新生鼠腎積水病腎組織轉化生長因子β1、單核細胞趨化蛋白-1、胰島素樣生長因子-1、內皮素-1蛋白水平表達變化的意義

田文超　馬洪　劉賢賢　鄭步峰　傅廷亮

[摘要]目的 探討新生鼠腎積水病腎組織轉化生長因子β1（TGF-β1）、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）、內皮素-1（ET-1）蛋白水平表達變化的意義。方法 選取新生48 h內的Wistar鼠72只，隨機分為6組，每組12只，隨機選擇1組作為對照組，其余5組均制作成輸尿管左側部分梗阻的動物模型。通過HE染色法觀察病腎組織的病理結構變化并對病腎組織做出相應的病理學分級;通過免疫組化SP法檢測新生鼠的腎臟組織中TGF-β1、MCP-1、IGF-1、ET-1的蛋白水平表達情況。結果 在梗阻解除后12周，模型組中TGF-β1的蛋白表達量與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;模型組的ET-1、MCP-l蛋白表達量（6.20±1.16，3.34±0.06）高于對照組（2.27±0.73，0.71±0.25），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;模型組的IGF-1蛋白表達量（18.12±1.08）低于對照組（28.38±4.82），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組各病理學分級（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級）新生鼠的TGF-β1蛋白表達量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組Ⅱ級新生鼠的ET-1、MCP-1蛋白表達量與Ⅰ級的比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級的ET-1、MCP-1蛋白表達量高于Ⅱ級，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅰ級，模型組Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅲ級，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），模型組Ⅱ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量與Ⅲ級比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1的蛋白表達量在梗阻解除后的不同時間點比較：梗阻解除后6、8、12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達量均低于梗阻解除后2周，IGF-1蛋白表達量高于梗阻解除后2周，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組中梗阻解除后2周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達量與梗阻解除后0周比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。模型組中梗阻解除后8周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達量與梗阻解除后6周比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達量均低于梗阻解除后8周，IGF-1蛋白表達量高于梗阻解除后8周，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。TGF-β1的蛋白表達量與病理學分級均成正相關關系（r=0.873，P<0.01）;ET-1、MCP-1的蛋白表達量與病理學分級均成正相關關系（r=0.579、0.637，P<0.05）;IGF-1的蛋白表達量與病理學分級無明顯的相關性（P>0.05）。結論 病腎組織的組織病理學改變隨梗阻解除時間延長而逐漸恢復。TGF-β1的蛋白水平表達隨梗阻病理學分級的增加而增加，隨梗阻解除的時間延長而逐漸下降。TGF-β1可作為新生鼠腎積水病腎的損害程度及恢復情況判定的可靠指標。

[關鍵詞]新生鼠;腎積水;蛋白水平

[中圖分類號] R693 ? ? [文獻標識碼] A ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）9（b）-0015-06

Significance of expression changes of transforming growth factor β1， monocyte chemoattractant protein-1， insulin-like growth factor-1， endothelin-1 proteins in renal tissues of neonatal rats with hydronephrosis

TIAN Wen-chao1? ?MA Hong2? ?LIU Xian-xian3? ?ZHENG Bu-feng1? ?FU Ting-liang1

1. Department of Pediatric Surgery， Affiliated Hospital of Binzhou Medical College， Shandong Province， Binzhou? ?256603， China; 2. Department of Pediatric Surgery， Affiliated Hospital of Zunyi Medical College， Guizhou Province， Zunyi? ?563003， China; 3. Department of Infectious Diseases， Affiliated Hospital of Binzhou Medical College， Shandong Province，? Binzhou? ?256603， China

