重度脂濁對間接離子選擇電極法測定血清鈉鉀氯的干擾

倪莉，方茂，朱麗丹，葛海峰，徐曉杰，丁紅香

（1.溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院 醫(yī)學檢驗中心，浙江 溫州 325027；2.余姚市婦幼保健院 檢驗科，浙江 寧波 315400）

近年來，由于生化檢測項目的日漸豐富，全自動生化分析儀的大量應用，以及臨床對檢測結果準確度的高度重視，樣本中的干擾成分對結果的影響越來越受到關注。在臨床工作中，脂濁標本時有出現(xiàn)，常常干擾檢驗科工作人員快速、準確地出具檢驗報告。電解質(zhì)檢測在臨床診療工作中具有重要的指導意義，往往作為急診檢驗項目要求檢驗科快速給出結果。臨床工作中發(fā)現(xiàn)直接離子選擇電極法（以下簡稱直接法）檢測重度脂濁血清標本鈉鉀氯結果與間接離子選擇電極法（以下簡稱間接法）檢測結果存在明顯差異，本研究嚴格按照美國國家臨床實驗室標準委員會（National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS）EP7-A2和EP9-A2文件，通過患者樣本比對的偏倚分析及體外干擾試驗來研究脂濁對此2種方法檢測血清鉀鈉氯干擾情況，以明確脂濁對間接法測定血清鉀鈉氯的干擾。

1 對象和方法

1.1 對象 按照NCCLS EP7-A2和EP9-A2文件方案[1-2]，收集2018年9月溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院住院患者無溶血、無脂濁血清樣本40份[3]，用作直接法和間接法檢測鈉、鉀和氯的可比性試驗。另外收集40份2018年9月溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院住院患者不同脂濁程度的血清標本（脂濁指數(shù)從+～++++）分別用2種方法檢測。從原先收集的40份無溶血、無脂濁血清樣本中選取高、中、低濃度鈉、氯的患者血清各5 mL至旋渦振蕩器上2 000 r/min混勻5 min，作為基礎血清A、B和C；同樣選取無脂濁、無溶血的高、中、低濃度鉀的患者血清各5 mL至旋渦振蕩器上2 000 r/min混勻5 min，分別作為基礎血清D、E和F。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑：間接法檢測血清鈉、鉀和氯采用ADVIA 2400全自動生化分析儀（上海西門子醫(yī)學診斷產(chǎn)品有限公司），采用ADVIA 2400 配套電解質(zhì)稀釋液（批號：NS832A）和校準品（批號：HS821AA），室內(nèi)質(zhì)控采用朗道室內(nèi)質(zhì)控品（批號:1199UN、946UE）；直接法檢測血清鈉、鉀和氯采用VITROS 5600全自動生化分析儀（上海強生醫(yī)療器材有限公司），采用VITROS 5600配套試劑和校準品（試劑批號：Na+：4431、K+：9712、Cl-：9832；校準品批號：Na+：3689、K+：9499、Cl-：9171），室內(nèi)質(zhì)控采用奧森多室內(nèi)質(zhì)控品（批號：D6497、E6499）。

1.2.2 2種方法檢測血清樣本：直接法：樣品或標準液不經(jīng)稀釋直接進入電極管道作電位分析；間接法：樣品或標準液用一定離子強度與pH值的稀釋液按一定比例稀釋后再送入電極管道，測量其電位。分別用2種方法檢測40例無溶血、無脂濁患者血清標本，雙份測定，測試在2 h內(nèi)完成；選取其中鈉、鉀和氯高、中、低濃度標本各1例，用2種方法各檢測20次，計算批內(nèi)精密度。分別用2種方法檢測40例不同脂濁程度患者血清標本，雙份測定，測試在2 h內(nèi)完成。

