酸棗仁湯對抑郁模型大鼠海馬CaMKⅡ基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

田旭升，張策，龔永濤，王超穎，楊彬

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

抑郁癥(depression)作為一種精神疾病，具有持久顯著的心境低落與認(rèn)識功能障礙等特征，缺乏愉快感，伴有罪惡感、失眠、厭食、抑郁焦慮等情感功能障礙。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球組織研究顯示，目前抑郁癥已經(jīng)成為“世界第三大負(fù)擔(dān)疾病”，抑郁癥的平均發(fā)生率約為3.1%，在發(fā)達(dá)國家接近6%[1]，被精神科醫(yī)生和心理學(xué)家喻為“精神科的感冒”。 據(jù)推測，每年因罹患抑郁癥而輕生離世的人數(shù)超過了100萬人[2]。目前臨床上常用藥SSRIs類以及SNRIs治療抑郁癥的效果雖然較好，但是兩類藥物在臨床中的安全性、耐藥性以及用藥成本，成為患者備受關(guān)注的焦點(diǎn)。

中醫(yī)藥對抑郁癥的防治具有獨(dú)特的療效。夏寒星[3]研究發(fā)現(xiàn),酸棗仁湯可以顯著改善慢性應(yīng)激大鼠的興趣喪失、活動(dòng)能力下降等精神運(yùn)動(dòng)性抑郁癥狀。張仲景著《金匱要略·血痹虛勞病脈證并治》中記載：“虛煩虛勞不得眠，酸棗仁湯主之?！彼釛椚蕼珵橐钟舭Y的現(xiàn)代治療提供了新觀念和新角度。

現(xiàn)有眾多研究資料顯示，通過CaMKⅡ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性，參與海馬神經(jīng)元重塑已經(jīng)成為對抑郁癥發(fā)病原因研究的新突破口。本實(shí)驗(yàn)以抑郁模型大鼠的建立為基礎(chǔ)，通過正常對照組、模型組、氟西汀組的比較，觀察酸棗仁湯對抑郁模型大鼠海馬內(nèi)的CaMKⅡ蛋白及基因表達(dá)的影響，結(jié)合行為學(xué)的改變，探索酸棗仁湯可以改善大鼠抑郁癥狀指標(biāo)，為酸棗仁湯可以有效治療抑郁提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

清潔級SD雄性大鼠48只，體質(zhì)量130～230 g;黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號：SCXK(黑)2014-0008;實(shí)驗(yàn)所需的SD大鼠專用飼料，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，所有飼料利用高壓滅菌等步驟，經(jīng)過了嚴(yán)格的處理。

1.2 藥物

酸棗仁湯(酸棗仁20 g、茯苓10 g、知母10 g、甘草5 g和川芎10 g)劑量主要參考《金匱要略》記載，方中所需中藥飲片均購買于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥局，水煎濃縮，制備成低(0.5 g/mL)、中(1 g/mL)和高(2 g/mL)3種劑量，放入4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。氟西?法國禮來蘇州制藥有限公司，批號：4510A)；兔抗多克隆一抗、二抗PV6001、DAB顯色劑(北京中山公司，中國)；其他試劑為國產(chǎn)分析純。

1.3 試劑

TRIZOL試劑、氯仿和75%乙醇 (北京索萊寶科技公司)；CaMK Ⅱ引物、β-actin引物、MasterMix2溶液(三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)公司)；Real-time PCR熒光染料(寶生物工程(大連)有限公司，中國)；RIPA裂解液、兔抗多克隆一抗、二抗(天津廣成化學(xué)試劑公司)；蔗糖(天津巴斯夫化學(xué)試劑公司)

1.4 儀器

免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)試劑盒(基因科技有限公司，中國)；恒溫冰箱(日本三洋電器有限公司)；電子天平、攝像頭、烘箱(沈陽龍騰電子公司)；低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(中國LDZ-2型)；7500型熒光定量PCR儀(美國ABI公司)；電擊箱(北京醫(yī)科院藥研所)；石蠟切片機(jī)萊卡2135型(德國)；Moticam3000顯微攝影成像系統(tǒng)(美國)；上海恒電熱恒溫箱；醫(yī)學(xué)數(shù)碼圖像分析系統(tǒng)(麥奧迪克廈門公司)5810R高速低溫離心機(jī)、移液槍(德國Eppendorf公司)；液氮罐(中國亞西有限公司)；-80 ℃冰箱(美國Thermo Firsher)；自制曠場實(shí)驗(yàn)箱。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組方法及給藥方法

