色譜及其聯(lián)用技術(shù)在保健食品非法添加藥物檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展

項(xiàng)昭保,2,伍曉玲3,汪程遠(yuǎn),2,李承霖

(1.重慶工商大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院,重慶 400067;2.天然藥物研究重慶高校市級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400067;3.重慶工商大學(xué)評(píng)估與督導(dǎo)辦公室,重慶 400067)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,人民生活質(zhì)量不斷提高,“治未病”的大健康理念越來(lái)越深入人心。保健食品含有一定量的功效成分,能調(diào)節(jié)人體的機(jī)能,具有特定的功效,是人體機(jī)理調(diào)節(jié)劑、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑,有助于人體健康;同時(shí)保健食品屬于食品,食用安全?；诒＝∈称返墓δ苄院桶踩?xún)纱筇攸c(diǎn),越來(lái)越多的人選購(gòu)、食用保健食品,使得我國(guó)保健食品行業(yè)取得了快速發(fā)展。

但是保健食品不是藥品,它不以治療疾病為目的,僅僅具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能,因此服用保健食品起效較慢,效果不明顯。在社會(huì)節(jié)奏越來(lái)越快的今天,人們?cè)絹?lái)越追求高效、快捷,對(duì)保健食品期望起效快、效果好。為滿(mǎn)足這種需求，增強(qiáng)保健食品的保健功能,一些利欲熏心的生產(chǎn)廠(chǎng)家往往在保健食品生產(chǎn)過(guò)程中違法添加化學(xué)藥物;一旦違法添加化學(xué)藥物以后,與市場(chǎng)上其他同類(lèi)產(chǎn)品相比,短期內(nèi)即可收到立竿見(jiàn)影的效果,從而迅速占領(lǐng)市場(chǎng),因此保健食品非法添加化學(xué)藥物已成為當(dāng)前保健食品造假的主要方式[1-2]。但是藥物進(jìn)入食物,對(duì)食品安全性造成嚴(yán)重影響,對(duì)人民群眾生命安全造成了極大危害。

因此,保健食品非法添加化學(xué)藥物屬于食品藥品監(jiān)管部門(mén)嚴(yán)厲打擊的對(duì)象。但是只有加強(qiáng)對(duì)保健食品中非法添加藥物的檢測(cè),不斷規(guī)范和改進(jìn)檢測(cè)技術(shù),才能有效預(yù)防保健食品非法添加藥物的危害。對(duì)保健食品中非法添加藥物的檢測(cè)中,如何在成分復(fù)雜的保健食品中迅速發(fā)現(xiàn)非法添加藥物是關(guān)鍵。色譜技術(shù)是分離復(fù)雜混合物組分最有效的方法,在混合物分離純化中廣泛應(yīng)用,配以合適的檢測(cè)手段,廣泛用于化學(xué)成分的定性定量分析。本文綜述了近年來(lái)色譜及其聯(lián)用技術(shù)在保健食品中非法添加藥物檢測(cè)中的應(yīng)用,并進(jìn)行了相應(yīng)的歸納和分析,為保健食品中非法添加藥物檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展提供了參考,為保健食品生產(chǎn)銷(xiāo)售管理的進(jìn)一步規(guī)范提供了依據(jù)。

1 薄層色譜法(TLC)及其聯(lián)用技術(shù)

1.1 薄層色譜法(TLC)

