皺紋盤鮑腹足及內(nèi)臟抗氧化活性研究

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(1.威海長(zhǎng)青海洋科技股份有限公司,山東威海 264300;2.榮成市海洋與漁業(yè)局,山東威海 264300)

抗氧化肽是一類具有抗氧化活性的多肽的總稱。由于天然抗氧化肽比人工合成的抗氧化劑更加安全,近年來,關(guān)于從海洋動(dòng)物蛋白質(zhì)資源中提取抗氧化肽的研究屢屢見諸報(bào)端。據(jù)報(bào)道,海洋生物抗氧化肽具有多種多樣的生物學(xué)功能,如抗癌、抗腫瘤、抗高血壓、抗血栓、降膽固醇、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等作用[1]。

皺紋盤鮑是中國傳統(tǒng)的名貴食材,含有豐富的蛋白質(zhì),還含有較多的鈣、鐵、碘和維生素等營(yíng)養(yǎng)元素[2]。其中,皺紋盤鮑內(nèi)臟的體重是鮑魚的20%～30%[3],所含營(yíng)養(yǎng)物為水、蛋白質(zhì)、維生素等。鮑魚自身有很高的食用與藥用價(jià)值,可以給鮑魚產(chǎn)業(yè)帶來很高的經(jīng)濟(jì)效益,關(guān)于鮑魚加工的研究越來越多,而同樣具有藥用價(jià)值的鮑魚內(nèi)臟卻一直被當(dāng)做下腳料處理,這成為鮑魚加工行業(yè)的普遍趨勢(shì)。我國對(duì)海洋資源提取抗氧化多肽的研究很多,曾慶祝等[4]研究從扇貝邊酶解物中抗氧化肽的性質(zhì),發(fā)現(xiàn)扇貝邊酶解物具有一定的體內(nèi)抗氧化活性;楊濤等[5]從海參內(nèi)臟中制備海參多肽,發(fā)現(xiàn)海參內(nèi)臟多肽具有較好的清除自由基的能力;李哲等[6]研究從貽貝中分離純化抗菌肽,驗(yàn)證了貽貝抗菌肽具有較強(qiáng)的抗菌性。但是還未見同時(shí)對(duì)比鮑魚腹足、內(nèi)臟抗氧化多肽抗氧化性的研究。

隨著酶技術(shù)的發(fā)展,酶法水解在水產(chǎn)品加工及水產(chǎn)品下腳料綜合利用中的應(yīng)用越來越廣泛[7]。對(duì)于多肽的抗氧化活性的測(cè)定方法可以分為兩類:體內(nèi)測(cè)定和體外測(cè)定。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)法雖然更貼近于生物體系,但是實(shí)驗(yàn)成本大且復(fù)雜繁瑣,實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng);體外抗氧化活性的測(cè)定方法是建立模擬體內(nèi)的抗氧化反應(yīng)體系的評(píng)價(jià)方法,其中評(píng)價(jià)方法有還原能力、清除羥基自由基的能力、清除DPPH自由基的能力、清除超氧陰離子的能力、半抑制濃度IC50等[8-9]。因此本文選擇測(cè)定皺紋盤鮑腹足及內(nèi)臟抗氧化肽酶解液的體外抗氧化活性來評(píng)價(jià)分析皺紋盤鮑腹足、內(nèi)臟抗氧化肽的抗氧化活性,為皺紋盤鮑不同部位蛋白質(zhì)資源的精深加工提供理論支撐,進(jìn)一步促進(jìn)皺紋盤鮑養(yǎng)殖業(yè)的增效增收。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

皺紋盤鮑 威海長(zhǎng)青海洋科技股份有限公司;中性蛋白酶(酶活力21×104U/g) 天津諾維信生物技術(shù)有限公司;供試菌株:大腸桿菌(Escherichiacoil,菌株編號(hào):BLZX-168) 國家海產(chǎn)貝類工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)室;0.1 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 天津標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司;DPPH標(biāo)準(zhǔn)品 華夏科技有限公司;砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、鉻標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、鎘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 國家鋼鐵材料測(cè)試中心;石油醚、鐵氰化鉀、三氯乙酸(TCA)、氯化鐵、水楊酸、無水乙醇、維生素C、鹽酸、氫氧化鉀、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、苯酚、硝酸、鹽酸羥胺、過硫酸鉀、硼氫化鉀、甲基異丁酮、氨水、酒石酸銨、吡咯烷二硫代甲酸銨、二乙氨基二硫代甲酸鈉、乙酸、高錳酸鉀、二苯氨基脲、硫脲 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

