免费观看| 婷婷色av中文字幕| 午夜免费成人在线视频| videos熟女内射| 十八禁网站网址无遮挡| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 九草在线视频观看| 大片电影免费在线观看免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 99国产综合亚洲精品| 一级片'在线观看视频| 亚洲视频免费观看视频| 少妇人妻 视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩视频在线欧美| 日本色播在线视频| 一本综合久久免费| 国产伦理片在线播放av一区| 日韩大片免费观看网站| 另类精品久久| 色网站视频免费| 日韩av免费高清视频| 日韩一区二区三区影片| 最近中文字幕2019免费版| 大片电影免费在线观看免费| 成年av动漫网址| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产99久久九九免费精品| 91成人精品电影| 亚洲黑人精品在线| 亚洲成人手机| 国产不卡av网站在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| av有码第一页| svipshipincom国产片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品少妇久久久久久888优播| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美在线一区亚洲| 大片免费播放器 马上看| 国产一区有黄有色的免费视频| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲国产精品国产精品| 久久性视频一级片| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 一本综合久久免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一个人免费看片子| 99国产综合亚洲精品| 精品久久蜜臀av无| 婷婷色综合www| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 色婷婷av一区二区三区视频| 国产高清国产精品国产三级| 秋霞在线观看毛片| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日本a在线网址| 精品欧美一区二区三区在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美黄色淫秽网站| 飞空精品影院首页| 中国美女看黄片| 一级毛片女人18水好多 | 亚洲国产精品一区三区| av在线老鸭窝| 99热国产这里只有精品6| 手机成人av网站| 岛国毛片在线播放| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 最黄视频免费看| 麻豆av在线久日| 极品人妻少妇av视频| 中文字幕色久视频| 美女福利国产在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲人成网站在线观看播放| cao死你这个sao货| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99国产精品一区二区三区| 欧美人与善性xxx| 亚洲av男天堂| 性色av一级| 免费观看av网站的网址| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲人成网站在线观看播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 一级毛片女人18水好多 | 久久精品久久精品一区二区三区| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲av男天堂| 自线自在国产av| 久久精品成人免费网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 丝瓜视频免费看黄片| 丝袜人妻中文字幕| 老司机影院成人| 国产在线免费精品| 天堂8中文在线网| 在线观看一区二区三区激情| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| av在线播放精品| 午夜免费观看性视频| 国产麻豆69| 亚洲欧美激情在线| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲色图综合在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品三级大全| 免费少妇av软件| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品中文字幕在线视频| 嫁个100分男人电影在线观看 | 超色免费av| 一本大道久久a久久精品| 国产在线视频一区二区| 国产精品一区二区免费欧美 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 精品免费久久久久久久清纯 | 男女无遮挡免费网站观看| 51午夜福利影视在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一级a爱视频在线免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 视频区图区小说| 中文字幕最新亚洲高清| 色婷婷久久久亚洲欧美| 搡老岳熟女国产| 成在线人永久免费视频| 亚洲av成人精品一二三区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产在线视频一区二区| 日本av免费视频播放| 欧美大码av| 在线观看人妻少妇| av片东京热男人的天堂| 韩国精品一区二区三区| bbb黄色大片| 国产视频一区二区在线看| 黄频高清免费视频| 一级毛片我不卡| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲情色 制服丝袜| 午夜福利乱码中文字幕| av网站在线播放免费| 亚洲精品国产av蜜桃| 成在线人永久免费视频| 午夜免费鲁丝| 日韩视频在线欧美| 麻豆国产av国片精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲情色 制服丝袜| 久热这里只有精品99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 91国产中文字幕| 97人妻天天添夜夜摸| 男女之事视频高清在线观看 | 亚洲成人免费av在线播放| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 在线观看一区二区三区激情| 男女免费视频国产| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美黑人精品巨大| 美女大奶头黄色视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 婷婷色av中文字幕| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久精品国产欧美久久久 | 久久亚洲国产成人精品v| 国产成人啪精品午夜网站| 少妇精品久久久久久久| 日韩中文字幕视频在线看片| 一个人免费看片子| 精品久久蜜臀av无| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一个人免费看片子| 国产精品人妻久久久影院| av在线app专区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美日韩亚洲高清精品| 1024视频免费在线观看| 亚洲成人手机| a级片在线免费高清观看视频| 1024视频免费在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 国产成人系列免费观看| 男女下面插进去视频免费观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 啦啦啦啦在线视频资源| 叶爱在线成人免费视频播放| 黑人猛操日本美女一级片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美黑人精品巨大| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产成人91sexporn| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲av男天堂| 男女无遮挡免费网站观看| 黄色一级大片看看| 久久久国产一区二区| 丁香六月欧美| 亚洲色图综合在线观看| 日本91视频免费播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产高清videossex| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲一码二码三码区别大吗| 美女福利国产在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲精品自拍成人| 亚洲av片天天在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 成人手机av| 久久精品国产综合久久久| av视频免费观看在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲专区国产一区二区| 五月开心婷婷网| 欧美精品av麻豆av| 深夜精品福利| 免费在线观看日本一区| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜91福利影院| 国产高清不卡午夜福利| 一本大道久久a久久精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲精品国产av成人精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品久久久久成人av| 