TLC操作簡(jiǎn)單,無(wú)需復(fù)雜的儀器和設(shè)備,尤其對(duì)于基層藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu),可作為初篩保健食品中非法添加某些化學(xué)藥物的有效手段。李惠敏[3]用乙醇提取待測(cè)品,提取液用硅膠GF254薄層板展開(kāi),以乙酸乙酯-二氯甲烷-冰醋酸(25∶25∶0.2)為展開(kāi)劑,建立了雙氯芬酸鈉、對(duì)乙酰氨基酚、吲哚美辛和萘普生等4種解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)的TLC定性分析方法,該方法操作簡(jiǎn)單、分析速度快,同時(shí)具有良好的耐用性,并能同時(shí)分析多品種、多劑型、多規(guī)格的樣品,可滿(mǎn)足基層監(jiān)管部門(mén)現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)管的需求。吳靜[4]分別取鎮(zhèn)靜安神類(lèi)中成藥及保健食品一次服用量樣品經(jīng)三氯甲烷提取后點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上,以正己烷-氯仿-甲醇(5∶3∶1)為展開(kāi)劑,地西泮,苯巴比妥和艾司唑侖三種化學(xué)成分能得到較好的分離。劉若冰等[5]采用TLC對(duì)10個(gè)市售減肥保健食品進(jìn)行非法添加鹽酸西布曲明的定性鑒別,有8個(gè)檢出了鹽酸西布曲明,試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、快速,結(jié)果可靠。袁莉[6]采用TLC對(duì)11個(gè)潤(rùn)腸通便類(lèi)保健品中大黃予以鑒別,可快速、準(zhǔn)確的判斷出潤(rùn)腸通便類(lèi)保健品中是否非法添加大黃。

TLC方法簡(jiǎn)單、快速且重現(xiàn)性好,但定性能力有限,一般只能作為初篩手段,且易出現(xiàn)“假陽(yáng)性”結(jié)果,而保健食品成分復(fù)雜,不同成分可能出現(xiàn)相同的比移值。因此,TLC必需有對(duì)照品且多次試驗(yàn)才能確定待測(cè)樣品中是否含有非法添加的化學(xué)藥品,或者借助其他技術(shù)手段進(jìn)一步確定。

1.2 薄層色譜法與紫外聯(lián)用技術(shù)(TLC-UV)

有些物質(zhì)在紫外下會(huì)產(chǎn)生吸收光譜,利用物質(zhì)分子紫外吸收所產(chǎn)生的紫外光譜及吸收程度可以對(duì)物質(zhì)的含量和結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定、分析。王藹英等[7]取相當(dāng)于一次口服劑量的唐得康膠囊、糖舒寧膠囊、清脂降糖膠囊、天葛膠囊內(nèi)容物,分別加入三氯甲烷超聲萃取,萃取液采用硅膠GF254薄層板,三氯甲烷-石油醚-甲醇-冰乙酸(8∶13∶1∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi)取薄層斑點(diǎn),測(cè)其紫外吸收曲線(xiàn),發(fā)現(xiàn)唐得康膠囊、糖舒寧膠囊、清脂降糖膠囊中非法添加了格列本脲,該方法簡(jiǎn)便易行、專(zhuān)屬性較強(qiáng),可用TLC-UV法對(duì)保健食品中摻入的化學(xué)降糖藥物進(jìn)行快速檢測(cè)。余蘭等[8]采用TLC-UV法對(duì)15個(gè)市售減肥保健食品進(jìn)行非法添加鹽酸西布曲明的定性鑒別,有8個(gè)檢出了鹽酸西布曲明,試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、快速,結(jié)果可靠。經(jīng)TLC分離的樣品通過(guò)UV測(cè)試進(jìn)一步定性分析,比單純的TLC定性能力強(qiáng),但是物質(zhì)的紫外吸收光譜基本上是其分子中生色團(tuán)及助色團(tuán)的特征,并非整個(gè)分子的特征。而且很多化合物在紫外沒(méi)有吸收或者只有微弱的吸收,因此利用UV鑒定有機(jī)化合物不如利用紅外光譜(IR)有效。

1.3 薄層色譜法與傅立葉變換紅外光譜聯(lián)用技術(shù)(TLC-FTIR)