DK-S24型電熱恒溫水浴鍋 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;CP114型電子天平 上海奧豪斯儀器有限公司;AL104型分析天平 上海梅特勒;UV2800SPC型紫外可見分光光度計(jì) 蘇州江東精密儀器有限公司;DHG-9203A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;PHSJ-3F型pH計(jì) 上海雷磁創(chuàng)益儀器儀表有限公司;L535-1型臺(tái)式低速離心機(jī) 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司;SXT-02索氏提取器 上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司;GZS-1.0型冷凍干燥機(jī) 沈陽北冰洋食品工程有限公司;PF51型原子熒光分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;TAS-990 AFG型原子吸收分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 皺紋盤鮑腹足、內(nèi)臟酶解液的制備 皺紋盤鮑腹足及內(nèi)臟蛋白質(zhì)的水解酶為中性蛋白酶。從冰箱中取出皺紋盤鮑腹足、內(nèi)臟打漿處理后的原料并解凍混勻,分別稱取5 g原料加蒸餾水配制成500 mL溶液,并按酶制劑產(chǎn)品標(biāo)注的最適條件進(jìn)行酶解,充分酶解后在100 ℃條件下加熱滅酶,直至冷卻至室溫后,于離心機(jī)中4000 r/min離心10 min,取酶解上清液備用,即腹足多肽酶解液(Peptides Hydrolysate of Gastropods,PHG)、內(nèi)臟多肽酶解液(Peptides Hydrolysate of Viscera,PHV),下文均用PHG、PHV來表示皺紋盤鮑腹足、內(nèi)臟多肽酶解液。

1.2.2 PHG、PHV重金屬測(cè)定方法

1.2.2.1 食品中總砷及無機(jī)砷的測(cè)定 GB 5009.11-2014。

1.2.2.2 食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定 GB 5009.17-2017。

1.2.2.3 食品中鉻的測(cè)定 GB 5009.123-2014。

1.2.2.4 食品中鉛的測(cè)定 GB 5009.12-2017。

1.2.2.5 食品中鎘的測(cè)定 GB 5009.15-2014。

1.2.3 PHG、PHV成分分析方法 酶解液的固化處理:對(duì)PHG、PHV進(jìn)行冷凍干燥處理并細(xì)化至粉末狀固體。對(duì)PHG、PHV進(jìn)行成分分析的測(cè)定時(shí),均采用PHG、PHV固體粉末。

1.2.3.1 多肽含量的測(cè)定 參考楊濤等[5]的測(cè)定方法。

1.2.3.2 粗脂肪含量的測(cè)定 索氏抽提法(GB/T 5009.6-2003)。

1.2.3.3 多糖含量的測(cè)定 苯酚硫酸法(GB/T 9695.31-2008)。

1.2.3.4 水分含量的測(cè)定 直接干燥法(GB/T9695.15-2008)。

1.2.3.5 灰分含量的測(cè)定 灼燒法(GB/T 9695.18-2008)。

1.2.4 PHG、PHV體外抗氧化活性測(cè)定方法

1.2.4.1 還原力的測(cè)定 分別取PHG、PHV各1.0 mL于洗凈的試管中,向其中加入1.0 mL pH為6.6的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液和1.0 mL 1%鐵氰化鉀K3Fe(CN)6溶液,搖勻后置于50 ℃的水浴鍋中加熱2 min。結(jié)束之后,立即放于冷水或冰浴中制冷,加入1.0 mL 10%三氯乙酸(TCA)溶液,搖勻充分反應(yīng)之后,3000 r/min離心5 min。取上清液2.0 mL,依次加入2.0 mL的蒸餾水與0.8 mL 0.1%的氯化鐵(FeCl3)溶液,混合均勻,靜置10 min之后,于700 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光值,所測(cè)得的吸光度值的大小表征產(chǎn)物的還原能力。維生素C代替樣品作為陽性對(duì)照,所有反應(yīng)條件同上。并用蒸餾水作為空白調(diào)零[10]。