實(shí)驗(yàn)前3天對大鼠進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，參考體質(zhì)量、蔗糖水消耗以及行為學(xué)測試評分，將48只大鼠隨機(jī)分成6組，每組8只。造模(除空白組)7天以后，連續(xù)灌胃21天。大鼠給藥量不宜過多，結(jié)合大鼠體表面積與成人體表面積的比例進(jìn)行換算，再按照成人1天的藥量給藥。

正常對照組和模型組給予10 mL/kg 0.9%生理鹽水灌胃，氟西汀組給予0.36 mg/mL氟西汀混懸液灌胃，酸棗仁湯低中高劑量組分別給予濃度為0.5 g/mL、1 g/mL和2 g/mL的酸棗仁湯灌胃，6組均每日灌胃1次。

2.2 抑郁模型制備

空白組大鼠每籠8只，在實(shí)驗(yàn)過程中不接受任何形式的刺激，根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程正常飼養(yǎng)。其他組別大鼠進(jìn)行孤養(yǎng)，每籠1只大鼠。在28天實(shí)驗(yàn)時(shí)間里，非空白組的大鼠每天都要接受共計(jì)7種不同慢性刺激，每天進(jìn)行1種，構(gòu)建慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激大鼠抑郁(CUMS)模型，其中，相同的刺激形式不可以連續(xù)進(jìn)行。應(yīng)激方法根據(jù)Banasr方法略微改進(jìn)，刺激方式如下：

禁水：給予大鼠12 h斷水，于造模當(dāng)天8:00—20:00進(jìn)行12 h斷水，斷水期間內(nèi)正常給予食物。

禁食：給予大鼠12 h斷食，于造模當(dāng)天8:00—20:00進(jìn)行12 h斷食，斷食期間給予正常飲水。

傾斜鼠籠：將鼠籠傾斜45°，持續(xù)12 h后將鼠籠恢復(fù)到原位。

墊料潮濕飼養(yǎng)：向鼠籠中加水，使墊料潮濕，墊料潮濕狀態(tài)持續(xù)12 h后換掉。

晝夜顛倒：晚上7點(diǎn)將日光燈打開，持續(xù)12 h，使大鼠在夜間處于光照狀態(tài)。

45 ℃烘箱熱烘刺激：把大鼠放進(jìn)溫箱，溫箱保持在45 ℃，持續(xù)10 min。

液態(tài)水游泳：將大鼠放入盛有-10 ℃冷水的桶中，讓大鼠的足尖離開桶的底部即可，讓大鼠在水中持續(xù)5 min左右，之后用吹風(fēng)機(jī)將大鼠身體吹干，防止大鼠受涼。

2.3 實(shí)驗(yàn)觀測內(nèi)容及方法

氟西汀組和酸棗仁湯各劑量組在造模第8天開始分別給予氟西汀藥物和酸棗仁湯各劑量組進(jìn)行干預(yù)。正常對照組和模型組分別急于生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)第0天和第28天，分別測量并觀察每只大鼠體質(zhì)量變化、蔗糖水消耗量、行為學(xué)得分情況。在實(shí)驗(yàn)第28天，對各組大鼠進(jìn)行海馬取材，應(yīng)用RT-PCR檢測大鼠海馬內(nèi)CaMK II蛋白mRNA的表達(dá)情況，Western-blot方法檢測CaMK II蛋白的表達(dá)情況。

2.3.1 大鼠體質(zhì)量測量

觀察各組大鼠體質(zhì)量的變化，在實(shí)驗(yàn)的第0天、第7天、第14天、第21天和第28天對大鼠進(jìn)行體質(zhì)量測量，然后記錄。總結(jié)數(shù)據(jù)進(jìn)而進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析體質(zhì)量改變與抑郁發(fā)作的關(guān)系。

2.3.2 大鼠糖水消耗試驗(yàn)