紅外吸收峰的位置與強(qiáng)度反映了分子結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn),可以用來(lái)鑒別未知物的結(jié)構(gòu)組成或確定其化學(xué)基團(tuán),在未知化合物的結(jié)構(gòu)鑒定上應(yīng)用廣泛[9]。許鳳等[10]取10個(gè)減肥保健食品,用乙醇超聲提取,固定相為GF254鋁合金硅膠板,展開(kāi)劑為乙酸乙酯∶石油醚(60～90 ℃)∶甲醇=10∶6∶1,分別用紫外燈(254 nm)和自制的2% NaOH試紙兩種檢視方法初篩,再利用TLC技術(shù)將可疑斑點(diǎn)分離純化后進(jìn)行FTIR檢測(cè),并與對(duì)照品的FTIR譜圖比較確認(rèn)。所建立的方法準(zhǔn)確、可靠,可作為該類(lèi)產(chǎn)品是否添加酚酞的檢測(cè)方法。FTIR法對(duì)樣品純度要求較高,需要一套有效的分離技術(shù)。TLC法本身就是一種良好的分離技術(shù),二者有效結(jié)合,對(duì)疑似含有非法添加化學(xué)藥品的保健食品進(jìn)行初篩的基礎(chǔ)上,將目標(biāo)化合物用TLC法分離制備后進(jìn)行FTIR檢測(cè),并與對(duì)照品的紅外光譜圖進(jìn)行比較,利用FTIR的定性、檢索功能,能夠快速準(zhǔn)確地判斷出保健品中是否含有非法添加化學(xué)藥品。對(duì)于非法添加的化學(xué)藥物成分明確的保健食品檢測(cè),TLC-FTIR聯(lián)用技術(shù)有良好的應(yīng)用。

FTIR加一個(gè)顯微鏡就可進(jìn)行顯微紅外光譜分析(Micro-FTIR),其特點(diǎn)為靈敏度高,可以實(shí)現(xiàn)痕量樣品的分析;不需要添加任何稀釋劑,能反映樣品的本質(zhì)光譜;官能團(tuán)的空間分布,Micro-FTIR能夠給出吸收峰的圖像,根據(jù)特征吸收峰在樣品中的分布,判斷官能團(tuán)的空間分布,有利于結(jié)構(gòu)分析。許鳳等[11]取9個(gè)減肥保健食品,用甲醇超聲提取,以硅膠GF254鋁合金薄層板為固定相,以三氧甲烷-甲醇-氨水(11∶1∶0.12)為展開(kāi)劑,用TLC快速初篩后,再聯(lián)用Micro-FTIR對(duì)其進(jìn)行定性檢測(cè)。在檢查下的9批供試品中有2批含有鹽酸芬氟拉明,方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好,可以作為該類(lèi)保健食品非法添加鹽酸芬氟拉明的快速檢測(cè)方法。但是化合物有些基團(tuán)振動(dòng)時(shí)偶極矩沒(méi)有變化,不出現(xiàn)紅外吸收峰,無(wú)法據(jù)此進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒別。

1.4 薄層色譜法與拉曼光譜聯(lián)用技術(shù)(TLC-Raman)

