高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷的檢測(cè)方法研究

郭暢冰，徐芳菲，李 蕾，楊懷雷，謝麗娟，王國(guó)明，曹志強(qiáng)*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

人參（Panax ginsengC.A.Mey）為五加科人參屬多年生草本植物，素有“百草之王”的美譽(yù)，在我國(guó)最早的本草學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載，人參具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智之功效[1]。一直以來(lái)人參均作為中國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材廣泛用于藥物、藥膳及食物滋補(bǔ)，在中國(guó)已被廣泛應(yīng)用了幾千年[2]。隨著人們生活水平和健康意識(shí)的提高，近年來(lái)以人參為主要原料，開(kāi)發(fā)的人參保健食品和食品日益增加，在2012年國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)人參進(jìn)入新資源食品后，人參的產(chǎn)業(yè)鏈迅速增長(zhǎng)，各類人參食品應(yīng)運(yùn)而生[3～4]。因?yàn)樾l(wèi)生部規(guī)定了人參進(jìn)入食品的用量為每日不超過(guò)干參3g，如何精準(zhǔn)確定人參的添加量是多少，便成為質(zhì)量檢驗(yàn)單位的最新課題。由于人參食品中油脂、蛋白含量大，傳統(tǒng)檢測(cè)方法很難在去除干擾的前提下準(zhǔn)確檢出人參食品中的人參皂苷成分，如果不能準(zhǔn)確檢測(cè)其含量，可能消費(fèi)者會(huì)因?yàn)槭秤眠^(guò)量而損害身體健康。因此，急需尋求一種簡(jiǎn)便快捷、操作性強(qiáng)的人參食品中人參皂苷含量的檢測(cè)方法。本文采用乙醇提取-大孔樹(shù)脂法與傳統(tǒng)藥典法提取方法進(jìn)行對(duì)比、分析，探究可行性高、方便簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法，并對(duì)本方法的藥材轉(zhuǎn)移率及加樣回收率進(jìn)行研究[5]。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人參粉、人參蛋糕（吉林人參研究院自制）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

對(duì)照品人參皂苷Rg1、Re、Rb1均購(gòu)于吉林大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室，純度均≥98%。正丁醇、硫酸、三氯甲烷、乙醇、氫氧化鈉、甲醇、乙腈，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純?cè)噭?，大孔?shù)脂：D101大孔吸附樹(shù)脂，山東魯抗立科藥業(yè)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀（Thermo UltiMate 3000，美國(guó)）；十萬(wàn)分之一電子天平（BT125D，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；超聲波清洗儀（KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司）；超純水機(jī)（ELGA（DI）；威立雅水處理技術(shù)（UK））；數(shù)顯式恒溫水浴鍋（HH-6，金壇市江南儀器廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 供試品溶液的制備

表1 供試品溶液的制備

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、及人參皂苷Rb1對(duì)照品，加甲醇制成1ml各含0.2mg的混合液，搖勻，即得。

2.3 人參皂苷Rg1+Re、Rb1含量的測(cè)定

2.3.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。具體參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 色譜條件

2.3.2 測(cè)定

分別精密吸取各供試品溶液10μL，注入高效液相色譜中，按2.4.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算。

3 結(jié)果與分析

3.1 人參食品中人參皂苷含量的測(cè)定結(jié)果

精密稱取供試品，每種方法平行稱取三份試樣，按照“2.1”項(xiàng)下制備，進(jìn)行分析，不同前處理發(fā)方法檢測(cè)的人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，結(jié)果見(jiàn)表3，圖譜見(jiàn)圖 1、圖 2、圖 3。

表3 對(duì)比兩種前處理方法檢測(cè)不同皂苷含量

通過(guò)表中數(shù)據(jù)所示，方法2（乙醇提取-大孔樹(shù)脂法）中人參皂苷各指標(biāo)的含量明顯高于方法1（藥典法）。

圖1 人參皂苷Rg1、Re、Rb1混合標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

圖2 方法1供試品溶液HPLC色譜圖

圖3 方法2供試品溶液HPLC色譜圖

3.2 藥材轉(zhuǎn)移率

取人參藥材600mg，平行稱取三份試樣，按照“2.1”項(xiàng)下方法2制備，進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表4、表5。

表4 人參藥材中人參皂苷的含量

表5 人參蛋糕的藥材轉(zhuǎn)移率

通過(guò)表中數(shù)據(jù)所示，三次平行實(shí)驗(yàn)的藥材轉(zhuǎn)移率＞85%，提示該方法（方法2：乙醇提取-大孔樹(shù)脂法）提取率高，方法科學(xué)合理。

3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下方法2連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 精密度實(shí)驗(yàn) （n=5）

3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下方法2在0、3、6、20、24h測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表 7。

表7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) （n=5）

3.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，平行5份，按照“2.1”項(xiàng)下方法2獨(dú)立進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)（n=5）

3.6 回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收率法，分別稱取樣品6份 （含量為Rg1+Re=0.352mg/g， 其 中 Rg1 為 0.085mg/g，Re 為0.275mg/g，Rb1 為 0.302 mg/g)，每份約 7.5g，分別在樣品中加入對(duì)照品溶液1ml（對(duì)照品溶液：精密稱取人參皂苷Rg16.52mg、人參皂苷Re20.25mg、人參皂苷Rb122.09mg，加甲醇定容于10ml量瓶中，搖勻），按2.1中方法2進(jìn)行處理，以甲醇定容于5ml量瓶中，搖勻，精密吸取10μl注入液相色譜儀中，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 各成分的回收率實(shí)驗(yàn)

4 結(jié)論

高蛋白、高脂肪類人參食品中糖類、脂肪類含量較高，傳統(tǒng)藥典方法檢測(cè)人參皂苷含量偏低，本實(shí)驗(yàn)采用乙醇提取和D101大孔樹(shù)脂吸附法相結(jié)合提取高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷。通過(guò)與傳統(tǒng)藥典方法對(duì)比，根據(jù)測(cè)得的Rg1+Re、Rb1皂苷含量可知，本方法明顯優(yōu)于藥典方法，提取的皂苷含量約是藥典法的3倍且重復(fù)性好。從提取皂苷含量來(lái)看，本方法提取率高，且操作簡(jiǎn)便。而且本方法的藥材轉(zhuǎn)移率及加樣回收率均可達(dá)85%以上。由此可見(jiàn)本方法可作為高蛋白、高脂肪類人參食品中人參皂苷的檢測(cè)方法，對(duì)人參食品中人參添加量的控制具有重要意義。