大鼠的糖水消耗檢測于實(shí)驗(yàn)的第0天、第7天、第14天、第21天和第28天開始進(jìn)行。大鼠糖水消耗試驗(yàn)前一天，要對各組大鼠進(jìn)行相應(yīng)準(zhǔn)備，包括禁水及禁食的刺激。之后更換大鼠飲用水，每瓶150 mL，換成1%濃度的蔗糖水，持續(xù)禁食狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)持續(xù)12 h后，整理記下所有瓶中蔗糖水量的剩余量，根據(jù)差值得出糖水的消耗量。利用大鼠對糖水的偏好，觀察動(dòng)物快感缺乏情況以及改善情況。

2.3.3 曠場實(shí)驗(yàn)測試

大鼠體質(zhì)量檢測完畢后，在實(shí)驗(yàn)的第0天、第7天、第14天、第21天和第28天進(jìn)曠場實(shí)驗(yàn)[6]。測試裝置是一個(gè)木箱，木箱長、寬各為1 m，高約0.8 m，箱底內(nèi)部有25個(gè)16 cm×16 cm的小方格。測量的計(jì)分方式是：測量得分分為垂直活動(dòng)得分和水平活動(dòng)得分。垂直活動(dòng)得分標(biāo)準(zhǔn)是大鼠前肢抬起，后肢保持直立。水平活動(dòng)得分標(biāo)準(zhǔn)是大鼠四肢共同處于1個(gè)方格內(nèi)。測試大鼠達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)時(shí)計(jì)1分。測量時(shí)，將測試大鼠放在木箱底部的中心處，檢測過程中要保證減少額外干擾比如排除光照、溫度、時(shí)間以及環(huán)境噪音的干擾。事先熟練掌握檢測標(biāo)準(zhǔn)，有助于再正式檢測前減少人為的誤差。計(jì)時(shí)3 min，統(tǒng)計(jì)活動(dòng)時(shí)間內(nèi)大鼠水平、垂直活動(dòng)得分。計(jì)算得分人數(shù)為2人或2人以上，其中1人負(fù)責(zé)觀察并記錄時(shí)間，其他人負(fù)責(zé)記錄大鼠水平及垂直活動(dòng)得分。

2.3.4 大鼠海馬內(nèi)CAMK II的蛋白測定

實(shí)驗(yàn)第28天，檢測大鼠體質(zhì)量、糖水消耗實(shí)驗(yàn)及曠場實(shí)驗(yàn)得分等指標(biāo)。之后每組選取4只大鼠，麻醉后斷頭，打開顱腔，取雙側(cè)海馬組織，迅速分裝于凍存管中，放入-80 ℃液氮罐中速凍，速凍后將組織放入-80 ℃冰箱中保存。

2.3.4.1 RT-PCR法測定大鼠海馬內(nèi)CaMK ⅡmRNA表達(dá)方法

1)取凍存細(xì)胞，室溫放置5 min使其完全溶解,然后放置玻璃勻漿器中，按20:1的比例加入TRIZOL后勻漿至無明顯組織塊，靜置5 min，使組織液達(dá)到完全裂解狀態(tài)。

2)加入100 μL氯紡，振蕩均勻，靜置15 min，4 ℃，離心12 000 r/min，棄上清，使RNA沉淀于管底，加入1 mL的75%乙醇，振蕩離心，清洗沉淀，4 ℃，7 500 g，離心5 min，棄上清，將沉淀晾干，用20 μL無RNA酶水溶解RNA沉淀。

3)加入引物與Mix液：

CaMK II引物：

上游引物序列：5′AAGATGTGCGACCCTGGAATG3′。

下游引物序列：5′TGTAGGCGATGCAGGCTGAC3′。

β-actin引物：

上游引物序列：5′AGCGGGAAATCGTGCGTG3′。

下游引物序列：5′CGTGGTGGTACATGGGAC3′。

配置MasterMix2溶液，4℃，用移液槍將MasterMix2濃縮液、引物、模板加入平行孔中，每個(gè)樣品至少做3個(gè)平行孔，加入平行孔時(shí)每孔均要更換新的槍頭，所用成分加完后，離心去除氣泡。