紅外光譜和拉曼光譜都屬于分子振動(dòng)光譜,都是研究分子結(jié)構(gòu)的有力手段,但紅外光譜和拉曼光譜的選律不相同,有些基團(tuán)振動(dòng)時(shí)偶極矩變化非常大,紅外吸收峰很強(qiáng),是紅外活性;有些基團(tuán)振動(dòng)時(shí)偶極矩沒(méi)有變化,不出現(xiàn)紅外吸收峰,屬紅外非活性,這種偶極矩沒(méi)有變化的振動(dòng)拉曼峰會(huì)非常強(qiáng),屬于拉曼活性。因此,IR和Roman總體上互補(bǔ),拉曼活性振動(dòng),適合用拉曼光譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。李想等[12]建立TLC-Raman聯(lián)用方法,并對(duì)減肥類(lèi)保健食品中非法添加的四種化學(xué)成分(茶堿、咖啡因、苯丙酸諾龍、螺內(nèi)酯)進(jìn)行檢測(cè)。采用TLC法將摻雜成分與保健食品基質(zhì)進(jìn)行初步分離,在紫外燈下檢視定位,以780 nm激光為光源,對(duì)TLC上微量摻雜成分的斑點(diǎn)原位,直接檢測(cè)濃集點(diǎn)的拉曼光譜?？疾觳煌浞奖＝∈称坊|(zhì)對(duì)摻雜成分拉曼光譜的影響,并對(duì)檢測(cè)限進(jìn)行驗(yàn)證,初步建立了減肥類(lèi)保健食品中四種摻雜成分的TLC-Roman檢測(cè)方法。而且常用保健食品基質(zhì)對(duì)摻雜成分檢測(cè)結(jié)果無(wú)干擾,不需要刮板。該法專(zhuān)屬、靈敏、快速、簡(jiǎn)便,可為保健食品中非法添加化學(xué)成分的快速檢測(cè)技術(shù)研究提供新的參考依據(jù)。

基于TLC-Raman聯(lián)用技術(shù),許鳳等[13]對(duì)降壓類(lèi)保健食品中非法添加的3種化學(xué)成分(尼莫地乎、拉西地平和尼群地平)進(jìn)行原位富集檢測(cè),并對(duì)6種降壓保健食品進(jìn)行了測(cè)試,TLC法采用硅膠60F254鋁合金薄層板為固定相,環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比5∶4)混合溶液為展開(kāi)劑,在紫外燈下檢視定位,使添加成分與保健食品基質(zhì)進(jìn)行初步分離;再對(duì)薄層板上微量添加成分斑點(diǎn)用丙酮原位富集,直接檢測(cè)富集斑點(diǎn)的顯微拉曼光譜,結(jié)果表明,常用降壓類(lèi)保健食品基質(zhì)對(duì)添加成分檢測(cè)結(jié)果無(wú)干擾,顯微拉曼光譜技術(shù)更易于直接獲得大量有價(jià)值信息,共聚焦顯微拉曼光譜不僅具有常規(guī)拉曼光譜的特點(diǎn),還有自己的獨(dú)特優(yōu)勢(shì),具有微觀(guān)、原位、多相態(tài)、穩(wěn)定性好、空間分辨率高等特點(diǎn)。該法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速,為保健食品中非法添加化學(xué)成分的快速檢測(cè)提供了新的手段,是TLC-FTIR檢測(cè)技術(shù)的有效補(bǔ)充,而且因?yàn)镽aman光譜出現(xiàn)晚,更有新意。

2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜組分的分離與鑒定,其具有GC的高分辨率和MS的高靈敏度,是復(fù)雜樣品組分定性定量分析的有效工具。李濤等[14]采用溶劑超聲或液-液萃取方式對(duì)樣品進(jìn)行提取富集,采用GC-MS檢測(cè)降壓類(lèi)中成藥及保健食品中非法添加化學(xué)藥物,在30～60 min內(nèi)快速檢測(cè)降壓類(lèi)中成藥及保健食品中是否非法添加尼群地平等7種化學(xué)藥物,并在2批樣品中分別檢出了尼群地平和可樂(lè)定,該法快速、準(zhǔn)確,專(zhuān)屬性強(qiáng),可用于快速打假中的檢測(cè)。肖麗和等[15]用甲醇提取樣品,采用全掃描一級(jí)質(zhì)譜,并結(jié)合譜庫(kù)檢索進(jìn)行定性鑒別;采用二級(jí)選擇反應(yīng)檢測(cè)(MRM)方式進(jìn)行定量分析,建立了鎮(zhèn)靜安神類(lèi)中成藥及保健食品中非法添加艾司唑侖的GC-MS/MS檢測(cè)方法,該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確,可用于中成藥及保健食品中非法添加艾司唑侖的檢測(cè)方法。