精品免费久久久久久久清纯 | 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩一本色道免费dvd| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品国产区一区二| 99热国产这里只有精品6| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 男女午夜视频在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产xxxxx性猛交| 在线av久久热| 国产在线观看jvid| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99九九在线精品视频| 亚洲av美国av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 丝瓜视频免费看黄片| 久久精品亚洲av国产电影网| 老司机影院成人| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲中文日韩欧美视频| www.999成人在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产成人av激情在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 精品国产一区二区久久| 国精品久久久久久国模美| av欧美777| 亚洲人成电影免费在线| 日韩一区二区三区影片| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲国产欧美网| 久久久久精品人妻al黑| av一本久久久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产成人av教育| 亚洲精品国产区一区二| 麻豆av在线久日| 老司机影院成人| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 中文字幕色久视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产精品 欧美亚洲| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 黄色片一级片一级黄色片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 天天操日日干夜夜撸| 9191精品国产免费久久| 国产在线视频一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99国产综合亚洲精品| 黄色a级毛片大全视频| 久热这里只有精品99| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲少妇的诱惑av| 最黄视频免费看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 男女边吃奶边做爰视频| av天堂在线播放| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 韩国精品一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 亚洲国产精品999| 久久 成人 亚洲| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一区福利在线观看| 精品一区在线观看国产| 岛国毛片在线播放| 欧美国产精品va在线观看不卡| 1024视频免费在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品人妻久久久影院| av在线老鸭窝| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 男女无遮挡免费网站观看| 在线av久久热| 99久久人妻综合| 久久九九热精品免费| 一边摸一边做爽爽视频免费| cao死你这个sao货| 欧美性长视频在线观看| 免费高清在线观看日韩| 成年人午夜在线观看视频| 一区二区三区精品91| 久久久精品区二区三区| 18在线观看网站| 久久久久国产精品人妻一区二区| 在线看a的网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 另类亚洲欧美激情| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 老熟女久久久| 日韩伦理黄色片| 丝袜在线中文字幕| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲国产精品999| 七月丁香在线播放| 久久影院123| 人妻 亚洲 视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 午夜福利一区二区在线看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品福利观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 大香蕉久久网| 国产一区二区 视频在线| 国产欧美日韩一区二区三 | 日韩伦理黄色片| 中文字幕亚洲精品专区| 免费在线观看黄色视频的| 蜜桃国产av成人99| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品偷伦视频观看了| 九色亚洲精品在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美日韩精品网址| 1024视频免费在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 水蜜桃什么品种好| 老鸭窝网址在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 视频在线观看一区二区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| av福利片在线| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久人妻熟女aⅴ| 日韩免费高清中文字幕av| 最近中文字幕2019免费版| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产福利在线免费观看视频| 欧美日韩av久久| 久久久亚洲精品成人影院| 国产黄色视频一区二区在线观看| 久久九九热精品免费| 少妇精品久久久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 大片免费播放器 马上看| 国产三级黄色录像| 美女福利国产在线| 成在线人永久免费视频| 一区二区三区乱码不卡18| 大话2 男鬼变身卡| 国产黄色视频一区二区在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 一二三四在线观看免费中文在| 一区二区三区精品91| 亚洲精品国产区一区二| 日本一区二区免费在线视频| 涩涩av久久男人的天堂| xxx大片免费视频| 午夜福利一区二区在线看| 久久热在线av| 国产在线免费精品| 91九色精品人成在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 手机成人av网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 人妻 亚洲 视频| 9191精品国产免费久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 看免费av毛片| 国产精品 国内视频| 国产在线一区二区三区精| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人欧美| 一边亲一边摸免费视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美成人午夜精品| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 两人在一起打扑克的视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 女性被躁到高潮视频| 在线观看免费午夜福利视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 高清av免费在线| 亚洲,欧美精品.| 99国产综合亚洲精品| 日韩免费高清中文字幕av| 日韩av在线免费看完整版不卡| 晚上一个人看的免费电影| 男人操女人黄网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产男人的电影天堂91| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲精品乱久久久久久| 考比视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 午夜福利在线免费观看网站| 在线 av 中文字幕| 只有这里有精品99| 嫩草影视91久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 捣出白浆h1v1| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 中国国产av一级| 男女免费视频国产| 99久久人妻综合| 高潮久久久久久久久久久不卡| 伊人亚洲综合成人网| 十八禁高潮呻吟视频| 黄色怎么调成土黄色| 男女边摸边吃奶| 国产一区有黄有色的免费视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲人成电影观看| 搡老岳熟女国产| 色播在线永久视频| 男人操女人黄网站| 国产精品国产av在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干|