[Abstract] Objective To investigate the significance of changes in the expression of transforming growth factor β1 （TGF-β1）， monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1）， insulin-like growth factor-1 （IGF-1） and endothelin-1 （ET-1） proteins in renal tissue of neonatal rat hydronephrosis. Methods A total of 72 Wistar rats within 48 h of newborn were selected and randomly divided into 6 groups with 12 rats in each group. One group was randomly selected as the control group， the other 5 groups were all made into animal models of partial obstruction of the left ureter. The structural changes of the diseased kidney tissues were observed by HE staining and the pathological grades of the diseased kidney tissues were made accordingly. The expression of TGF-β1， MCP-1， IGF-1 and ET-1 in kidney tissue of Wistar rats were detected by immunohistochemical SP method. Results At 12 weeks after the obstruction was relieved， the protein expression of TGF-β1 in the model group was not significantly different from that in the control group （P>0.05）. The expression of ET-1 and MCP-l protein in the model group （6.20±1.16， 3.34±0.06） were higher than those in the control group （2.27±0.73， 0.71±0.25）， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group （18.12±1.08） was lower than that in control group （28.38±4.82）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Compared with the expression of TGF-β1 protein in all pathological grades （grade Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ， Ⅳ） in the model group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of ET-1 and MCP-1 protein in model group Ⅱ newborn mices were not significantly different from those in model group Ⅰ （P>0.05）. The expression of ET-1 and MCP-1 protein in model group Ⅲ and Ⅳ were significantly higher than those in model group Ⅱ， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group Ⅱ， Ⅲ and Ⅳ newborn mices were lower than those in grade Ⅰ， while the expression of IGF-1 protein in model group Ⅳ newborn mices were lower than that in grade Ⅲ， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of IGF-1 protein in model group Ⅱ newborn mices had no significant difference compared with grade Ⅲ （P>0.05）. Comparison of protein expressions about TGF-β1， MCP-l， ET-1 and IGF-1 at different time points after obstruction were relieved. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1 protein in the model group were lower than 2 weeks after the obstruction were relieved， and the expression of IGF-1 protein was higher than 2 weeks after the obstruction were relieved， the differences were statistically significant （P<0.05）. In the model group， the expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1， IGF-1 protein at 2 weeks after obstruction were relieved were not significantly different from that at 0 weeks after obstruction were relieved （P>0.05）. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1， IGF-1 protein in the model group at 8 weeks after obstruction were relieved were not significantly different from those at 6 weeks after obstruction were relieved （P>0.05）. The expression of TGF-β1， MCP-l， ET-1 protein in model group were lower than those in 8 weeks after obstruction were relieved， and the expression of IGF-1 protein was higher than that in 8 weeks after obstruction were relieved， the differences were statistically significant （P<0.05）. The protein expression of TGF-β1 was positively correlated with pathological grade （r=0.873， P<0.01）. The protein expressions of ET-1 and MCP-1 were positively correlated with pathological grade （r=0.579， 0.637， P<0.05）. There was no significant correlation between IGF-1 protein expression and pathological grade （P>0.05）. Conclusion Histopathological changes of diseased kidney tissue gradually recover with the extension of obstruction relieving time. The expression of TGF-β1 protein level increases with the increase of pathological grade of obstruction， and gradually decreases with the extension of time to relieve obstruction. TGF-β1 can be used as a reliable index to judge the degree of renal damage and recovery of hydronephrosis in newborn rats.

[Key words] Newborn rat; Hydronephrosis; Protein level

先天性腎積水是小兒泌尿外科的常見疾患，新生兒的發(fā)病率為1%～2%，最常見的病因是腎盂輸尿管連接部梗阻，可導致患腎發(fā)生復雜的病理生理變化[1]。腎盂與輸尿管上段連接處呈漏斗狀，腎盂收縮時輸尿管上段擴張，尿液從腎盂排向輸尿管。如果腎盂輸尿管連接處存在梗阻，妨礙了尿液順利地排入輸尿管，導致集合系統(tǒng)張力增加，從而引發(fā)腎積水。國內外學者對先天性腎積水做了大量的實驗研究，但先天性腎積水的具體發(fā)病機制尚不十分明確，尤其是對如何確定積水腎臟的功能是否存在進行性損害仍缺乏簡單有效的方法[2]。近年來，隨著分子生物學技術廣泛應用于臨床及實驗研究，已發(fā)現(xiàn)轉化生長因子-β1（TGF-β1）、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）以及血管活性多肽如內皮素-1（ET-1）等不同程度地參與了先天性腎積水的發(fā)生機制，但它們能否用于檢測病腎的損害程度，鮮有報導。因此，本研究選取新生48 h內的Wistar鼠制成輸尿管左側部分梗阻的動物模型，通過HE染色法觀察病腎組織的結構變化，以及通過免疫組化SP法分別檢測在梗阻期間及梗阻解除后的病腎組織中TGF-β1、MCP-1、IGF-1、ET-1的蛋白水平表達情況，旨在探尋一種評定先天性腎積水病腎損害程度的理想指標，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1實驗材料與儀器