GC-MS聯(lián)用分析的靈敏度高,有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索功能,方便對(duì)可疑色譜峰的初步判斷。雖然標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)有助于定性,但也并非完全可靠;在初篩陽(yáng)性后,需要使用對(duì)照品或其他方式輔助定性。此外GC-MS對(duì)部分藥物的分析需要進(jìn)行衍生化,耗時(shí)較長(zhǎng)。因此GC-MS主要適用于低分子化合物(分子量<1000)分析,尤其適合于揮發(fā)性成分的分析。很多大分子或難氣化的化學(xué)藥物難以進(jìn)行GC-MS分析。

3 高效液相色譜(HPLC)及其聯(lián)用技術(shù)

3.1 高效液相色譜(HPLC)

由高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)的HPLC技術(shù),具有高壓、高速、高效、高靈敏度和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)[16],特別是近年來(lái)采用了二極管陣列檢測(cè)器(DAD),提高了識(shí)別添加化學(xué)成分的科學(xué)性與準(zhǔn)確性。邢俊波等[17]采用梯度洗脫,建立了同時(shí)分析測(cè)定補(bǔ)腎壯陽(yáng)類(lèi)中成藥及保健食品中非法添加7種西藥成分(豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達(dá)那非、氨基他達(dá)那非)的高效液相色譜法。該方法簡(jiǎn)便快速準(zhǔn)確,重復(fù)性好,適用于基層藥檢機(jī)構(gòu),可作為補(bǔ)腎壯陽(yáng)類(lèi)中成藥及保健食品中非法添加上述7種西藥成分的快速篩查方法。韓東岐等[18]采用梯度洗脫,建立了高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)技術(shù)(HPLC-DAD)同時(shí)檢測(cè)鎮(zhèn)靜安神類(lèi)中成藥及保健食品中非法添加的9種安眠藥物。顏偉華等[19]采用梯度洗脫,HPLC-DAD技術(shù),建立抗疲勞類(lèi)保健食品中那紅地那非、紅地那非、伐地那非等12種化藥成分的液相快速篩查方法。鄧?guó)Q等[20]采用等度洗脫,建立了在同一色譜系統(tǒng)檢測(cè)中成藥及保健食品中非法添加9種調(diào)血脂類(lèi)藥物成分的高效液相色譜快速檢驗(yàn)方法。羅達(dá)龍等[21]建立了對(duì)3種不同劑型的保健食品樣品中17 種非法添加化學(xué)物的同時(shí)分析高效液相色譜法。

3.2 高效液相色譜與固相萃取聯(lián)用技術(shù)(HPLC-SPE)

色譜技術(shù)是分離純化手段,樣品成分越簡(jiǎn)單,色譜分析越容易。因此若配以良好的預(yù)處理技術(shù),后期的分析檢測(cè)簡(jiǎn)單高效。固相萃取(Solid-Phase Extraction,簡(jiǎn)稱(chēng)SPE)是近年發(fā)展起來(lái)一種樣品預(yù)處理技術(shù),由液固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái),主要用于樣品的分離、純化和濃縮,與傳統(tǒng)的液液萃取法相比可以提高分析物的回收率,更有效的將分析物與干擾組分分離,簡(jiǎn)化樣品預(yù)處理過(guò)程,是復(fù)雜樣品進(jìn)行儀器分析最廣泛應(yīng)用的前處理技術(shù)[22]。多壁碳納米管分散型固相萃取(MWCNTs-dSPE)[23]與傳統(tǒng)固相萃取SPE相比,分散型固相萃取(dSPE)無(wú)需填充柱子和嚴(yán)格控制上樣及洗脫過(guò)程,直接將吸附材料加入含有目標(biāo)分析對(duì)象的樣品提取液中,在雜質(zhì)吸附模式下,吸附材料保留樣品中的雜質(zhì),從而實(shí)現(xiàn)樣品基質(zhì)的凈化[24]。黃佳佳等[25]建立MWCNTs-dSPE-HPLC法測(cè)定降糖類(lèi)保健食品中非法添加物羅格列酮的檢測(cè)方法。該樣品前處理方法簡(jiǎn)便、快速且成本較低,適用于批量保健食品中羅格列酮的快速檢測(cè)。

