羅平小黃姜中6-姜辣素含量測定的方法學(xué)研究

楊瀚 白雪飛 楊嬌 李麗超 馬娜 郭利群

摘要：目的 建立羅平小黃姜6-姜辣素的含量測定方法。方法 高效液相色譜法，色譜柱ZORBAX-SB-C18（規(guī)格：4.6*150 5-Micron）;流動相為乙腈：水=45：55溶液;流速為1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量：10 μL;柱溫：35℃;檢測波長280 nm。結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.55535 X-7.15104（R =0.99999）進(jìn)樣量在107～8025 ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。準(zhǔn)確度試驗RSD為3.8%（n=9），平均回收率為97.7%，精密度試驗RSD為0.18%，重復(fù)性試驗RSD為2.9%。結(jié)論 本實驗方法穩(wěn)定可靠、簡便可行、具有較好的重現(xiàn)性，為羅平小黃姜的質(zhì)量評價提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：羅平小黃姜、6-姜辣素、高效液相色譜法、含量測定

中圖分類號：R927.2?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2019）09-0065-03

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of 6-gingerin in Luoping Small Yellow Ginger. Methods：High performance liquid chromatography was used. Column was ZORBAX-SB-C18（specification：4.6*150 5-Micron），mobile phase was acetonitrile，water was 45：55 solution，flow rate was 1.0 mL·min-1，injection volume was 10 μL，column temperature was 35℃ and detection wavelength was 280 nm. Results：The standard curve regression equation was Y=0.55535 X-7.15104（R=0.99999）injection volume in the range of 107 to 8025 ng，and the linear relationship is good. The accuracy test RSD was 3.8%（n=9），the average recovery was 97.7%，the precision test RSD was 0.18%，and the repeatability test RSD was 2.9%. Conclusion：This method is stable，reliable，simple and feasible，and has good reproducibility and can provide a basis for the quality evaluation of Luoping small yellow ginger.

【Key words】Luoping small yellow ginger，6-gingerol，HPLC，content determination

羅平小黃姜為姜科（Zingiberaceae）姜屬（Zingiber Boehm）植物姜（Zingiber officinale Rosc）的塊莖，干姜：本品為姜科植物姜的新鮮根莖[1]。秋、冬二季采挖，除去須根和泥沙。生姜：本品為姜科植物姜的干燥根莖，冬季采挖除去須根和泥沙，曬干或低溫干燥。趁鮮切片曬干或低溫干燥者稱為 “干姜片”[2]。秋冬季挖取姜的根莖，洗凈，刮取外層栓皮，曬干。主要栽培于云南省曲靖市羅平縣。根莖供藥用，“干姜”主治心腹冷痛，吐瀉，肢冷脈微，寒飲喘咳，風(fēng)寒濕痹[3-5]?！吧敝髦胃忻帮L(fēng)寒，嘔吐，痰飲，喘咳，脹滿;解半夏、天南星及魚蟹、鳥獸肉毒[6-7]。又可作烹調(diào)配料或制成醬菜、糖姜。莖、葉、根莖均可提取芳香油，用于食品、飲料及化妝品香料中[8]。6-姜辣素為羅平小黃姜中主要的指標(biāo)成份。本實驗以6-姜辣素含量為指標(biāo)，采用高效液相法測定羅平小黃姜中6-姜辣素的含量。本實驗旨在為羅平小黃姜質(zhì)量評價提供依據(jù)。

羅平小黃姜樣品由云南現(xiàn)代民族藥工程技術(shù)研究中心總工程師郭毅新鑒定，標(biāo)本存放于云南現(xiàn)代民族藥工程技術(shù)研究中心標(biāo)本室，標(biāo)本號：CDYN-HS-00111。

1 儀器與材料

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀，電子天平（賽多利斯 SI-224，d=0.1 mg），超聲波清洗器（天津恒奧科技 HU-15-005），甲醇 GR（上海星可）批號：1866507 650，乙腈 GR（默克）批號：10885130 717，6-姜辣素對照品，購于上海安譜實驗科技股份有限公司，批號：H5730010，標(biāo)示含量：98.2%，水（純凈水）;小黃姜（干姜），購于云南羅平（2017年12月10日采購）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定條件 Agilent 1260檢測器高效液相色譜儀，色譜柱：ZORBAX-SB-C18（規(guī)格：4.6*150 5-Micron），檢測波長：280nm，柱溫：35℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL，檢測波長280 nm，分析時間：15 min，流動相：（乙腈：水=45：55）。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備溶液配制：精密稱取6-姜酚對照品0.0107 g，于10 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：1.07 mg/mL）

2.2.2 對照品上機(jī)溶液配制 量取對照品儲備溶液 1mL至10 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：0.107 mg/mL）

2.2.3 對照品加標(biāo)溶液的配制 精密稱取6-姜辣素對照品0.0216 g，于5 mL容量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻即得。（濃度：4.32 mg/mL。）

2.2.4 樣品溶液的制備 稱取過2號篩的試樣約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得。

3 方法學(xué)考察

3.1 線性關(guān)系與線性范圍考察 取配置好的對照品溶液，分別進(jìn)樣1 μL、5 μL、10 μL、25 μL、50 μL、75 μL。以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣（ng）量為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.55535X-7.15104（r=0.9999），進(jìn)樣量107～8025ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1.

3.2 精密度試驗 取對照品上機(jī)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，結(jié)果見表2。

3.3 重復(fù)性試驗 參照樣品溶液的配制方法，制備8份樣品溶液，分別依次進(jìn)樣10 μL。記錄6-姜辣素的保留時間和相應(yīng)的峰面積，并計算6-姜辣素的含量，結(jié)果見表3

3.4 穩(wěn)定性試驗 參照樣品溶液的配制方法，制備2份樣品溶液，每隔2 h、6 h、8 h、24 h分別依次進(jìn)樣10 μL。記錄6-姜辣素的保留時間和相應(yīng)的峰面積，結(jié)果見表4。

3.5 準(zhǔn)確度試驗 全程加標(biāo)，加標(biāo)量分別為所測樣品含量的50%、100%、150%（每個梯度3次平行），參照樣品溶液的配制，樣品含量為0.76%，結(jié)果見表5。

3.6 專屬性試驗 參照對照品溶液、供試品溶液的配制方法，配制對照品溶液、供試品溶液各1份，用配制對照品的溶劑作為溶劑空白溶液，分別進(jìn)樣，在對照品主要成分保留時間左右的位置，空白溶液相對應(yīng)的時間應(yīng)無雜質(zhì)干擾峰。

4 系統(tǒng)適應(yīng)性

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-甲醇-水（45：55）為流動相;檢測波長為280nm。理論板數(shù)按6-姜辣素峰計算應(yīng)不低于5000。本品按干燥品計算，含6-姜辣素不得少于0.30%。

5.討論

本研究建立了羅平小黃姜6-姜辣素的含量測定方法，對線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度等各方面進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)該方法專屬性好、實用性強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

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（收稿日期：2019-07-11）