1.2.4.2 二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除率的測(cè)定 稱取一定量DPPH·,用三氯甲烷配制成2 mol/L溶液,用無水乙醇稀釋成0.1 mmol/L DPPH·溶液備用。分別取0.4 mL不同濃度的PHG、PHV,向其中加入0.4 mL DPPH·溶液,充分混勻,作為樣品組;取0.4 mL不同濃度的PHG、PHV,向其中加入0.4 mL無水乙醇,充分混勻,作為對(duì)照組;取0.4 mL蒸餾水,向其中加入0.4 mL DPPH·,混合均勻,作為空白組,室溫下避光放置30 min后,8000 r/min離心10 min。取上清液于517 nm測(cè)定吸光值。以維生素C作為陽性對(duì)照[11]。按以下公式計(jì)算DPPH·清除率。

式中:A為樣品組的吸光度值;A1為對(duì)照組的吸光度值;A0為空白組的吸光度值。

1.2.4.3 羥基自由基清除率的測(cè)定 樣品組的反應(yīng)體系為9 mmol/L FeSO40.2 mL、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液0.2 mL,不同濃度的PHG、PHV 0.2 mL以及0.1 mol/L PBS(pH6.6)1.2 mL。以等量的0.1 mol/L PBS(pH6.6)代替除PHG、PHV外的反應(yīng)體系作為對(duì)照組;以等量0.1 mol/L PBS(pH6.6)作為空白組;最后加入8.8 mmol/L H2O20.2 mL啟動(dòng)反應(yīng),置于37 ℃水浴加熱30 min,8000 r/min離心10 min。取其上清液于510 nm波長(zhǎng)下比色。以維生素C為陽性對(duì)照[12]。按以下公式計(jì)算羥基自由基清除率。

羥基自由基清除率(%)=(A樣品-A空白)/(A對(duì)照-A空白)×100

式中:A樣品為樣品組的吸光度值;A對(duì)照為對(duì)照組的吸光度值;A空白為空白組的吸光度值。

1.2.4.4 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定 采用鄰苯三酚自氧化法[13]。1.0 mL PHG、PHV與9.0 mL 50.0 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH8.2)混合,取出3 mL的混合溶液,向其中加入0.1 mL鄰苯三酚溶液(60 mmol/L),在室溫下迅速振蕩反應(yīng)4 min,測(cè)定320 nm下該混合溶液的吸光度值A(chǔ)1,空白對(duì)照為相同條件下1.0 mL去離子水替代PHG、PHV測(cè)得的吸光度值A(chǔ)0。按以下公式計(jì)算超氧陰離子自由基清除率。

超氧陰離子自由基清除率(%)=(1-A1/A0)×100

式中:A1為PHG、PHV的吸光度值;A0為空白對(duì)照的吸光度值。

1.2.4.5 脂質(zhì)氧化抑制率的測(cè)定 脂質(zhì)氧化抑制率測(cè)定采用硫氰酸銨比色法[14],將PHG、PHV溶于2.5 mL磷酸鹽緩沖液(0.05 mol/L,pH7.0)中,倒入到10 mL具塞比色管中,然后加入50 mmol/L 2.5 mL亞油酸(溶于95%乙醇)溶液,混勻之后加入1.25 mL蒸餾水,將上述反應(yīng)液放置于45 ℃培養(yǎng)箱中,反應(yīng)48 h后測(cè)定亞油酸的氧化程度,取0.1 mL反應(yīng)液,加0.1 mL 30%的硫氰酸銨溶液,然后加入4.7 mL 75%的乙醇溶液,最后將其加入0.1 mL 0.02 mol/L氯化亞鐵(內(nèi)含3.5%的鹽酸)溶液中,充分振蕩,反應(yīng)3 min后,在波長(zhǎng)500 nm處測(cè)定吸光度值。按以下公式計(jì)算脂質(zhì)氧化抑制率。