表1 保健食品中非法添加HPLC-MS檢測(cè)方法Table 1 HPLC-MS methods for the determination of illegal addition in health food

HPLC法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,適用于基層藥檢機(jī)構(gòu)檢測(cè)非法添加藥物,但需要對(duì)照品,由于保健食品非法添加化學(xué)藥物的不確定性,同時(shí)又缺少?gòu)V譜篩查方法,尚難以定性與篩查未知藥物,檢測(cè)保健食品非法添加化學(xué)藥物任重道遠(yuǎn)。

3.3 高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)

HPLC技術(shù)具有高壓、高速、高效、高靈敏度和應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn),但需要對(duì)照品才能定性,進(jìn)而進(jìn)一步定量分析。保健食品中非法添加的化學(xué)成分一般未知,生產(chǎn)企業(yè)也會(huì)選擇尚未被監(jiān)測(cè)的化學(xué)成分添加。因此HPLC技術(shù)對(duì)保健食品復(fù)雜的化學(xué)成分高效分離后,尚需與能確定化學(xué)成分化學(xué)結(jié)構(gòu)的技術(shù)聯(lián)用,才能對(duì)非法添加的未知成分進(jìn)行快速定性定量分析。MS技術(shù)是目前單獨(dú)確定化合物結(jié)構(gòu)的有效方法,HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)既能對(duì)復(fù)雜成分進(jìn)行快速分離,也能對(duì)具體成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析,所以被越來(lái)越多地用于保健食品中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)分析[26],表1作小結(jié)如下。MS分析的離子源一般都是ESI,質(zhì)量分析器主要是三重四級(jí)桿和離子肼。色譜分離條件依保健食品具體成分而定,以梯度洗脫方式居多。

4 超高效液相色譜(UPLC)及其聯(lián)用技術(shù)

HPLC技術(shù)雖具有高速、高效、高靈敏度的特點(diǎn),但保健食品成分很復(fù)雜,色譜分析時(shí)長(zhǎng)一般均在40 min以上,有些色譜分析甚至超過(guò)60 min,耗時(shí)長(zhǎng)。而超高效液相色譜法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)借助于高效液相色譜法的理論和原理,涵蓋了小顆粒填料、小系統(tǒng)體積(死體積)及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)[35-36],具有超高分離度、超高速度、超高柱效、高靈敏度等優(yōu)勢(shì),與傳統(tǒng)的HPLC相比,UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9、3、1.7倍,目前在分析實(shí)驗(yàn)室中的運(yùn)用越來(lái)越普及,在保健品中非法添加化學(xué)藥物檢測(cè)的應(yīng)用越來(lái)越廣泛[37]。

4.1 超高效液相色譜(UPLC)

程燕等[38]采用梯度洗脫,建立了超高效液相色譜同時(shí)測(cè)定功能性飲品和抗疲勞類(lèi)保健食品中非法添加的11種化學(xué)藥物。該法具有較好的專(zhuān)屬性、線(xiàn)性、回收率和精密度,在10 min內(nèi)可實(shí)現(xiàn)11種化學(xué)藥物的分離,適用于抗疲勞類(lèi)保健食品中非法添加的11種化學(xué)藥物的同時(shí)快速測(cè)定。王靜文等[39]采用梯度洗脫,建立了超高效液相色譜同時(shí)測(cè)定減肥類(lèi)保健食品中非法添加的25種藥物的方法。該法在26 min內(nèi)可實(shí)現(xiàn)25種化學(xué)藥物的分離,與傳統(tǒng)液相色譜方法相比,可在保證分離度的情況下,實(shí)現(xiàn)快速有效的高通量分析,且檢測(cè)的化合物種類(lèi)較全面,可為監(jiān)測(cè)保健食品非法添加藥物提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