SPF級的Wistar孕鼠10只[重慶市中藥研究院實驗動物研究所，許可證號：SCXK（渝）20070006]，體重（300±50）g，采用上述孕鼠所產48 h內新生鼠，建立動物模型[3];SP-9001免疫組化染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）;TGF-β1-Rabbit Anti、IGF-1-Rabbit Anti（Santa Cruz Biotechnology，Inc）;MCP-1兔抗大鼠多克隆抗體、ET-1兔抗大鼠多克隆抗體（武漢博士德生物有限公司）;RM2135型石蠟切片機、光學顯微鏡、Leica Qwin V3型細胞圖像分析儀（均產自德國Leica公司）。

1.2方法

1.2.1動物分組及標本制備? 選取72只新生48 h內的Wistar鼠，將其隨機分為6組，每組12只。隨機選擇1組作為對照組，對照組僅行假手術（切開腹腔，顯露左側輸尿管后關閉切口）;其余5組均用腰大肌壓迫法制成輸尿管左側部分梗阻模型，然后再隨機分為5組作為模型組。隨機選取1組于造模后3周采集病腎組織并處死;其余4組再次行手術解除梗阻，分別于梗阻解除后2、6、8、12周隨機選取1組采集病腎組織并處死。將切取的腎臟組織進行處理分別行病理學及免疫組織化學分析。其中，模型組術中死亡5例，術后死亡4例，存活51例，對照組全部存活。

病腎的組織學改變按Elder[4]法分級。腎臟Elder病理學分級，具體包括，Ⅰ級：正常腎臟;Ⅱ級：輕度梗阻性腎病，病變僅限于腎小囊腔輕度擴張、集合管輕度間質纖維化和腎皮質慢性炎癥;Ⅲ級：中度梗阻性腎病，病變在Ⅱ級基礎上加上腎小球改變，包括球樣硬化，異常腎小球達25%，腎皮質變薄，腎小球數(shù)量減少，中度間質性纖維化和炎癥反應;Ⅳ級：重度梗阻性腎病，在Ⅲ級基礎上合并顯著的區(qū)域性腎小球表面硬化，異常腎小球超過25%，腎小囊消失;Ⅴ級：重度梗阻性腎病伴囊下微小囊生成，腎小管、腎小球顯著病變，間質纖維化嚴重，并出現(xiàn)慢性間質性炎癥。

1.2.2免疫組化SP法檢測蛋白水平? 將石臘塊經切片、脫蠟、水化和抗原修復，按免疫組織化學染色SP法步驟操作，分別進行TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1的蛋白檢測，DAB顯色，蘇木素復染，脫水，透明，封片處理。陽性對照片為試劑公司提供，陰性對照片為以PBS代替一抗所制成的片。顯微鏡下觀察，以胞漿或細胞間質點狀或片狀棕黃色顆粒為陽性結果，在每張切片隨機選取10個互不交叉重疊的高倍鏡視野（400×），經Leica Qwin V3型細胞圖像分析系統(tǒng)計算陽性信號的光密度值作為其表達強度進行分析，最后計算平均值和標準差（x±s）。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件進行實驗數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗;不符合正態(tài)分布者經過變量轉換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計學分析;病理學分級與病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1的光密度值采用Spearman秩相關性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 HE染色結果

