朱彩燕 謝宜杰 廖華衛(wèi) 黃曉明
摘? 要:目的 建立祛黃褐斑丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 顯微鑒別祛黃褐斑丸中當(dāng)歸、黃芩、巴戟天三味藥材;采用薄層色譜法對(duì)祛黃褐斑丸中淫羊藿、黃芩兩味藥材進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果 方中當(dāng)歸、黃芩、巴戟天三味藥材顯微特征明顯,圖像清晰;方中淫羊藿、黃芩兩味藥的薄層色譜具有鑒別特征,色譜斑點(diǎn)清晰,專屬性強(qiáng),Rf值適中,陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論 顯微鑒別與薄層色譜法簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
關(guān)鍵詞:祛黃褐斑丸? 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)? 薄層鑒別? 顯微鑒定
中圖分類號(hào):R-332 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1672-3791(2019)07(b)-0198-04
Abstract: ObjectiveTo establish the quality standard for Cleaning Away chloasma Pill. Methods The Microscopic identification was used to identify Angelica? sinensis, Scutellaria baicalensis georgi and Morinda officinalis. The thin-layer chromatography(TLC) technique was used to identify epimedium and Scutellaria baicalensis. Results The microscopic features were obvious. The chromatographic spots were clear and specific,and the Rf values were moderate. The negative controls were without interference. Conclution The method of TLC and Microscopic identification and was convenient,effective and accurate for the quality control of Cleaning Away chloasma Pill.
Key Words: Cleaning Away chloasma pill; Quality Standard; Thin-layer chromatography; Microscopic identification
丸劑的制備方法主要有:泛制法、塑制法、滴制法。泛制法用于水丸、水蜜丸、糊丸、濃縮丸、微丸等的制備;丸劑具有以下優(yōu)點(diǎn):藥物的有效利用率較高;釋藥緩慢而持久,適宜于慢性病的調(diào)養(yǎng)治療,并能延緩毒劇藥物在體內(nèi)的吸收,減少不良反應(yīng);生產(chǎn)設(shè)備及技術(shù)工藝簡(jiǎn)單等。但丸劑也存在著嚴(yán)重的缺點(diǎn):由于賦形劑的特殊性,生產(chǎn)過(guò)程中容易造成崩解度不合格,染菌嚴(yán)重,衛(wèi)生學(xué)不符合要求,口味不佳,用藥周期長(zhǎng),服藥量大,不適合急癥用藥等。
水丸大生產(chǎn)只能用泛制法,但工藝繁瑣,周期長(zhǎng),占地面積大,崩解及衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)難控制等,而用機(jī)器塑制法制備則可克服上述缺點(diǎn)[1]。若處方中的藥物粘性較差,加熱水也不足以激發(fā)其粘性時(shí),可適量加一些淀粉漿或糊精漿作為粘合劑,淀粉和糊精的用量以能改善藥料粘性但不影響藥丸溶散為宜,一般用10%的量,即可達(dá)到目的,藥料的硬度一般應(yīng)以成坨而不松散為宜[2]。
蜜丸指將藥物細(xì)粉以煉制過(guò)的蜂蜜為黏合劑制成的丸劑。制備蜜丸可以通過(guò)調(diào)整用2蜜量或用水量、煉蜜的程度及和坨時(shí)的蜜溫和水溫調(diào)整藥材的粘性和硬度。制蜜丸時(shí)用蜜量一般是藥粉的0.8~0.9倍[3]。何群等[4]用正交試驗(yàn)法探討了降脂丸制備工藝中蜜與藥粉比例、煉蜜程度、和坨溫度三因素對(duì)丸型成型質(zhì)量的影響,結(jié)果表明,老蜜(d=1.42)在80℃左右和坨,藥粉與蜜為1∶1.56時(shí),制出的小蜜丸最好。肖何用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)六味地黃丸制劑的和坨工藝進(jìn)行了改進(jìn)研究,優(yōu)選出最佳工藝條件,即每次加軟材16kg,軟材溫度30℃,輔料50mL,和坨時(shí)間15min,上述因素對(duì)和坨的影響程度依次為軟材量>和坨時(shí)間>輔料量>軟材溫度,結(jié)果表明,新工藝成品率提高6.5%,減輕了勞動(dòng)強(qiáng)度,并首次選用混合機(jī)制軟材、煉膠機(jī)和坨的方法制備可泡服型小蜜丸[5]。