4.2 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS)

UPLC與傳統(tǒng)的HPLC相比,分離速度、靈敏度及分離度均有明顯增加[47-48]。但需要新增設(shè)備及配套的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地,所需成本較高。實(shí)心核顆粒色譜技術(shù)是近幾年開(kāi)發(fā)的色譜填充新技術(shù),該技術(shù)優(yōu)化了高效液相色譜儀運(yùn)行背壓,通過(guò)提高分離度以及峰容量實(shí)現(xiàn)了普通高效液相色譜儀分離效率的最大化,使得分析效率能媲美超高效液相色譜,而且通用性和普及性更強(qiáng)。勵(lì)炯等[49]以高色譜性能的實(shí)心核顆粒色譜柱,建立了降糖類(lèi)保健食品中非法添加13種化學(xué)成分的定性定量檢測(cè)方法,簡(jiǎn)捷快速(只需10 min即可完成檢測(cè)),靈敏度高,抗干擾能力強(qiáng),可滿(mǎn)足實(shí)際樣品檢測(cè)的需要,特別涉及需要盡快報(bào)告結(jié)果的檢測(cè)時(shí),效果很好。

5 色譜與其他技術(shù)三種聯(lián)用

為進(jìn)一步確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,也有綜合了色譜技術(shù)與其他技術(shù)共3種技術(shù)聯(lián)用,用于保健食品中非法添加化學(xué)成分的檢測(cè),如田國(guó)賀等[50]運(yùn)用近紅外光譜(NIR)法對(duì)降糖類(lèi)中藥及保健食品中非法添加鹽酸二甲雙胍進(jìn)行快速篩選,采用逆向思維方法,以鹽酸二甲雙胍對(duì)照品NIR圖譜作為參照光譜,與降糖藥NIR光譜比對(duì),建立對(duì)照品與中藥制劑及保健食品的相關(guān)系數(shù),快速篩查中成藥及保健食品中是否非法添加了鹽酸二甲雙胍,經(jīng)HPLC-MS聯(lián)用定性后,將法定檢驗(yàn)結(jié)果與NIR結(jié)合,建立 NIR檢驗(yàn)?zāi)Ｐ?建立的應(yīng)急模型具有方法簡(jiǎn)單、快速、易操作等特點(diǎn),適用于大量樣品的快速篩選。廖春玲等[51]優(yōu)化梯度洗脫條件,UPLC在12 min后便可分離18種藥物,并均保持良好峰形。提取樣品后先用UPLC將樣品中可疑色譜峰篩查出來(lái),再用 GC-MS法進(jìn)行確證,時(shí)間約為23 min,采用UPLC 和GC-MS法聯(lián)合檢測(cè)安神類(lèi)保健食品新型非法添加藥物,操作簡(jiǎn)單、快速且可靠。Zhang等[52]利用SPE技術(shù)進(jìn)行前處理,建立了SPE-UPLC-MS方法檢測(cè)了廣東涼茶中非法添加阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、氯曲美酮、雙氯芬酸、頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢唑啉和齊特霉素等8個(gè)化學(xué)藥物,在36份廣東涼茶樣品中發(fā)現(xiàn)在4份樣本中非法添加對(duì)乙酰氨基酚、氯曲美酮和阿司匹林3種化學(xué)藥品,該方法具有良好的線(xiàn)性關(guān)系、選擇性、準(zhǔn)確性、日內(nèi)精度和日間精度。

