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    桑杜口服液急性毒性和長期毒性試驗

    2019-11-13 03:39:12奚照壽姚月琴陳曉蘭
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年17期
    關(guān)鍵詞:急性毒性

    奚照壽 姚月琴 陳曉蘭

    摘要:對桑杜口服液進(jìn)行急性毒性和長期毒性試驗。急性毒性試驗:小鼠以最高濃度(4.0 g/mL)、最大給藥容積(0.2 mL/10 g)于24 h內(nèi)灌胃3次桑杜口服液,小鼠體質(zhì)量正常,精神狀態(tài)良好,毛色光亮,飲水?dāng)z食正常,給藥后7 d內(nèi)未出現(xiàn)中毒和死亡情況,表明桑杜口服液對小鼠無急性毒性。長期毒性試驗:取4周齡Wistar大鼠(清潔級)80只,隨機(jī)分為4組,3個藥物劑量組分別灌胃4.0、1.0、0.25 g/mL桑杜口服液1.0 mL,空白對照組灌胃等體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)給藥30 d,每天觀察大鼠的給藥反應(yīng)。每周稱質(zhì)量,計算周增質(zhì)量,并于給藥30 d結(jié)束時,每組取10只大鼠(雌、雄各半)采血,進(jìn)行血液細(xì)胞學(xué)檢查、血清生化檢查,計算心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、卵巢子宮、睪丸的質(zhì)量及臟器系數(shù)。結(jié)果顯示,大鼠體質(zhì)量、臟器系數(shù)、血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)和血清生化指標(biāo)無異常,表明桑杜口服液對大鼠無長期毒性。

    關(guān)鍵詞:桑杜口服液;急性毒性;長期毒性;臟器系數(shù)

    中圖分類號: R285.5 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A ?文章編號:1002-1302(2019)17-0201-03

    藥品必須具備安全性、有效性及質(zhì)量可控性[1]。藥品安全性問題一直是學(xué)術(shù)界、藥物管理部門、制藥企業(yè)極其重視的問題,藥品的優(yōu)劣不僅由有效性強(qiáng)弱來決定,也受到其毒性高低的影響。因此,開展藥品的安全性試驗成為臨床用藥安全的重要保障。一般情況下,藥品安全性試驗由急性毒性和長期毒性試驗組成。對于第一類中藥、第一類中藥制劑還需進(jìn)行特殊毒理學(xué)試驗[2]。桑杜口服液富含中藥多糖,具有良好的免疫促進(jìn)作用。本研究根據(jù)獸藥臨床前毒理學(xué)評價試驗指導(dǎo)原則及相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)的方法,采用桑杜口服液分別進(jìn)行小鼠經(jīng)口急性毒性試驗、大鼠30 d灌胃長期毒性試驗,旨在評價桑杜口服液制劑的安全性,為臨床用藥提供指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 藥物與儀器

    桑杜口服液,濃度為4.0 g/mL(以生藥含量計),由揚中牧樂藥業(yè)有限公司提供,批號為20170418。

    全自動血液生化分析儀(Selectra E型),購自荷蘭威圖科學(xué)公司;全自動血細(xì)胞分析儀(PE-6800型),購自深圳普康電子有限公司;離心機(jī)(BIOFUGE PRIMO R),購自Thermo公司;電子天平(FA1104N),購自上海精密科學(xué)儀器有限公司。

    1.2 試驗動物

    60只ICR小鼠(清潔級),體質(zhì)量18~22 g,雌、雄各半,購自揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心,動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(蘇)2012-0004。小鼠飼養(yǎng)在溫度(24±2) ℃、濕度60%±20%條件下,飼喂飼料經(jīng)60Co照射,飲水為滅菌自來水,自由采食與飲水。試驗前在以上試驗環(huán)境中適應(yīng)3 d。試驗前停食12 h,但不限制飲水。

    4周齡清潔級Wistar大鼠80只,雌、雄各半,購自揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心。大鼠飼料經(jīng)60Co照射,飲水為符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)的滅菌自來水。大鼠實行自由采食和飲水。

    1.3 急性毒性試驗方法

    1.3.1 動物分組與處理 預(yù)試驗:取ICR小鼠(清潔級)40只,雌、雄各半,分為高、中、低濃度藥物組和空白對照組,每組10只。給藥組藥物濃度分別為4.0、2.0、1.0 g/mL,空白對照組給以生理鹽水。各組1次灌胃給藥,給藥量為0.4 mL。自灌藥后每日觀察小鼠飲食、行為及死亡情況。連續(xù)觀察7 d發(fā)現(xiàn),7 d內(nèi)小鼠無任何異常。因此根據(jù)動物預(yù)試驗結(jié)果不能測出半數(shù)致死量(LD50),依據(jù)新獸藥注冊管理辦法急性毒性試驗技術(shù)規(guī)范,對桑杜口服液進(jìn)行最大給藥量試驗[3]。

    正式試驗:取ICR小鼠(清潔級)20只,雌、雄各半,以藥物的最高濃度(4.0 g/mL)、最大給藥容積(0.2 mL/10 g)于24 h內(nèi)灌胃3次,每次間隔6 h,給藥總量為240.0 g/kg。連續(xù)觀察7 d,同時記錄動物中毒時癥狀和死亡情況。

    1.3.2 正式試驗觀察指標(biāo) 給藥后,觀察小鼠的一般狀況(包括體質(zhì)量、精神狀態(tài)、毛色、自主活動、呼吸、飲食欲、糞便、口鼻分泌物)、中毒癥狀和死亡情況,連續(xù)觀察7 d。

    1.4 長期毒性試驗方法

    1.4.1 動物分組與處理 將Wistar大鼠隨機(jī)分為4個組,每組20只,雌、雄各半。受試動物分高、中、低劑量組,另設(shè)正常對照組。桑杜口服液的高、中、低劑量組,分別以最大給藥量的1倍、1/4倍和1/16倍(分別為1.0 mL 4.0、1.0、0.25 g/mL 桑杜口服液)灌胃,空白對照組(BC)采用1.0 mL生理鹽水灌胃,每天1次,連續(xù)灌胃給藥30 d。

    1.4.2 試驗觀察 整個試驗期間,每天觀察并記錄大鼠一般行為表現(xiàn)、大鼠中毒及死亡情況。每周稱量大鼠體質(zhì)量及飼料消耗1次。

    1.4.3 指標(biāo)檢測及病理學(xué)檢查

    1.4.3.1 血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)檢測 于給藥30 d結(jié)束時,取10只大鼠(雌、雄各半),大鼠經(jīng)全麻后從腹主動脈采血,血液經(jīng)抗凝處理后,采用全血自動分析儀測定血液中白細(xì)胞、中性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積和血小板的含量,取各指標(biāo)平均值。

    1.4.3.2 血清生化指標(biāo)檢測 于給藥30 d結(jié)束時,取10只大鼠(雌、雄各半),大鼠經(jīng)全麻后從腹主動脈采血,制備血清,采用血液生化自動分析儀檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶活性及血尿素、肌酐、葡萄糖、白蛋白、總蛋白、總膽固醇、甘油三酯含量,取各指標(biāo)平均值。

    1.4.3.3 病理檢查 于給藥30 d結(jié)束時,各組取10只大鼠(雌、雄各半),在以上采血結(jié)束時進(jìn)行剖檢。稱量心、肝、脾、肺、腎、卵巢子宮、睪丸質(zhì)量,并計算各臟器系數(shù),取各指標(biāo)平均值;必要時對肝、腎、脾、胃、睪丸、卵巢、十二指腸、結(jié)腸等主要臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

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