辛酰羥肟酸含量測(cè)定方法

周嘉欣 陳玉娥 黃亮 張利萍

（廣州立白企業(yè)集團(tuán)有限公司，廣東廣州， 510170）

辛酰羥肟酸是一種收錄于《已使用化妝品原料名稱目錄》(2015年版)[1]，具有防腐性能的原料。但因?yàn)樗辉凇痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)[2]防腐劑范圍內(nèi)，所以,它在配方中的用量并無(wú)嚴(yán)格限制。專利號(hào)CN102920612A[3]報(bào)道，當(dāng)它與苯氧乙醇等傳統(tǒng)防腐劑復(fù)配時(shí)，可達(dá)廣譜抗菌效果。

近十幾年，隨著對(duì)羥基苯甲酸酯類物質(zhì)的雌性激素潛在影響研究越來(lái)越深入，歐美等國(guó)對(duì)該類物質(zhì)在個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中的應(yīng)用有了嚴(yán)格的含量限制[4-6]。辛酰羥肟酸除了具有一定的抗菌性能外，也具有一定的保濕、潤(rùn)膚功能，所以,它很快地替代了對(duì)羥基苯甲酸酯類物質(zhì)，作為防腐劑及保濕劑用于膏霜、化妝水、面膜等個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中。但是近期，有文獻(xiàn)[7]報(bào)道稱，辛酰羥肟酸會(huì)導(dǎo)致受損性皮膚或敏感性肌膚發(fā)生接觸性皮炎，它在個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中的用量及濃度需要慎重選擇。

對(duì)辛酰羥肟酸進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析是辛酰羥肟酸應(yīng)用的基礎(chǔ)。鄭曉等[8]用紫外分光光度法測(cè)定水中的辛酰羥肟酸含量。該方法雖然原理簡(jiǎn)單、儀器易得，但精密度較差、樣品pH值也需要嚴(yán)格控制?；诖?，筆者建立了采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定辛酰羥肟酸含量的方法，為后續(xù)個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中使用辛酰羥肟酸提供了一定的技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀，配有G1315D二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司；ZORBAX SBC18色譜柱(4.6mm×250mm, 5μm)，美國(guó)Agilent公司；Sartorious電子天平，北京賽多利斯天平有限公司；Milli-Q去離子水發(fā)生器，美國(guó)Milli-Q公司；0.45μm微孔濾膜，天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。乙腈、甲醇、無(wú)水乙醇，色譜純，德國(guó)默克公司；辛酰羥肟酸(辛基異羥肟酸)，標(biāo)準(zhǔn)品，阿拉丁(試劑)上海有限公司；辛酰羥肟酸原料，市售。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取標(biāo)準(zhǔn)品辛酰羥肟酸0.05g(精確至0.0001g)于25mL容量瓶，先加入1mL無(wú)水乙醇將標(biāo)準(zhǔn)品溶解，再加入去離子水定容至刻度，充分混勻，即得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，備用。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液3、4、6、8、10mL于10mL容量瓶中，用去離子水定容至刻度，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

1.2.2 樣品溶液的配制

準(zhǔn)確稱取辛酰羥肟酸原料0.02g(精確至0.0001g)于25mL容量瓶，先加入1mL無(wú)水乙醇將樣品溶解，再加入去離子水定容至刻度，搖勻、超聲后用0.45μm的濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。

1.3色譜條件

ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6×250mm, 5μm)；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5μL；流動(dòng)相：乙腈-水=55:45(體積比)；檢測(cè)波長(zhǎng)：218nm，參比波長(zhǎng)：360nm。

2 結(jié)果與討論

2.1色譜分離條件的優(yōu)化

研究比較了2種相同規(guī)格(4.6mm×250mm, 5μm)的C18色譜柱(ZORBAX SB-C18、Agilent TC-C18)的分離效果及色譜峰形，結(jié)果表明，在上述色譜條件下，2種色譜柱都能達(dá)到較好的分離效果和良好的色譜峰形。考慮到方法的普及性，首先選用了高效液相色譜中最常用的C18柱(ZORBAX SB-C18)。

辛酰羥肟酸的結(jié)構(gòu)中含有羥基酰胺基團(tuán)，具有一定的極性。筆者考察了甲醇-水(75:25)(體積比)、乙腈-水(60:40)(體積比)、乙腈-水(55:45)(體積比)為流動(dòng)相。根據(jù)峰形和響應(yīng)等，最終選用乙腈-水(55:45)(體積比)為流動(dòng)相進(jìn)行分析，得到了較好的峰型。辛酰羥肟酸色譜圖見(jiàn)圖1-圖3。

2.2線性考察

取1.2.1所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3所確定的實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)辛酰羥肟酸進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程及相關(guān)系數(shù)。辛酰羥肟酸的回歸方程為y=1.3334x- 18.536，相關(guān)系數(shù)R2=0.9992。從上述結(jié)果可看出：辛酰羥肟酸在112.0～1574.0mg/L的范圍內(nèi)具有良好的線性。具體標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4。

2.3回收率與精密度

圖1 辛酰羥肟酸液相色譜圖(甲醇-水(75:25))

圖2 辛酰羥肟酸液相色譜圖(乙腈-水(60:40))

向辛酰羥肟酸原料樣品中添加3個(gè)濃度水平(約10mg、20mg、30mg)的辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每一水平設(shè)6個(gè)平行，按1.2.2樣品前處理方法制備待測(cè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1所示。由表1可知：方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＜5%；方法的加標(biāo)回收率為96.73%～101.39%，表明方法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度。

2.4實(shí)際樣品的測(cè)定

用所建立的方法測(cè)定3個(gè)不同廠家的辛酰羥肟酸原料樣品，每個(gè)樣品溶液平行測(cè)定6次，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，不同廠家的辛酰羥肟酸原料樣品測(cè)試RSD均在2%以內(nèi)，表明該方法重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

圖3 辛酰羥肟酸液相色譜圖(乙腈-水(55:45))

圖4 辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 辛酰羥肟酸原料的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

表2 不同廠家的辛酰羥肟酸原料中辛酰羥肟酸的含量測(cè)定

通過(guò)高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法測(cè)定辛酰羥肟酸原料中辛酰羥肟酸的含量和考察不同色譜柱、不同流動(dòng)相對(duì)色譜出峰情況的影響，可以得出：當(dāng)使用乙腈-水=55:45(體積比)為流動(dòng)相、色譜柱為ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm, 5μm)時(shí)，樣品出峰峰形對(duì)稱，重復(fù)性良好。該液相色譜測(cè)定法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、靈敏、重復(fù)性好、精密度高，可為相關(guān)產(chǎn)品的日常檢測(cè)提供參考。