6 結(jié)論與展望

近年來(lái),保健食品非法添加化學(xué)藥物現(xiàn)象已受到廣泛重視,非法添加檢測(cè)技術(shù)研究和應(yīng)用取得了一定的進(jìn)展,國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局先后陸續(xù)批復(fù)了多個(gè)保健食品非法添加化學(xué)藥品檢測(cè)檢驗(yàn)方法,如保健食品中75種非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)(BJS 201710)。保健食品中違法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方向正向便捷、快速、高選擇性等方向發(fā)展,集高效分離技術(shù)和檢測(cè)技術(shù)于一體的聯(lián)用技術(shù),如HPLC-MS技術(shù)越來(lái)越常用,但由于保健食品成分非常復(fù)雜,同時(shí)非法添加具有很大的不確定性,又缺少?gòu)V譜篩查方法,對(duì)其非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)還存在一些問(wèn)題:

第一,檢測(cè)方法的針對(duì)性與化學(xué)藥物添加的隨意性難以協(xié)調(diào)。現(xiàn)有國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批復(fù)的保健食品非法添加化學(xué)藥品檢測(cè)方法,大多是根據(jù)少數(shù)在監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)添加的藥物建立,而對(duì)于未知添加藥物無(wú)法篩查;基層檢測(cè)單位僅僅根據(jù)相應(yīng)方法對(duì)待測(cè)保健食品中某些特定的添加藥物進(jìn)行篩查,做出是否添加相應(yīng)藥物的結(jié)論,并不能對(duì)保健食品的安全性做出全面系統(tǒng)的判定,事實(shí)上不少經(jīng)基層食品檢驗(yàn)單位鑒定合格的保健食品,仍然含有其他有害身體健康的化學(xué)藥物未被檢測(cè)出。

第二,廣譜篩查方法的缺失。現(xiàn)有檢測(cè)方法主要是基于目標(biāo)篩查的模式建立,只能針對(duì)具體已知的非法添加藥物進(jìn)行針對(duì)性評(píng)估,對(duì)于未知物質(zhì)的篩查、定性定量分析則無(wú)能為力。很多不法廠(chǎng)商正是利用這一漏洞,非法添加現(xiàn)行檢測(cè)方法檢測(cè)目標(biāo)物之外的相關(guān)藥物,謀取暴利,短期內(nèi)非法添加的藥物卻不會(huì)被檢測(cè),自然不會(huì)被查出。因此,檢測(cè)食品非法添加藥物任重道遠(yuǎn),未來(lái)需加大研發(fā)力度,在技術(shù)上開(kāi)發(fā)與研究廣譜篩查方法,保障消費(fèi)者的權(quán)益。

第三,加快制定檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和推廣力度。當(dāng)前對(duì)非法添加藥物的檢測(cè)技術(shù)研究越來(lái)越多,但能上升為技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),并推廣應(yīng)用的少之又少。監(jiān)管部門(mén)組織相關(guān)科研機(jī)構(gòu)加快制定有效、廣譜的檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),并盡快推廣應(yīng)用,重點(diǎn)應(yīng)集中在具有智能性、預(yù)警性和及時(shí)性等特點(diǎn)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)加快建設(shè)非法添加藥物陽(yáng)性數(shù)據(jù)庫(kù)、數(shù)據(jù)源,并加快實(shí)現(xiàn)這些數(shù)據(jù)庫(kù)、數(shù)據(jù)源在全國(guó)范圍內(nèi)的共享?？梢越梃b相關(guān)經(jīng)驗(yàn)[53-55],嘗試建立政府、企業(yè)之外的第三方認(rèn)證平臺(tái),監(jiān)測(cè)保健食品的品質(zhì)。

總之,保健食品非法添加化學(xué)藥物檢測(cè)技術(shù)研究越來(lái)越多,色譜法具有良好的分離能力,結(jié)合相應(yīng)的檢識(shí)方法,理論上均能對(duì)非法添加藥物進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)前的重點(diǎn)是盡快建立便捷、快速、高通量的檢測(cè)方法,并形成相應(yīng)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),適合在基層食品檢驗(yàn)單位推廣應(yīng)用,有效控制保健品質(zhì)量，打擊保健品行業(yè)非法添加行為，保障消費(fèi)者的權(quán)益。