1.2.3 體外干擾試驗：利用A、B、C、D、E和F 6份基礎血清標本和脂肪乳劑（廣州百特僑光醫(yī)療用品有限公司，批號：GM1507096）設計體外干擾試驗，將脂肪乳與蒸餾水按4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:9、1:19 稀釋，加上蒸餾水和脂肪乳原液，總共11管，與收集的A、B和C基礎血清以1:9混合[4]，分別用直接法和間接法測定鈉氯濃度、甘油三酯濃度和脂濁指數(shù)（為儀器提供的量化脂濁指數(shù)，無脂濁≤25、25＜+≤43、43＜++≤208、＜208+++≤343和++++＞343）；同理，將配制好的不同濃度脂肪乳與D、E和F基礎血清以1:9混合，分別用直接法和間接法測定鉀濃度、脂濁指數(shù)和甘油三酯濃度，分析2種方法檢測鉀鈉氯結果產(chǎn)生明顯偏倚的甘油三酯濃度和脂濁指數(shù)。6份樣本分別用2種方法雙份測定，測試在2 h內(nèi)完成。

1.3 統(tǒng)計學處理方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以表示，直接法和間接法測定血清鈉、鉀和氯的兩樣本均數(shù)比較采用配對t檢驗；體外干擾試驗以干擾值小于2017年衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價規(guī)定的總允許誤差的1/2作為無明顯干擾的判斷標準（鈉±2%、鉀±3%、氯±2.5%）[5]。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 方法重復性 2 種方法鈉、鉀和氯批內(nèi)變異系數(shù)均小于2017 年衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)量評價標準總允許誤差的1/4（鈉±1%，鉀±1.5%，氯±1.25%）。2種方法每天隨樣本測定的室內(nèi)質(zhì)控品結果均在控制范圍內(nèi)，見表1。

2.2 2種方法測定鈉鉀氯結果比較 40例無脂濁、無溶血標本分別用直接法和間接法測定血清鉀鈉氯，結果顯示2種方法測定的鉀鈉氯結果之間的差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

2.3 脂濁對間接法檢測血清鈉的干擾 甘油三酯濃度在40.6 mmol/L、脂濁指數(shù)為1 620對間接法測定血清鈉離子濃度在154.5 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（＞-2%）；甘油三酯濃度在39.8 mmol/L、脂濁指數(shù)為1 390對間接法測定血清鈉離子濃度在129.2 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（＞-2%）；甘油三酯濃度在35.3 mmol/L、脂濁指數(shù)為965對間接法測定血清鈉離子濃度在113 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（＞-2%）。

表1 直接法和間接法檢測血清鈉鉀氯批內(nèi)變異系數(shù)（%）

表2 直接法和間接法測定無脂濁標本鉀鈉氯的結果比較（每組n=40，mmol/L）

表2 直接法和間接法測定無脂濁標本鉀鈉氯的結果比較（每組n=40，mmol/L）

方法 Na+ K+ Cl-直接法 141.30±1.67 4.15±0.29 104.40±2.50間接法 141.40±1.69 4.15±0.28 104.60±2.52 t 0.826 -0.951 1.390 P 0.414 0.348 0.173

2.4 脂濁對間接法檢測血清鉀的干擾 甘油三酯濃度在28.4 mmol/L、脂濁指數(shù)為710對間接法測定血清鉀離子濃度在5.8 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-3%）；甘油三酯濃度在33.25 mmol/L、脂濁指數(shù)為993 對間接法測定血清鉀離子濃度在4.35 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-3%）；甘油三酯濃度在30.4 mmol/L、脂濁指數(shù)為867對間接法測定血清鉀離子濃度在2.8 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-3%）。

2.5 脂濁對間接法檢測血清氯的干擾 甘油三酯濃度在22.5 mmol/L、脂濁指數(shù)為680對間接法測定血清氯離子濃度在126.6 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-2.5%）；甘油三酯濃度在20.5 mmol/L、脂濁指數(shù)為645 對間接法測定血清氯離子濃度在94.3 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-2.5%）；甘油三酯濃度在20 mmol/L、脂濁指數(shù)為615對間接法測定血清氯離子濃度在79.6 mmol/L已經(jīng)產(chǎn)生明顯負偏倚（偏移＞-2.5%）。

