市售不同產(chǎn)地丁公藤藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)

羅裕 李國豪

[摘要]目的 評(píng)價(jià)市售不同產(chǎn)地6批丁公藤藥材的品質(zhì)。方法 按照2015年版《中國藥典》四部通則測定市售不同產(chǎn)地6批丁公藤藥材的水分（≤12.0%）、總灰分（≤10.0%）、二氧化硫（≤150 mg）及浸出物（≥3.0%）含量。以東莨菪內(nèi)酯作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，色譜柱為UItimate XB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16），檢測波長為298 nm。結(jié)果 市售不同產(chǎn)地6批丁公藤的藥材水分含量范圍為9.3%～12.3%;總灰分含量范圍為7.5%～10.1%;二氧化硫含量為65～83 mg/kg;醇溶性浸出物含量范圍為4.6%～7.2%;東莨菪內(nèi)酯含量范圍為0.063%～0.092%，各項(xiàng)測定結(jié)果均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定。結(jié)論 對(duì)不同產(chǎn)地的丁公藤藥材進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)，可為建立更完善的丁公藤品質(zhì)評(píng)價(jià)體系提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]丁公藤;東莨菪內(nèi)酯;高效液相色譜法;品質(zhì)評(píng)價(jià)

[中圖分類號(hào)] R284.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）8（b）-0012-04

[Abstract] Objective To evaluate the quality of 6 batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas. Methods The contents of water （≤12.0%）， total ash （≤10.0%）， sulfur dioxide （≤150 mg） and extracts （≥3.0%） were determined according to the four general rules of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. The content of scopoletin as the evaluation index was determined by high performance liquid chromatography with UItimate XB-C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） as the chromatographic column， the mobile phase was methanol-water-glacial acetic acid （32∶68∶0.16）， the detection wavelength was 298 nm. Results The water content of six batches of Erycibe Obtusifolia from different producing areas ranged from 9.3% to 12.3%， the total ash content ranged from 7.5% to 10.1%， the sulfur dioxide content ranged from 65-83 mg/kg， the alcohol-soluble extract content ranged from 4.6% to 7.2%， and the scopoletin content ranged from 0.063% to 0.092%， the results of each determination were in accordance with the provisions of the Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Conclusion To evaluate the quality of Erycibe Obtusifolia from different producing areas can provide a basis for establishing a more perfect quality evaluation system of Erycibe Obtusifolia.

[Key words] Erycibe Obtusifolia; Scopololamine; High performance liquid chromatography; Quality evaluation

丁公藤為旋花科植物丁公藤（Erycibe Obtusifolia Benth）或光葉丁公藤（Erycibe Schmidtii Craib）的藤莖[1]。別名包公藤、麻辣子、丹月藤、南藤等，始載于《本草拾遺》，生于林中，攀援于樹上。分布廣東、廣西、云南、海南、浙江、江蘇等地。本品性溫，味辛，有毒。歸心、肝二經(jīng)。化學(xué)研究表明，丁公藤含有包公藤甲素（Baogongteng A）、包公藤乙素、東莨菪素、6-甲氧基-7-羥基香豆素等成份[2]。具有解毒發(fā)汗、消腫止痛等功效，治療風(fēng)濕痹痛、半身不遂、跌打腫痛等病癥[3-4]。丁公藤是兩廣（廣東、廣西）等地區(qū)用于治療風(fēng)濕病的常用藥，也是風(fēng)濕藥酒的主要原料之一。目前，市面上已有丁公藤藥酒、丁公藤滴丸、復(fù)方丁公藤膠囊等多種中成藥。據(jù)吳立宏等[5-6]對(duì)丁公藤基源的研究發(fā)現(xiàn)，市面上的丁公藤有較多混淆品，如青江藤、紅葉藤、風(fēng)藤、羊角藤、小花青藤等。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市售丁公藤藥材存在蟲蛀等質(zhì)量不穩(wěn)定的問題，這些因素將會(huì)影響丁公藤的臨床療效和用藥安全。為此，本研究參照2015年版《中華人民共和國藥典》[5]（以下簡稱“《中國藥典》”）項(xiàng)下的規(guī)定，分別對(duì)來自不同產(chǎn)地6批丁公藤藥材中的水分、總灰分、二氧化硫、浸出物及東莨菪內(nèi)酯的含量進(jìn)行測定，旨在為建立丁公藤藥材的質(zhì)量控制和品質(zhì)評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器及試劑