Wistar鼠積水腎臟可見腎小球和腎小管數(shù)目減少，腎小管管腔擴張明顯，上皮細胞萎縮（圖1，見封三）。

2.2免疫組化檢測結果

對照組Wistar鼠的腎臟組織中，TGF-β1、MCP-l、ET-1的蛋白呈弱陽性表達，棕色顆粒彌散大多分布于近曲小管的細胞胞漿內，在腎小球內呈陰性或弱陽性表達（圖2A、B、C，見封三）。對照組腎小管內的IGF-1蛋白呈強陽性表達，棕色顆粒彌散大多分布于近曲小管、極少數(shù)分布于遠曲小管的細胞胞漿內、在腎小球內未見表達（圖2D，見封三）。模型組腎小管TGF-β1、MCP-l、ET-1的蛋白呈強陽性表達（圖3A、B、C見封四）。模型組腎小管內的IGF-1蛋白呈弱陽性表達（圖3D，見封四）。

隨著梗阻解除時間的延長，TGF-β1、MCP-l、ET-1、ET-1的蛋白表達逐漸減弱，其中，TGF-β1在梗阻解除后12周的蛋白表達趨于正常水平，而MCP-1及ET-1的蛋白表達仍稍強于對照組，IGF-1蛋白在對照組中呈強陽性表達，棕色顆粒大多分布于近曲小管以及少數(shù)的遠曲小管的細胞胞漿內，IGF-1蛋白在模型組中則呈弱陽性表達，且隨梗阻解除的時間延長，IGF-1蛋白的表達逐漸增強（圖4 A、B、C、D，見封四）。

梗阻解除后0、2、6、8周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達量均高于對照組，IGF-1蛋白表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1蛋白表達量與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的MCP-l、ET-1蛋白表達量高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;在梗阻解除后12周，模型組中的IGF-1蛋白表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。TGF-β1、MCP-1、ET-1的蛋白表達水平隨梗阻解除時間的延長而逐漸下降，IGF-1的蛋白表達水平隨梗阻解除時間的延長而逐漸升高。TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1的蛋白表達量在模型組梗阻解除后的不同時間點比較：梗阻解除后6、8、12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達量均低于梗阻解除后2周，IGF-1蛋白表達量高于梗阻解除后2周，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組中梗阻解除后2周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達量與梗阻解除后0周比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。模型組中梗阻解除后8周的TGF-β1、MCP-l、ET-1、IGF-1蛋白表達量與梗阻解除后6周比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。梗阻解除后12周，模型組中的TGF-β1、MCP-l、ET-1蛋白表達量均低于梗阻解除后8周，IGF-1蛋白表達量高于梗阻解除后8周，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

模型組新生鼠TGF-β1、MCP-1、ET-1的蛋白表達量隨病理學分級的增加而逐漸升高，IGF-1的蛋白表達量隨病理學分級的增加而逐漸降低。模型組各病理學分級（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級）新生鼠的TGF-β1蛋白表達量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組Ⅱ級新生鼠的ET-1、MCP-1蛋白表達量與Ⅰ級的比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級的ET-1、MCP-1蛋白表達量高于Ⅱ級，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅰ級，模型組Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅲ級，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;模型組Ⅱ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量與Ⅲ級比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表2）。

2.3病腎組織TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1蛋白表達量與病理學檢測的相關性分析

Spearman相關性分析結果提示，TGF-β1的蛋白表達量與病理學分級均成正相關關系（r=0.873，P<0.01）;ET-1、MCP-1的蛋白表達量與病理學分級均成正相關關系（r=0.579、0.637，P<0.05）;IGF-1的蛋白表達量與病理學分級無明顯的相關性（P>0.05）。

3討論

腎盂輸尿管交界處狹窄是先天性腎積水的主要病因。輸尿管梗阻后尿液排出受阻，腎盂腎盞被動擴張，腎間質水腫，從而引發(fā)局灶性炎性細胞浸潤，腎間質纖維化，最終可導致腎臟萎縮、喪失功能。目前，彩超、病理學分級、ECT等是評估小兒腎積水病腎損害情況的常見方法，但各有其局限性。因此，探尋出一種能準確反映積水腎臟功能的標志物顯得尤為重要。分子生物學技術在腎積水發(fā)生機制研究領域的應用日益增多，為該標志物的探尋提供了條件。

