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    熒光定量PCR法檢測食管癌中Livin基因特征分析

    2019-11-12 10:04:44張娜娜
    健康大視野 2019年20期
    關(guān)鍵詞:相關(guān)性食管癌

    張娜娜

    【摘 要】目的:分析熒光定量PCR法檢測食管癌中Livin基因特征,探究其臨床意義。方法:選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對(duì)象,采用熒光定量PCR法分別對(duì)患者的癌組織以及癌旁(距離>6cm)的正常組織中的Livin基因進(jìn)行檢測,探究其表達(dá)與食管癌之間的關(guān)系。結(jié)果:采用熒光定量PCR法進(jìn)行檢測后,食管癌患者的癌組織中Livin基因表達(dá)水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達(dá)水平,其中P<0.05,差異性顯著。結(jié)論:通過熒光定量PCR法對(duì)食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進(jìn)行分析后,可以明確得出Livin基因的表達(dá)水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性,為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

    【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR法;食管癌;Livin基因;相關(guān)性

    【中圖分類號(hào)】R691.4【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019(2019)20--02

    食管癌屬于一種多發(fā)性消化道腫瘤,具有極高的死亡率,給患者的生命健康造成嚴(yán)重的威脅。食管癌患者早期癥狀不明顯,因此食管癌被確診后往往已經(jīng)為中晚期,延誤了最佳治療時(shí)期[1]。因此,探究食管癌癌組織與正常組織中某些基因表達(dá)的差異對(duì)于食管癌的早期診斷具有重要的意義。我院為了探究Livin基因特征與食管癌的相關(guān)性,進(jìn)行了本次研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對(duì)象,取患者癌組織和正常組織各86例離體制成標(biāo)本,置于超低溫下冷凍保存。86例患者中男性為56例,女性為30例,年齡在38-75歲,平均年齡為(57.21±3.54)歲,病程在1-5年,平均病程為(2.53±1.24)年,其中腺鱗癌患者為12例,食管鱗癌患者為74例。本次研究所選患者均被確診為食管癌,臨床資料完整,手術(shù)前均未進(jìn)行放化療治療。本次研究經(jīng)過倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),且經(jīng)過患者和家屬的知情且同意。

    1.2 方法

    1.2.1 材料和設(shè)備 該研究選用RNA提取劑和qPCR試劑均為熒光定量PCR檢測專用試劑,cDNA 第一鏈合成試劑盒、引物以及探針均購自中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因有限公司,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測儀器( 型號(hào): Piko-Real 96 Real - Time PCR System) 購自美國賽默飛世爾公司[2]。

    1.2.2 樣品RNA提取和cDNA的制備 分別取患者癌組織和正常組織樣品研磨后加入1mlRNA提取劑,混勻靜置5min,按照標(biāo)準(zhǔn)提取方法提取組織中的RNA,提取后采用紫外分光光度計(jì)和1%甲醛變性凝膠電泳對(duì)其進(jìn)行定量分析,選取純度和濃度均合格的RNA備用。采用標(biāo)準(zhǔn)cDNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,制備cDNA,取2 μg上述制得的RNA樣品為模板,加無RNase 水定容至6 μL,加入1 μL 50 μmol/L Oligo( dT),5 μL純水,混勻后,置于65℃條件下反應(yīng)5 min,迅速冰浴后依次加入緩沖液及其他試劑后混勻,置于42℃ 反應(yīng)60 min,最后將其70℃反應(yīng)10min,即得。將制備的cDNA冷凍保存后,備用[3]。

    1.2.3 熒光定量PCR檢測 采用熒光定量PCR檢測法對(duì)上述制得的cDNA進(jìn)行基因定量檢測,反應(yīng)條件為:50℃條件下反應(yīng)10s,升溫至95℃反應(yīng)10min,之后維持同溫度反應(yīng)15s,之后溫度降至60℃反應(yīng)反應(yīng)1min,按照這個(gè)反應(yīng)為一次,共反應(yīng)42次,反應(yīng)結(jié)束后,觀察輸出的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)含量[4]。

    1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)表達(dá)量,對(duì)患者癌組織和正常組織中Livin基因水平進(jìn)行比較,探究Livin基因特征與食管癌發(fā)生的相關(guān)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次食管癌患者的研究結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析,運(yùn)用t檢驗(yàn)方法,并采用進(jìn)行檢驗(yàn),采用重復(fù)多次的實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算兩組患者的Livin基因水平。當(dāng)P<0.05時(shí),表示兩組數(shù)據(jù)之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 食管癌患者癌組織和正常組織中Livin基因水平對(duì)比情況

    采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)表達(dá)量水平后,得出:食管癌患者的癌組織中Livin基因水平明顯高于正常組織中的Livin基因水平,其中t=6.212,P=0.021,差異性顯著,詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。

    3 討論

    Livin基因所表達(dá)的蛋白為一種人類凋亡抑制蛋白,該種蛋白具有抗細(xì)胞凋亡的特性,能夠使得腫瘤細(xì)胞獲得不死性。大量的研究表明,該種基因的存在與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展均具有一定的關(guān)系[5]。

    我院為了探究食管癌與Livin基因特征之間的相關(guān)性,選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者,采用熒光定量PCR法分別對(duì)患者的癌組織以及正常組織中的Livin基因進(jìn)行檢測后得出:食管癌患者的癌組織中Livin基因表達(dá)水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達(dá)水平,其中P<0.05,差異性顯著。

    綜上所述,通過熒光定量PCR法對(duì)食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進(jìn)行分析后,可以明確得出Livin基因的表達(dá)水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性,為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    黃麗萍,彭安邦.凋亡抑制蛋白Livin與消化道腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2012,1604:507-508.

    李娜,李勇,高洪波,郭淑霞,楊鑫磊,王冬慧,鞏平.凋亡抑制蛋白Livin在食管癌中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥,2011,5148:85-86+120.

    錢志英,何流,何曉松,馮繼峰,唐金海,潘良熹,張成陽.熒光定量PCR法檢測食管癌外周血Survivinm-RNA的臨床意義[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2006,07:56-58.

    李慎柯,吳新,劉月芬,姜祖光,岳文彬.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測食管癌組織中細(xì)胞周期蛋白CyclinD1和CyclinA基因的表達(dá)[J].醫(yī)藥論壇雜志,2014,3505:56-58.

    錢志英,何流,潘良熹,何曉松,張成陽.熒光定量PCR法檢測食管癌中Survivin基因的臨床研究[J].腫瘤研究與臨床,2005,02:86-88.

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