式中:A48未和A0未分別代表未加PHG、PHV的空白組在0、48 h的吸光度值;A48和A0分別為加入PHG、PHV后在0、48 h測(cè)得的吸光度值。

1.2.4.6 Fe2+螯合率的測(cè)定 向反應(yīng)體系中分別加入2 mL FeSO4溶液(20 mmol/L),2 mL菲咯臻溶液(0.5 mmol/mL)和1 mL 2%的抑制物,空白對(duì)照組中加入同體積的蒸餾水來替代抑制物[15]。按以下公式計(jì)算Fe2+的螯合率。

式中:A0為空白對(duì)照組的吸光度值;An為加入PHG、PHV溶液后的吸光度值。

1.2.5 PHG、PHV對(duì)細(xì)菌的抑制作用 采用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定抑菌圈的大小[16]。將冷凍保存于-80 ℃下的供試菌株:大腸桿菌在LB固體培養(yǎng)基上劃線,置于30 ℃下培養(yǎng)24 h。從活化后的平板上挑取單菌落,接種于25 mL的LB液體培養(yǎng)基中,于30 ℃、200 r/min下?lián)u菌24 h。以含1%瓊脂的LB培養(yǎng)基為下層培養(yǎng)基,向含0.7%瓊脂的LB培養(yǎng)基中接種供試菌株(100 mL培養(yǎng)基中加入1 mL菌株密度為106CFU/mL的供試菌液),搖勻后制成上層培養(yǎng)基,用打孔器在平板上打孔,孔的直徑為0.8 cm,每個(gè)平板上打三個(gè)孔,1個(gè)接種10 μL的PHG、PHV(濃度均為6 mg/mL)為實(shí)驗(yàn)組,1個(gè)接種10 μL無菌水為陰性對(duì)照和1個(gè)接種10 μL(1 mg/mL鏈霉素和1 mg/mL卡那霉素的混合液)為陽性對(duì)照,在37 ℃恒溫下培養(yǎng)24 h,觀察測(cè)量抑菌圈的大小。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 PHG、PHV的重金屬含量分析

PHG、PHV的As、Hg、Cr、Pb、Cd含量的檢測(cè)結(jié)果如表1所示,PHG、PHV的5項(xiàng)重金屬指標(biāo)均符合《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》GB 2762-2017的限量要求,且PHG的各項(xiàng)重金屬含量均低于PHV,說明皺紋盤鮑腹足及內(nèi)臟酶解液均適合作為食品級(jí)抗氧化肽的原料。

表2 PHG、PHV的主要成分含量測(cè)定Table 2 Content detection of main components of PHG,PHV

表1 PHG、PHV的重金屬含量檢測(cè)結(jié)果(mg/kg)Table 1 Results of determination ofheavy metals in PHG,PHV(mg/kg)

2.2 PHG、PHV的主要成分測(cè)定

PHG、PHV的主要成分含量測(cè)定結(jié)果如表2所示,均以干基計(jì)。PHG、PHV的多肽含量分別為81.17%、78.21%,其在四種成分中含量最高,說明PHG、PHV可作為制備抗氧化肽食品的多肽原料。