TGF-β1是TGF-β超家族的創(chuàng)始成員，包括活性成分、可生長因子、可分化因子等，能促進細胞外基質蛋白的生成和聚集。哺乳動物中普遍存在TGF-β1-3，不同種屬來源的TGF-β1具有高度同源性，但具有生物活性的僅有二聚體形式的TGF-β1。TGF-β1的免疫調節(jié)與促纖維化作用是近些年來的研究熱點，國內外學者已有大量報導。TGF-β1可促使腎臟蛋白酶抑制因子的生成，從而促進腎小球的硬化、腎間質的纖維化[5]。另有研究發(fā)現(xiàn)[6]，在腎積水病腎間質中的TGF-β1 mRNA表達明顯增高，而在正常對照組的腎臟組織中則為低表達或陰性。眾所周知，病理學檢測是反應腎臟損害程度的客觀依據(jù)。因此，本研究以形態(tài)學分級為基礎，對新生鼠腎積水病腎組織中的TGF-β1蛋白表達量進行研究，以便證明TGF-β1蛋白表達量能夠反映病腎的損害程度。有學者報導[7]，應用免疫組織化學方法，可檢測到正常人腎臟的系膜、腎小管及腎小球基底膜的TGF-β1蛋白陽性表達。而另有研究表明[8]，在正常人腎小管中未檢測到TGF-β1蛋白的陽性表達，在腎小球球囊、系膜及內皮細胞可發(fā)現(xiàn)TGF-β1蛋白的弱陽性表達。本研究結果提示，在新生鼠積水腎臟內，TGF-β1的陽性表達主要位于近曲小管內皮細胞的胞漿內，而在腎小球及腎間質內未發(fā)現(xiàn)。TGF-β1的蛋白表達量隨輸尿管梗阻解除時間的延長而逐漸下降，梗阻解除后12周，其表達量已降至正常。同時，病腎組織中的TGF-β1蛋白表達量與病理檢查分級成正相關，差異有統(tǒng)計學意義（r=0.873，P<0.01），提示病腎組織中TGF-β1的蛋白表達可用于病腎恢復情況的判定。

MCP-1是一種在腎損傷和炎癥部位表達的特異性區(qū)化因子，在腎小球腎炎、腎小管間質性病變的發(fā)病機制中起關鍵作用，并能夠通過多種途徑導致病腎不同程度的損害[9]。有研究表明[10]，腎積水病腎組織內充滿了大量具有免疫活性的單核-巨噬細胞，通過特異性趨化因子MCP-1而被激活，腎小管上皮細胞可大量分泌MCP-1，成為其主要來源的細胞之一[11]。腎臟疾病中MCP-1的蛋白表達量的升高能增強多種細胞因子和黏附分子的表達與合成，誘導炎性介質釋放（如NF-α、IL-1等）導致腎間質損傷。動物實驗研究證實，MCP-1可作為一種重要的炎癥介質參與腎積水的發(fā)生機制，MCP-1及其受體可能通過誘導調節(jié)成纖維細胞而起到關鍵性作用，且與病腎損害程度明顯相關[12]。本研究應用免疫組織化學方法檢測新生鼠積水腎臟組織中MCP-1的蛋白表達，實驗結果提示，病腎組織MCP-1的蛋白表達僅能部分反映病腎的損害及恢復程度，提示MCP-1可能參與了腎積水的發(fā)病。目前，關于MCP-1是如何參與先天性腎積水病腎損害的機制尚不十分清楚，但以此為依據(jù)，將為腎積水的發(fā)病機制研究提供新的思路。