傳統(tǒng)蜜丸制備所用的黏合劑為煉制過(guò)的蜂蜜,有報(bào)道改用蜂蜜:糖:水(1∶1∶0.3)及適量酒石酸混合一起煉制,改進(jìn)后的黏合劑粘性強(qiáng),與藥粉混合后可塑性好,且節(jié)約蜂蜜用量,降低成本[6]。以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo),開展復(fù)方研究,大力進(jìn)行劑改。中醫(yī)方劑多為復(fù)方,而且每個(gè)方劑都有其特定的配伍法度。完善丸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),提高藥物質(zhì)量。丸劑的質(zhì)量關(guān)系到它的生存與發(fā)展,關(guān)系到人們的健康。目前不少中成藥缺乏可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),療效不夠穩(wěn)定。今后應(yīng)在現(xiàn)有基礎(chǔ)上采用一些新的分析方法對(duì)中藥丸劑進(jìn)行定性鑒別和含量測(cè)定,提出藥效成分的標(biāo)示量范圍和毒劇藥成分的限量,確保丸劑的有效性和安全性。
該方中以巴戟天、菟絲子、淫羊藿為君,滋腎補(bǔ)肝;再以熟地黃、玉竹、枸杞子、白芍養(yǎng)陰潤(rùn)肺、益胃生津;歸身和養(yǎng)血脈,黃芪、苡米、蒼術(shù)健脾益氣,輔助主藥共使肝腎肺脾胃、精氣血陰陽(yáng)俱能得養(yǎng),做到補(bǔ)而不燥,滋而不膩,共為臣藥。更佐川芎、丹皮、茺蔚子活血化瘀,柴胡疏肝解郁,調(diào)理氣血,黃芩清熱燥濕解毒,白蘚皮祛風(fēng)止癢,防風(fēng)散風(fēng),引藥到達(dá)病所,利皮毛而潤(rùn)膚除斑。
此次研究對(duì)去黃褐斑丸的性狀、鑒別、檢查進(jìn)行了研究和制訂,其中著重通過(guò)薄層色譜法和顯微鑒別法對(duì)去黃褐斑丸的君臣佐使等重要藥味進(jìn)行定性鑒別,確定方中各種中藥主要的有效成分,研究改變后對(duì)有效成分的穩(wěn)定性和差異性,從而初步確定以祛黃褐斑丸中主要有效成分來(lái)判斷本品的質(zhì)量是否合格,使制劑質(zhì)量具有可控性與穩(wěn)定性,保證臨床療效的穩(wěn)定與安全。
1? 儀器與試劑
1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋,江蘇金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠;ZF-20D暗箱式紫外分析儀,上海寶山顧村電光儀器廠;CS-800A型高速多功能粉碎機(jī);辰和盛豐工貿(mào)有限公司;KQ3200型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;BCD-257SL電冰箱,青島海爾股份有限公司;GB/T6003.1-1997標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩,浙江省上虞市滬江儀器紗篩廠;數(shù)顯鼓風(fēng)干燥器,上海?,攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)材料
祛黃褐斑丸(自制,批號(hào):140101、140402、140403);淫羊藿對(duì)照藥材(120831-201308)、黃芩對(duì)照藥材(121073-201011)、當(dāng)歸對(duì)照藥材(121023-201308)、白芍對(duì)照藥材(121165-201204)均購(gòu)自廣東天泰藥業(yè)有限公司;硅膠G(140909)由青島海洋化工有限公司提供;水合氯醛、甲醇、三氯化鐵、甲酸、三氯甲烷、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚、石油醚、濃氨試液、濃硫酸、甘油均為分析純。
2? 方法與結(jié)果
2.1 祛黃褐斑丸顯微鑒定方法
2.1.1 黃芪的顯微鑒定
取祛黃褐斑丸(批號(hào):140401)粉碎過(guò)100目篩,取少量粉末,加水合氯醛透化2次,稀甘油裝片,置顯微鏡下觀察:纖維成束或散離,壁厚,表面有縱裂紋,兩端斷裂成帚形或較平截(黃芪)(見(jiàn)圖1)。
2.1.2 巴戟天的顯微鑒定
取祛黃褐斑丸(批號(hào):140401)粉碎過(guò)100目篩,取少量粉末,加水合氯醛透化2次,稀甘油裝片,置顯微鏡下觀察:石細(xì)胞類圓形、類方形、類長(zhǎng)方形、長(zhǎng)條形或不規(guī)則形,有的一端尖,層紋、紋孔和孔溝明顯,有的石細(xì)胞形大,壁稍厚(巴戟天)(見(jiàn)圖2)。
2.1.3 當(dāng)歸的顯微鑒定
取祛黃褐斑丸(批號(hào):140401)粉碎過(guò)100目篩,取少量粉末,加水合氯醛透化2次,稀甘油裝片,置顯微鏡下觀察:薄壁細(xì)胞紡錘形,壁稍厚,有極微細(xì)的斜向交錯(cuò)紋理(當(dāng)歸)(見(jiàn)圖3、圖4)。
2.2 祛黃褐斑丸的薄層色譜鑒別方法
2.2.1 淫羊藿的薄層鑒別
(1)樣品制備。
取本品粉末5g,加乙醇20mL,超聲處理15min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?mL使溶解,作為供試品溶液。取淫羊藿對(duì)照藥材粉末1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。同供試品溶液制成陰性對(duì)照溶液。