2.6 偏倚分析 40份脂濁指數(shù)分別為+～++++的患者血清標本，分別用直接法和間接法測定血清鉀鈉氯濃度，計算偏倚，與之前檢測的40份無脂濁標本進行比較作圖，x軸為直接法測定的鈉、鉀和氯結果，y軸為間接法測定值與直接法測定值的差值跟直接法測定值的比值，結果顯示脂濁對間接法測定血清鈉、鉀和氯存在負干擾（見圖1-3）。直接法測定脂濁血清鈉、鉀和氯明顯高于間接法，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

圖1 脂濁對間接法測定血清鈉的干擾

圖2 脂濁對間接法測定血清鉀的干擾

圖3 脂濁對間接法測定血清氯的干擾

3 討論

目前檢測電解質(zhì)的方法有火焰光度法、酶法、離子選擇電極法等?；鹧婀舛确ㄓ捎谄洳僮髀闊⒉贿m合大批量檢測，在臨床中已基本被淘汰[6]，酶法由于酶的穩(wěn)定性以及部分試劑干粉需要復溶，在臨床的推廣亦受到限制[7]，離子選擇電極法因其簡便、靈敏、快速的特點，被大多數(shù)實驗室普遍使用。

本研究顯示，對于無脂濁標本，兩法檢測血清鈉鉀氯的結果無明顯差異；患者脂濁樣本兩法檢測結果比較及體外干擾試驗均提示重度脂濁標本采用間接法檢測血清鉀鈉氯存在明顯負偏倚。

離子選擇電極法是利用電極電位和離子活度的關系來測定被測離子活度的一種電化學分析法[8]，但所測定的電解質(zhì)離子只限于分布在血清中的水相部分，一般情況下，血清中水相占總體積的比例穩(wěn)定，約為93%，剩余7%的體積則是被蛋白質(zhì)和脂類所占據(jù)。離子選擇電極法依據(jù)對樣本是否進行稀釋分為直接法和間接法。兩種方法的區(qū)別在于：間接法檢測時需用一定離子強度的稀釋液對血清進行1:30左右的稀釋，操作簡單、檢測快速，且電極工藝小巧，適合裝備大型自動生化分析儀，雖然只稀釋和檢測了占93%水相中的電解質(zhì)，但在正常情況下可通過換算得到實際的電解質(zhì)濃度[9]。然而在病理情況下（如重度脂濁），血清中固體物質(zhì)部分增加，大量脂質(zhì)占據(jù)了原本屬于一部分水相的體積，引起水相比例減少，而被脂質(zhì)占據(jù)的體積內(nèi)并不含電解質(zhì)，此時若仍按93%的水相比例來換算，就會導致鈉、鉀和氯結果出現(xiàn)假性偏低[10]。而直接法不需要稀釋血清，直接測定血清樣本，只檢測和計算水相中的電解質(zhì)濃度，并且電極具有多層涂膜結構，將血脂和蛋白異常的干擾降至最低[11-12]，結果更真實可靠。

綜上所述，脂濁對間接法測定血清鈉鉀氯存在負干擾，導致檢測結果假性偏低。隨著全自動生化分析儀的廣泛應用，間接法比以往更加廣泛地用于臨床電解質(zhì)的測定。當遇到重度脂濁，若采用間接法檢測血清鈉鉀氯，檢測結果明顯偏低，對臨床醫(yī)師判斷患者病情產(chǎn)生誤導，因此，重度脂濁樣本應該以直接法的檢測結果為準，也可以使用高速離心去除脂質(zhì)后，再采用間接法來測定，避免結果出現(xiàn)假性降低[13-14]。