LC-20AT/JY-001高效液相色譜儀[島津企業(yè)管理（中國）有限公司];DHG-9240A/JY-017電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;KQ5200VD型/JY-007數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;FA2004/JY-003電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;AUW120D/YJ-004島津分析天平[島津企業(yè)管理（中國）有限公司];FW315/JY-022中草藥粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司）;SX-8-10/JY-018箱式電阻爐（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）;東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，純度>99%，批號(hào)：110768-200504），甲醇（上海星可高醇溶劑有限公司）為色譜純，磷酸（美國賽默飛科技有限公司）為色譜純;水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.2試藥

于2018年5月從廣東、廣西、云南、海南、浙江、江蘇等地購回丁公藤藥材，共6批，經(jīng)廣東省新興中藥學(xué)校彭瑞松副主任中藥師鑒定為旋花科植物丁公藤或光葉丁公藤的藤莖[1]。

2方法與結(jié)果

2.1不同產(chǎn)地丁公藤藥材含水量測定結(jié)果

參照2015年版《中國藥典》四部通則0832項(xiàng)下的烘干法[7]，對(duì)6批丁公藤藥材進(jìn)行水分測定，每批測定5次，藥材含水量范圍是9.3%～12.3%（表1），計(jì)算得6批丁公藤藥材的平均含水量為11.12%。

2.2不同產(chǎn)地丁公藤藥材總灰分測定結(jié)果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2302項(xiàng)下的灰分測定法，對(duì)6批丁公藤藥材進(jìn)行總灰分測定，每批測定5次，總灰分含量范圍是7.5%～10.1%（表2），計(jì)算得平均含量是8.82%。

2.3不同產(chǎn)地丁公藤藥材醇溶性浸出物測定結(jié)果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2201項(xiàng)下的熱浸法，用70%乙醇作為溶劑，對(duì)6批丁公藤藥材進(jìn)行浸出物含量測定，每批測定5次，醇溶性浸出物含量范圍是4.6%～7.2%（表3），計(jì)算得平均含量是5.96%。

2.4不同產(chǎn)地丁公藤藥材二氧化硫測定結(jié)果

參照2015年版《中國藥典》四部通則2331項(xiàng)下的酸堿滴定法，對(duì)6批丁公藤藥材進(jìn)行二氧化硫的檢測，二氧化硫含量范圍為65～83 mg/kg（表4），平均含量是74.2 mg/kg。

2.5含量測定

2.5.1色譜條件

UItimate XB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水-冰醋酸（32∶68∶0.16）為流動(dòng)相;流速為1.0 ml/min;柱溫為25℃;檢測波長為298 nm，進(jìn)樣量10 μl。理論塔板數(shù)按東莨菪內(nèi)酯計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.5.2溶液的制備

2.5.2.1供試品溶液的制備? 精密稱取廣東產(chǎn)丁公藤藥材粉末（過四號(hào)篩）1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，稱定重量，加熱回流6 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 ml，置燒瓶中，濃縮至約1 ml，加入10 ml、3 mol/L的鹽酸溶液中，水浴中加熱水解2 h，立即冷卻，移入分液漏斗中，用10 ml水分次洗滌容器，并入分液漏斗中，加氯化鈉2 g，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取5次，每次取15 ml，合并三氯甲烷液，加無水硫酸鈉2 g，攪拌，濾過，用少量三氯甲烷洗滌容器，濾過，濾液合并，于70℃以下濃縮至近干，立即加甲醇使其溶解，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。色譜見圖1A。

2.5.2.2對(duì)照品溶液的制備? 精密稱取東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品0.00810 g，置于20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為母液，精密量取母液1 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含40 μg的溶液，即得。色譜見圖1B。

A.丁公藤供試品溶液;B.東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品溶液

2.5.3線性關(guān)系考察

取“2.5.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液母液，精密量取母液0.1、0.5、1、2、3 ml分別置與10 ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.5.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10 μl測定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以東莨菪內(nèi)酯濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，Y=17 048X+655.11，r=1，表明東莨菪內(nèi)酯進(jìn)樣量在0.0405～1.2150 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.4精密度試驗(yàn)

取“2.5.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液母液1 ml，加入10 ml容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，按“2.5.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得東莨菪內(nèi)酯峰面積的RSD為0.23%（n=6）結(jié)果表明，測定方法的精密度良好。

2.5.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取廣東產(chǎn)丁公藤藥材粉末6份，按“2.5.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下的色譜條件測定東莨菪內(nèi)酯含量，結(jié)果RSD為0.46%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.5.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取“2.5.2.1”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下的色譜條件分別于0、1、6、12、24、48 h測定，測得東莨菪內(nèi)酯的峰面積RSD為0.68%，表明供試品溶液48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取廣東產(chǎn)丁公藤藥材粉末，分別稱取0.25、0.5、1.0 g，精密稱定，分別精密加入東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品約0.000 25、0.000 45、0.000 90 g，按“2.5.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算得平均回收率為100.00%，RSD=2.18%，結(jié)果見表5。