(2)色譜條件。
①層析材料以0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板。
②點(diǎn)樣量供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2μL及對(duì)照藥材溶液各2μL。
③展開劑以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。
④展開方式向上展開。
⑤顯色置于水平桌面,365nm紫外光燈觀察至斑點(diǎn)顏色清晰。
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
按擬定的方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果:淫羊藿陰性對(duì)照色譜中,在與供試品色譜和淫羊藿對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),表明淫羊藿陰性樣品無(wú)干擾(見(jiàn)圖5)。
2.2.2 黃芩的薄層鑒別
(1)樣品制備。
供試品溶液的制備:取本品粉末5g,加乙醇100mL,超聲處理30min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?mL使溶解,作為供試品溶液。取黃芩對(duì)照藥材粉末1g,加乙醇20mL,超聲處理30min,濾過(guò),同法制成對(duì)照藥材溶液。同對(duì)照藥材法制成陰性對(duì)照溶液。
(2)色譜條件。
①層析材料:含4%乙酸鈉的羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板。
②點(diǎn)樣量:供試品溶液2μL、對(duì)照藥材溶液與陰性對(duì)照溶液各5μL。
③展開劑:以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑。
④展開方式:向上展開。
⑤顯色:分別置日光下檢視。
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
按擬定的方法進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果:黃芩對(duì)照藥材色譜在與供試品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性樣品無(wú)干擾,表明方法可行(見(jiàn)圖6)。
3? 結(jié)論
該實(shí)驗(yàn)證明祛黃褐斑丸中黃芪、巴戟天、當(dāng)歸具有顯微鑒別特征,可用于該品的顯微鑒定。對(duì)該品中淫羊藿、黃芩二味藥的薄層鑒別,其斑點(diǎn)清晰,展開效果好??勺鳛殪铧S褐斑丸質(zhì)量控制方法之一,為祛黃褐斑丸的質(zhì)量控制和開發(fā)提供參考依據(jù)。
4? 討論
該實(shí)驗(yàn)采用TLC法對(duì)祛黃褐斑丸中淫羊藿、黃芩、川芎等藥材進(jìn)行了鑒別。在鑒別過(guò)程會(huì)出現(xiàn)薄層色譜實(shí)驗(yàn)常出現(xiàn)的問(wèn)題,如:(1)邊緣效應(yīng);(2)斑點(diǎn)不清晰或斑點(diǎn)顏色顏色較淺;(3)拖尾現(xiàn)象;(4)與其他干擾斑點(diǎn)分離不開,斑點(diǎn)Rf值過(guò)大或過(guò)小等。所以解決的方法有:(1)點(diǎn)樣量適宜,原點(diǎn)直徑應(yīng)不大于3mm,若點(diǎn)條狀帶,則其“高度”應(yīng)控制在1mm左右,或在原有展開劑比例的基礎(chǔ)上加適量酸或堿。(2)噴顯色劑使斑點(diǎn)清晰或濃縮供試品溶液,使其濃度增加。如白芍的主要有效成分為芍藥苷,可選5%香草醛硫酸溶液作為其顯色劑。(3)適當(dāng)調(diào)整展開劑的極性,以將目標(biāo)斑點(diǎn)與干擾斑點(diǎn)分離得更完全和使斑點(diǎn)的 Rf值控制在0.2~0.8范圍內(nèi)。(4)展開劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,應(yīng)當(dāng)在配好后,強(qiáng)烈振搖,靜置,以使展開劑的各組分充分混勻。預(yù)飽和時(shí)間應(yīng)為20min以上,部分藥物需要長(zhǎng)時(shí)間預(yù)飽和,如淫羊藿,其預(yù)飽和時(shí)間應(yīng)為30min左右。展開缸的密閉性應(yīng)良好。此次實(shí)驗(yàn)也對(duì)川芎藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別,但由于有陰性干擾,故不列入此次研究?jī)?nèi)容。
該實(shí)驗(yàn)顯微鑒別特征明顯,可用于方中藥材的鑒定。TLC中各種成分的陰性對(duì)照均無(wú)干擾,方法專屬性強(qiáng),簡(jiǎn)單操作,準(zhǔn)確度高,建議可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制的內(nèi)容之一。
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