4)RT-PCR反應(yīng)：反應(yīng)過程于熒光定量基因擴(kuò)增PCR檢測系統(tǒng)進(jìn)行，設(shè)置反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性，5 min，進(jìn)入下一循環(huán)。94 ℃，30 s，退火40 s，72 ℃，40 s，35個(gè)循環(huán)后，72 ℃延伸10 min，擴(kuò)增CaMK II片段和β-actin片段。

5)監(jiān)測各循環(huán)熒光值，數(shù)據(jù)分析由自帶系統(tǒng)軟件自動(dòng)完成，同時(shí)通過軟件可以確定Ct值(所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的起始循環(huán)數(shù))。根據(jù)Ct值繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算出樣本的初始拷貝數(shù)。用比較閾值法來測定目的基因的相對表達(dá)情況。

2.3.4.2 Western-blot法測定CaMK Ⅱ蛋白方法：

1)取凍存細(xì)胞，室溫放置5 min。將提取的大鼠海馬按照100 mg/mL加入200 μL RIPA裂解液，加入蛋白酶抑制劑后勻漿。

2)靜置1 h后，將其放置于冰上，在4℃下進(jìn)行12 000 r/min離心操作，持續(xù)30 min。

3)提取上清液測定總蛋白濃度，測得結(jié)果后置于-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

4)SDS聚丙烯酰胺通過凝膠電泳，使25 μg總蛋白樣品分離，使之發(fā)生轉(zhuǎn)移，附著到PVDF膜上。

5)TBST配制脫脂奶粉，濃度5%，室溫封閉，持續(xù)1 h，加兔抗CAMKII單克隆抗體，4 ℃冰箱中孵育過夜。

6)分別加羊抗兔二抗、羊抗大鼠二抗室溫孵育2 h。

7)每次孵育完后TBST漂白，持續(xù)10 min，反復(fù)操作3次。

8)將膜用P10-LightHRP化學(xué)發(fā)光液室溫孵育，時(shí)間持續(xù)5 min，之后封入保鮮膜，暗室內(nèi)壓入膠片，進(jìn)行曝光顯影。

9)顯影后，利用圖像分析軟件測定目的CAMK II蛋白與內(nèi)參蛋白β-actin的灰比度。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 酸棗仁湯對大鼠一般狀態(tài)的影響

第0天各組大鼠反應(yīng)迅速、皮毛光亮、活潑好動(dòng)，對外界刺激反應(yīng)敏感，而在第28天，相較于空白組，模型組大鼠反應(yīng)遲鈍、少動(dòng)、皮毛灰暗、蜷縮于箱角，對外界刺激少有回應(yīng)。

3.2 酸棗仁湯對大鼠體質(zhì)量的影響

第0天各組大鼠體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)，第28天后，相較于模型組，酸棗仁湯中、低劑量組增長速度加快，有顯著性差異(P<0.05)；氟西汀組與酸棗仁湯高劑量組增長速度明顯加快，差異極其顯著(P<0.01)，結(jié)果見表1。

3.3 酸棗仁湯對大鼠蔗糖水消耗

第7天各組大鼠糖水消耗無明顯差異(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)第28天后，與模型組比較，其余各組糖水消耗增加，有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)果見表2。

組別n第0 d第28 d空白組8201.50±7.37245.38±7.40??模型組8198.00±4.89205.35±8.65ΔΔ西藥組8202.48±3.41241.28±5.42??中藥低劑量組8205.02±3.11230.30±4.29ΔΔ?中藥中劑量組8204.02±7.84234.05±9.52Δ?中藥高劑量組8204.63±3.12243.94±4.88Δ??

注：和模型組比較，*P<0.05,**P<0.01；和空白組比較，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

組別n第0 d第28 d空白組885.53±7.52161.68±32.04??模型組883.55±8.6039.96±12.94ΔΔ西藥組880.28±8.55120.61±10.54?中藥低劑量組889.18±7.42102.73±38.38?中藥中劑量組888.83±7.36112.33±82.63?中藥高劑量組882.03±9.43108.13±23.62?