ET主要有A型（ETA）和B型（ETB）兩種受體。ET-1主要由心血管組織合成，腦和腎臟也可產生ET-1，其中，腎小球毛細血管叢集合系統(tǒng)是腎臟合成ET-1的主要部位。因此，ET-1與腎臟疾病的發(fā)生有密切關系[13]。腎臟的腎小球內皮細胞、上皮細胞、系膜細胞和腎小管上皮細胞均能合成內皮素，內皮素是目前已知的體內收縮血管作用最強和最持久的縮血管物質[14]。ET-1可使腎動脈收縮，減少腎小球濾過面積，使腎小球濾過率及腎血流量降低。動物實驗表明，ET-1在許多腎臟疾病中呈高表達，大鼠一側輸尿管完全梗阻后，隨梗阻時間的延長，梗阻側腎盂尿中ET-1的蛋白含量較對側增加1/2至數(shù)倍，而梗阻側腎臟組織ET-1的含量較對照組亦顯著增加[15]。梗阻性腎積水動物模型證實，ET-1在腎靜脈血流中的表達較腎動脈血流中高，而生理狀態(tài)下ET-1的濃度極低，提示升高的ET-1是由腎臟產生的[16]。由此可見，腎臟本身就存在ET系統(tǒng)，很多腎臟病的病理生理過程是由腎臟局部的ET介導。馬洪等[17]研究證明了腎積水患兒的病腎尿ET-1蛋白水平升高，提示腎盂尿ET-1可反映病腎的損害。因此，本研究應用免疫組化法檢測了腎積水病腎組織的ET-1蛋白表達情況。研究結果提示，病腎組織中ET-1的蛋白表達隨病理學分級的增加而升高，但Ⅰ、Ⅱ級的ET-1蛋白表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），Ⅲ、Ⅳ級的ET-1蛋白表達量高于Ⅱ級，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示ET-l的蛋白表達情況僅能反映部分病腎的損害程度。該研究結果與Grosjean等[18]的研究結果相一致。

IGF是一種與胰島素結構類似的廣譜促生長因子，包括IGF-1和IGF-2。IGF-1是由70個氨基酸構成的單鏈多肽，主要由肝臟合成，幾乎存在于哺乳動物的所有組織中，是人體重要的生長因子和促有絲分裂原，對正常新陳代謝的維持起著非常重要的作用。腎小管及腎小球中均有IGF-1的蛋白受體表達，IGF-1的蛋白表達與功能紊亂、腎間質纖維化關系密切[19]。研究[20]發(fā)現(xiàn)，IGF-1參與了腎單位損傷的康復過程，在慢性腎衰竭的治療中可加快腎臟的功能恢復。另有學者研究[21]發(fā)現(xiàn)，IGF-1通過提高腎血流量和腎小球濾過率來上調腎單位的血流動力學，從而減輕積水腎臟的腎小管囊性變及腎盞擴張，最終緩解腎臟纖維化。本研究結果提示，模型組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅰ級，模型組Ⅳ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量低于Ⅲ級，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;模型組Ⅱ級新生鼠的IGF-1蛋白表達量與Ⅲ級比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。腎積水病腎組織中IGF-1的蛋白表達量較假手術組降低，且隨病理學分級的增加而降低，提示IGF-1可能參與了腎積水的發(fā)病機制，病腎組織IGF-1的蛋白表達情況不能完全反映病腎的損害程度，IGF-1尚不能作為病腎功能檢測的理想指標。

綜上所述，本研究通過建立新生鼠腎積水動物模型，檢測不同時期病腎組織各指標的蛋白表達情況，并與病理學分級做相關性分析。提示，TGF-β1的蛋白表達情況可用于判定新生鼠腎積水病腎的損害程度以及恢復情況。但是，盡管本實驗成功地采用新生鼠建立了梗阻性腎積水動物模型，在一定程度上模擬了人類腎積水的發(fā)病過程，但是，人的腎積水發(fā)病是一個極為復雜、漫長的慢性腎功能損害過程，上述指標檢測能否應用于臨床，還需要深入的研究。

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（收稿日期：2019-02-12? ?本文編輯：孟慶卿）