2.3 PHG、PHV體外抗氧化活性分析

2.3.1 還原力 還原力的強(qiáng)弱是根據(jù)多肽樣品在700 nm處的吸光度的大小來進(jìn)行判斷的,在700 nm處的吸光值越大,多肽的還原力就越強(qiáng),且多肽的抗氧化能力也越強(qiáng)。因此,多肽的還原力是指示多肽抗氧化活性的一個(gè)重要指標(biāo)。由圖1可知,在0～12 mg/mL范圍內(nèi),隨著多肽濃度的增大,PHG、PHV的還原力越來越強(qiáng),VC的還原力也越來越強(qiáng)直至穩(wěn)定,這說明PHG、PHV和VC的還原力和其濃度是有一定量效關(guān)系的。盡管PHG、PHV的還原力隨著多肽濃度的增加變強(qiáng),其還原力沒有VC強(qiáng),但也具有一定的抗氧化作用,且在整個(gè)反應(yīng)時(shí)期,PHG的還原力始終略高于PHV,當(dāng)濃度為12 mg/mL時(shí),二者的還原力最高,PHG的還原力達(dá)到0.993,PHV的還原力為0.759。根據(jù)線性回歸方程得出,PHG還原力的AC50值為7.74 mg/mL,PHV還原力的AC50值為7.25 mg/mL,VC還原力的AC50值為0.052 mg/mL。Zhou[17]等在對(duì)鮑足肌的研究時(shí)發(fā)現(xiàn)抗氧化肽的還原力AC50值為15 mg/mL,對(duì)比文獻(xiàn)研究,本實(shí)驗(yàn)中的PHG、PHV具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

圖1 不同濃度PHG、PHV的還原力Fig.1 Reduction force of PHG,PHV with different concentrations

2.3.2 DPPH·清除率 如圖2所示,PHG、PHV的DPPH·清除率隨濃度的增大而逐漸升高,但始終低于VC的DPPH·清除率。在0～8 mg/mL的濃度范圍內(nèi),PHG、PHV的DPPH·清除率的升高速度越來越快,當(dāng)濃度為8 mg/mL時(shí),PHG的DPPH·清除率為94.35%,PHV的DPPH·清除率為69.94%;在8～12 mg/mL濃度范圍內(nèi),二者對(duì)DPPH·清除率的升高速度變緩,當(dāng)濃度為12 mg/mL時(shí),PHG的DPPH·清除率為96.67%,PHV的DPPH·清除率為84.17%。PHG對(duì)于DPPH·的清除活性IC50值為3.11 mg/mL,PHV對(duì)于DPPH·的清除活性IC50為5.79 mg/mL,VC對(duì)于DPPH·的清除活性IC50為0.36 mg/mL，可見對(duì)DPPH·清除能力為VC>PHG>PHV,但PHG和PHV的清除能力也是較好的。周大勇[17]等采用木瓜蛋白酶水解鮑魚內(nèi)臟得到的酶解液,檢測(cè)的抗氧化肽酶解液對(duì)DPPH·清除率的IC50值為4 mg/mL,比本實(shí)驗(yàn)的PHV稍高,可能是由于兩者使用的酶解原料、工具酶及酶解條件有差異。

圖2 不同濃度PHG、PHV的DPPH·清除率Fig.2 DPPH· clearance of PHG,PHV with different concentrations

2.3.3 ·OH清除率 由圖3可以看出,在本實(shí)驗(yàn)體系濃度范圍內(nèi),PHG、PHV對(duì)·OH均有不同的清除能力,隨著反應(yīng)體系濃度的增大,其清除率也不斷增大,PHG的·OH清除率的IC50值為3.70 mg/mL,PHV的·OH清除率IC50值為4.46 mg/mL,VC的IC50值為0.77 mg/mL,三者的·OH清除率呈明顯的劑量依賴關(guān)系。在0～6 mg/mL濃度范圍內(nèi),PHG的·OH清除率高于PHV,在8～12 mg/mL范圍內(nèi),PHV的·OH清除率高于PHG,這可能是由于多肽的抗氧化活性與氨基酸的種類相關(guān)[13]。最終PHG、PHV的清除率分別達(dá)到72.66%、78.23%,二者對(duì)·OH的清除率逐漸穩(wěn)定。

圖3 不同濃度PHG、PHV的·OH清除率Fig.3 ·OH clearance of PHG,PHV with different concentrations