2.5.8不同產(chǎn)地丁公藤藥材東莨菪內(nèi)酯含量測定結(jié)果

取6批不同產(chǎn)地丁公藤藥材粉末各約1 g，精密稱定，按“2.5.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，由結(jié)果可知，東莨菪內(nèi)酯的含量：廣東>海南>廣西>云南>江蘇>浙江，其中廣東產(chǎn)丁公藤含量最高，浙江產(chǎn)丁公藤最低，結(jié)果見表6。

3討論

中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)的目的一方面是為了鑒別藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，為中醫(yī)臨床服務(wù)，確保臨床用藥安全;另一方面是實(shí)現(xiàn)藥材的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)，保證藥農(nóng)藥商的利益。影響中藥材品質(zhì)的因素有水分、灰分、浸出物、有效成分含量等。目前，對(duì)丁公藤藥村的評(píng)價(jià)包括以下幾方面：①品種鑒定方面，如張玉潔等[3]對(duì)丁公藤及其混淆品的鑒別;吳立宏等[5]對(duì)廣西產(chǎn)丁公藤原植物的調(diào)查及商品丁公藤主流品種的鑒定等。②化學(xué)成分研究方面，如周岳等[2]對(duì)光葉丁公藤的酚性成分進(jìn)行的研究等。③含量測定方面，劉翠婷等[8-10]對(duì)丁公藤屬植物中東莨菪苷、綠原酸、東莨菪素、異綠原酸A、異綠原酸B和異綠原酸C的含量進(jìn)行測定。④也有學(xué)者對(duì)丁公藤等5種中藥材規(guī)范化種植關(guān)鍵技術(shù)研究等[10]。相關(guān)報(bào)道提示，目前尚缺乏對(duì)丁公藤藥材進(jìn)行較全面的品質(zhì)評(píng)價(jià)的研究[10]。

開展丁公藤藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)包括水分、灰分、浸出物、有效成分含量等方面，本研究結(jié)果提示，不同產(chǎn)地的丁公藤藥材水分范圍為9.3%～12.3%。一般根莖類中藥材含水量≤13%，超出水分范圍將會(huì)影響藥材的質(zhì)量，可能會(huì)出現(xiàn)蟲害、霉變等變質(zhì)現(xiàn)象。本研究結(jié)果符合2015版《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定。測定中藥材總灰分可反映中藥材的純度，如總灰分超出《中國藥典》規(guī)定的最高限量，說明其含有其他無機(jī)物污染或摻雜，將會(huì)影響藥材的質(zhì)量。6個(gè)產(chǎn)地的丁公藤藥材的總灰分范圍在7.5%～10.1%，說明其灰分測定結(jié)果符合要求。浸出物測定是反應(yīng)藥材的內(nèi)在質(zhì)量，是確保其療效確切、質(zhì)量可靠的有效手段，本次測定的不同產(chǎn)地的丁公藤藥材浸出物范圍在4.6%～7.2%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于2015年版《中國藥典》的要求。采用二氧化硫熏硫藥材，利于藥材的儲(chǔ)存，但也會(huì)產(chǎn)生二氧化硫殘留，對(duì)人體產(chǎn)生危害，影響藥材質(zhì)量。目前已經(jīng)被國家藥監(jiān)局明令禁止使用。經(jīng)測定，丁公藤藥材的二氧化硫含量為65～83 mg/kg，屬于安全范圍。

參照2015版《中國藥典》丁公藤項(xiàng)下含量測定的要求，對(duì)云南、海南、廣東、廣西、浙江、江蘇等不同產(chǎn)地的丁公藤藥材中東莨菪內(nèi)酯的含量進(jìn)行測定[11-13]，含量范圍為0.063%～0.092%，造成不同產(chǎn)地丁公藤藥材中東莨菪內(nèi)酯含量差異的主要原因可能在于藥材在生長過程中受產(chǎn)地氣候、環(huán)境、栽培方法等因素的影響[14-16]。

本研究中的丁公藤藥材中的東莨菪內(nèi)酯含量均符合藥典要求。其中，廣東、廣西、云南、海南產(chǎn)地藥材東莨菪內(nèi)酯含量較高，江蘇和浙江藥材含量較低。

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（收稿日期：2019-01-21? 本文編輯：孟慶卿）