注：和模型組比較，*P<0.05,**P<0.01；和空白組比較，ΔΔP<0.01。

3.4 酸棗仁湯對大鼠曠場實(shí)驗(yàn)垂直、水平運(yùn)動(dòng)得分的影響

實(shí)驗(yàn)第0天，各組大鼠垂直得分無明顯差別(P>0.05)，第28天，與空白組相比，模型組垂直得分明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)，出現(xiàn)類似抑郁癥的癥狀，從行為學(xué)的角度觀察，可得出抑郁癥造模成功；酸棗仁湯低，中劑量組，得分均高于模型組，有顯著性差異(P<0.05)，酸棗仁湯高劑量組和氟西汀組，得分均明顯高于模型組，差異極其顯著(P<0.01)，結(jié)果見表3。

組別n第0 d第28 d空白組8102.73±12.8995.75±6.13??模型組8102.00±13.4424.51±6.02ΔΔ西藥組8110.24±12.3282.73±14.87??中藥低劑量組8104.25±7.6844.00±9.48ΔΔ?中藥中劑量組8111.52±11.8470.59±13.38Δ?中藥高劑量組8101.08±8.9898.25±14.41Δ??

注：和模型組比較，*P<0.05,**P<0.01；和空白組比較，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

3.5 酸棗仁湯對大鼠海馬CaMK Ⅱ蛋白表達(dá)水平的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組大鼠海馬CaMK Ⅱ表達(dá)水平有顯著性差異(P<0.05)；與模型組相比，氟西汀組、酸棗仁湯低、中、高劑量組大鼠海馬CaMK Ⅱ表達(dá)水平無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表4。

組別n相對表達(dá)量(CaMKⅡ/β-actin/100%)空白組42.89±0.78?模型組41.60±0.51Δ西藥組42.03±0.82中藥低劑量組42.49±0.91中藥中劑量組41.83±1.51中藥高劑量組31.39±0.74

注：和模型組比較，*P<0.05；和空白組比較，ΔP<0.05。

各組大鼠海馬CaMK II蛋白條帶印跡的比較，結(jié)果顯示：模型組大鼠海馬CaMK II蛋白的表達(dá)條帶較正常對照組大鼠明顯變細(xì)，表明CaMK II蛋白表達(dá)減少；與模型組相比，氟西汀及酸棗仁各劑量治療組的蛋白條帶明顯變粗。中藥高劑量組蛋白條帶粗于中藥中劑量組；中藥中劑量組蛋白條帶粗于中藥低劑量組。結(jié)果見圖1。

注：1：模型組；2：正常對照組；3：氟西汀藥組；4：中藥低劑量組；5：中藥中劑量組；6：中藥高劑量組。 圖1 各組大鼠海馬中CaMKⅡ蛋白表達(dá)

3.6 酸棗仁湯對大鼠海馬CaMK ⅡmRNA表達(dá)水平的影響

RT-PCR方法檢測CaMK ⅡmRNA，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白組表達(dá)量以1為基準(zhǔn)，與空白組比較，模型組大鼠海馬CaMKⅡ表達(dá)水平有顯著性增高(P<0.05)；與模型組相比，氟西汀組、酸棗仁湯中、高劑量組大鼠海馬CaMKⅡ表達(dá)水平下降，有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)果見表5，圖2。

4 討論

CaMK II是一種在腦組織尤其是海馬內(nèi)高度表達(dá)的蛋白酶，在神經(jīng)可塑性及記憶形成中具有重要的作用，是神經(jīng)元內(nèi)最重要的Ca2+受體蛋白，并且直接參與神經(jīng)元的應(yīng)激和修復(fù)過程[4-8]。大腦海馬區(qū)屬于腦區(qū)的邊緣系統(tǒng)，與學(xué)習(xí)、行為、情緒控制密切相關(guān)，也是應(yīng)激損傷的主要器官。當(dāng)CaMK II缺乏時(shí)可引起環(huán)磷酸腺苷/環(huán)磷酸鳥苷平衡失調(diào)，慢性刺激造成海馬神經(jīng)元損傷，引起結(jié)構(gòu)和功能的改變，影響長時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)(LTP效應(yīng))，從而影響學(xué)習(xí)及記憶功能、情緒等方面的改變[9-10]。所以，CaMK II是神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)因子，是抑郁癥及抗抑郁治療機(jī)制中重要的途徑，并在學(xué)習(xí)及記憶功能方面發(fā)揮重要作用。

組別n相對表達(dá)量(2-△△CT)空白組41模型組41.97±1.10Δ西藥組40.28±0.08?中藥低劑量組40.73±0.25中藥中劑量組40.41±0.11?中藥高劑量組40.32±0.09?