圖4 不同濃度PHG、PHV的清除率PHV with different concentrations

2.3.5 脂質(zhì)氧化抑制率 如圖5所示,在整個(gè)反應(yīng)時(shí)期PHG、PHV的脂質(zhì)氧化抑制率均呈現(xiàn)先逐漸升高至穩(wěn)定的趨勢(shì),在濃度增加到8 mg/mL時(shí),PHG、PHV的脂質(zhì)氧化抑制率開始逐漸趨于穩(wěn)定,此時(shí),PHG的脂質(zhì)氧化抑制率為50.85%,PHV的脂質(zhì)氧化抑制率為66.51%。游麗君[19]曾提出氨基酸中的共軛結(jié)構(gòu)對(duì)維持抗氧化性的穩(wěn)定性起了至關(guān)重要的作用,脂質(zhì)過氧化的過程實(shí)質(zhì)上是亞油酸生成共軛二烯的過程,當(dāng)共軛二烯的生成量達(dá)到一定程度時(shí),脂質(zhì)氧化的抑制率便逐漸穩(wěn)定,多肽的抗氧化性逐漸穩(wěn)定。PHG的脂質(zhì)氧化抑制率IC50值為7.41 mg/mL,PHV的脂質(zhì)氧化抑制率IC50值為4.15 mg/mL,VC的脂質(zhì)氧化抑制率IC50值為0.83 mg/mL,說明PHV對(duì)脂質(zhì)氧化的抑制作用高于PHG。

圖5 不同濃度PHG、PHV的脂質(zhì)氧化抑制率Fig.5 Inhibition rate of lipid oxidation of PHG,PHV with different concentrations

2.3.6 Fe2+螯合率 Fe2+在脂質(zhì)的氧化過程中會(huì)起到催化作用,因此具有螯合金屬離子作用的物質(zhì)可以間接地起到抗氧化作用,螯合能力的強(qiáng)弱也在一定程度上體現(xiàn)了抗氧化性能的強(qiáng)弱[10]。如圖6所示,在濃度達(dá)到2.0 mg/mL之前,PHG和PHV對(duì)Fe2+的螯合率迅速升高,且PHV對(duì)Fe2+的螯合率高于PHG;從濃度4.0 mg/mL起,PHG對(duì)Fe2+的螯合率始終高于PHV,直至12 mg/mL時(shí),PHV對(duì)Fe2+的螯合率趨于穩(wěn)定,達(dá)到85.97%,PHG對(duì)Fe2+的螯合率繼續(xù)升高,甚至高于VC對(duì)Fe2+的螯合率,達(dá)到94.47%。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,PHG對(duì)Fe2+的螯合率IC50值為3.36 mg/mL,PHV對(duì)Fe2+的螯合率IC50值為3.58 mg/mL,VC對(duì)Fe2+的螯合率IC50值為0.80 mg/mL,這說明PHG、PHV都表現(xiàn)出較高的螯合鐵的能力。

圖6 不同濃度PHG、PHV的Fe2+螯合率Fig.6 Fe2+ chelation rate of PHG,PHV with different concentrations

2.4 PHG、PHV對(duì)細(xì)菌的抑制結(jié)果分析

PHG、PHV對(duì)大腸桿菌的抑制作用如圖7和表3所示,PHG、PHV的抑菌圈直徑均大于相應(yīng)的陽性對(duì)照抑菌圈直徑,說明PHG、PHV對(duì)大腸桿菌都有良好的抑制作用。PHV的抑菌圈直徑明顯大于PHG,抑菌圈直徑為11.61 mm,PHG的抑菌直徑為8.62 mm,說明PHV的抑菌能力較PHG更高。丁利君等[20]在研究羅非魚蛋白酶解液螯合物的抑菌效果時(shí)提出,酶解液螯合物中肽分子可能和細(xì)菌細(xì)胞膜受體蛋白結(jié)合,改變細(xì)胞質(zhì)膜的通透性,造成膜結(jié)構(gòu)破壞,引起膜內(nèi)水溶性物質(zhì)大量滲出,從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象PHG、PHV為皺紋盤鮑腹足、內(nèi)臟的酶解液,其抑菌效果正是上述抑菌機(jī)理所致。

圖7 PHG、PHV的抑菌效果Fig.7 Antimicrobial effect of antioxidant peptidase hydrolysate注:-：為陰性對(duì)照蒸餾水;+：為1000 U/mL的鏈霉素和卡那霉素陽性對(duì)照。

抗氧化肽類別抑菌圈陽性對(duì)照陰性對(duì)照PHG8.628.06-PHV11.619.23-

3 結(jié)論