注：和模型組比較，*P<0.05；和空白組比較，ΔP<0.05。

圖2 各組大鼠CaMKⅡ mRNA水平比較

CaMK Ⅱ是突觸后致密物的重要組成部分之一，作用底物廣泛的絲氨酸/蘇氨酸磷酸化蛋白激酶，占其蛋白總量約20%～30%。大多數(shù)具有激酶活性的蛋白分子在組織中的表達(dá)量都相對較低，所以CaMKⅡ在神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達(dá)必然具有其特殊意義。在信息傳遞中起關(guān)鍵的作用，對治療抑郁癥及預(yù)防抑郁癥發(fā)生的發(fā)病機(jī)制起重要作用。CaMK Ⅱ的功能失調(diào)與許多疾病發(fā)生有關(guān)，如抑郁癥、阿爾茨海默癥和癲癇等[9-12]。抗抑郁藥慢性起效的生物學(xué)機(jī)制包括神經(jīng)突觸重塑的過程，CaMK Ⅱ蛋白可能通過參與CaM信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性，參與抑郁癥的發(fā)生。同時(shí)，CaMK Ⅱ是CaMK通路中重要的調(diào)控指標(biāo),Ca2+/CaM是主要激活CaMK Ⅱ的信號分子，促使CREB磷酸化，調(diào)節(jié)下游基因轉(zhuǎn)錄，CaMK在鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起著軸心的作用。其不但受CaM的活化，而且受各種蛋白激酶的調(diào)節(jié)，蛋白激酶的磷酸化和去磷酸化是CaMK活化的開關(guān)。CaMK磷酸化可以進(jìn)一步活化谷氨酸受體，活化其他離子通道，從而改變神經(jīng)元的興奮性，活化下游的CREB以調(diào)節(jié)某種蛋白的合成。改變神經(jīng)元的形態(tài)、突觸的數(shù)量以及結(jié)構(gòu)。在突觸可塑性和學(xué)習(xí)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[13-15]。在腦組織中，CaMK Ⅱ蛋白及基因的上調(diào)，提高了信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性，是治療抑郁癥的重要作用機(jī)制之一。

本研究結(jié)果顯示,抑郁癥模型組大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中垂直水平總得分亦明顯低于對照組，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間也明顯長于對照組，說明大鼠在慢性應(yīng)激環(huán)境下，自主活動(dòng)明顯減少。模型組大鼠海馬組織中CaM、 CaMK II蛋白及基因表達(dá)水平低于對照組，說明這些關(guān)鍵分子參與了抑郁癥行為學(xué)改變和神經(jīng)元損傷的發(fā)生發(fā)展。RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,酸棗仁湯能降低模型組大鼠海馬CaMKⅡ的mRNA表達(dá)，提示其抗抑郁作用可能與抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，減少腦損傷有關(guān)。有研究表明CaMK Ⅱ可能通過參與鈣調(diào)蛋白通路調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性，參與抑郁癥的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明酸棗仁湯可能對慢性應(yīng)激導(dǎo)致抑郁的大鼠有一定的治療作用。 Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CaMK II蛋白表達(dá)無顯著性差異，據(jù)分析可能存在實(shí)驗(yàn)條件下蛋白表達(dá)的時(shí)間不夠充分，因此未能顯示出差異。

酸棗仁湯治療28天后，大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間也明顯縮短，說明酸棗仁湯能增進(jìn)抑郁癥大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力，改善活動(dòng)度和絕望狀態(tài)；大鼠海馬組織中CaM、CaMK II蛋白和CREB mRNA表達(dá)水平升高，說明酸棗仁湯有抗抑郁效應(yīng)，其機(jī)制可能與激活海馬組織中 CaMK Ⅱ基因表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn) CaMK Ⅱ蛋白磷酸化，最終達(dá)到預(yù)防及治療抑郁證的作用。