石斛提取液對斜紋夜蛾引誘效果評價

王詩琪 王占娣

摘要 ?[目的]評價石斛提取物測定斜紋夜蛾幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用。[方法]采用熱回流法，根據(jù)溶劑的極性由小到大依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水對石斛進行提取，利用Y形嗅覺儀測定石斛提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲的引誘效果。[結(jié)果]石斛的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水提取液中均存在有對斜紋夜蛾幼蟲具有明顯引誘效果的活性成分。[結(jié)論]石斛提取物可用于斜紋夜蛾綠色防控產(chǎn)品的開發(fā)。

關(guān)鍵詞石斛;斜紋夜蛾;植物源;引誘

中圖分類號：S433.4文獻標識碼：A文章編號：2095-3305（2019）03-010-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.03.005

斜紋夜蛾[Spodoptera litura（Fa？鄄bricius）]屬鱗翅目夜蛾科遷飛性害蟲，其寄主范圍廣，主要取食十字花科植物，可嚴重危害植物，導致蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)下降。目前斜紋夜蛾的防治方法主要為農(nóng)業(yè)防治、化學防治、物理防治等。其中，農(nóng)業(yè)防治主要措施為人工鏟除雜草和人工捕蟲，這些方式需要耗費大量的人力和財力[1];化學防治易在農(nóng)作物上殘留大量的農(nóng)藥，使昆蟲產(chǎn)生抗性，污染環(huán)境[2];物理防治的效果不理想[3]。采用昆蟲性信息素進行害蟲監(jiān)測和無公害防治具有活性高、特異性強、無毒、無污染、不殺傷天敵、使用簡便、成本低廉等優(yōu)點[4]，但存在合成成本高、誘集雄蟲量不足的問題[5]。從天然產(chǎn)物中尋找替代性信息素的物質(zhì)，成為斜紋夜蛾綠色防治研究的熱點。目前研究發(fā)現(xiàn)，蓖麻、番茄、白菜和薄荷[6]等植物對斜紋夜蛾均具有一定的誘集作用。這些植物都是斜紋夜蛾的寄主，由此可知，寄主植物中存在有防治斜紋夜蛾的活性物質(zhì)。

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）屬蘭科，表皮呈鐵綠色，是多年生附生草本植物，二級保護植物。鐵皮石斛是珍貴中藥石斛品種，藥食同源的滋陰補品。近年來，鐵皮石斛在云南種植面積逐漸增加，斜紋夜蛾也逐漸成為危害石斛的主要害蟲[7]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)石斛在醫(yī)藥行業(yè)應用較廣泛，其提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌及沙門菌具有明顯的抑制效果[8-10]，但其在農(nóng)業(yè)害蟲防治方面的研究較少。因此，筆者選取石斛作為供試材料，采用5種溶劑提取其活性成分，評價提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用，為斜紋夜蛾綠色防控產(chǎn)品的開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試昆蟲斜紋夜蛾飼養(yǎng)條件為溫度（27±1）℃，相對濕度為60%～70%，光周期為L∶D=12∶12（光12 h∶暗12 h）。供試昆蟲為4～5齡斜紋夜蛾幼蟲。

1.1.2溶劑與儀器供試溶劑有石油醚、無水乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、蒸餾水。供試儀器有大氣采樣儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、索氏提取器、Y形嗅覺儀。

1.1.3供試植物石斛購于市場，室內(nèi)盆栽1月以上，剪掉地上部分，自然晾干，備用。

1.2試驗方法

1.2.1提取液的制備采用熱回流法，利用索氏提取器，按照極性由小到大依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水提取石斛中的活性成分，藥液比為1∶10。提取液利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，減壓濃縮至10 ml，濃縮液作為母液，用相應的試劑分別稀釋0倍（母液）、1倍、2倍、3倍、5倍，4℃冰箱保存，備用。

1.2.2風洞試驗利用Y形嗅覺儀，直徑為1.3 cm，臂長為10 cm。以不同稀釋倍數(shù)的溶液為處理組，相應的提取溶劑為對照（CK），分別取20 μl，滴加到直徑為0.8 cm的圓形濾紙片中，自然揮干溶劑，分別放在Y形管的2個支臂內(nèi)。選取饑餓6 h以上的4～5齡的活躍幼蟲，放入Y形管的主管內(nèi)。設(shè)定風速為5 cm/s，20 min后記錄2個支管里面幼蟲的數(shù)量，每個處理4次重復。

1.2.3數(shù)據(jù)處理 ? 試驗數(shù)據(jù)用SAS 8.0軟件進行分析，用x2分析空白組與對照組引誘效果，用Duncan的ANOVA比較不同處理間是否具有顯著差異，評價不同處理引誘效果。

反應率（%）=處理組蟲量或CK組蟲量/20×100（1）

2結(jié)果與分析

以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水為試劑，提取石斛中的活性物質(zhì)，采用Y形嗅覺儀評價提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，以石油醚為提取試劑，提取液稀釋1倍和3倍時，處理組斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量明顯高于CK組，其中，提取液稀釋1倍時，處理組與CK組間存在極顯著性差異，表明石斛的石油醚提取液稀釋1倍和3倍對斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果（圖1A）。

采用二氯甲烷提取石斛，以其母液及其3倍稀釋液為處理時，斜紋夜蛾幼蟲數(shù)量與CK組存在顯著性差異，特別是滴加母液的處理組與CK組間存在極顯著性差異，其他測試濃度處理組與CK組間幼蟲數(shù)量差異不顯著（圖1B）。表明采用二氯甲烷提取石斛，其提取液母液及其3倍稀釋液對斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果，其中，母液對斜紋夜蛾的引誘效果最好。

以乙酸乙酯為提取試劑，其稀釋倍數(shù)在0～3倍范圍內(nèi)，斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量隨著稀釋倍數(shù)的增加而增加， 其稀釋倍數(shù)為1倍和3倍時，處理組斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量明顯高于CK組。表明乙酸乙酯提取液中存在對斜紋夜蛾有引誘效果的活性成分，其提取液稀釋3倍對斜紋夜蛾幼蟲的引誘效果最好（圖1C）。

隨著無水乙醇提取液稀釋倍數(shù)的增加，處理組斜紋夜蛾蟲口數(shù)量增加。提取液稀釋2倍和3倍時，處理組蟲口數(shù)量與CK組間存在極顯著性差異（圖1D）。表明石斛的無水乙醇提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲具有引誘效果。

以水為提取試劑，提取液稀釋0～3倍時，斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量隨著提液稀釋倍數(shù)的降低而增加。提取液稀釋0倍時，處理組蟲口數(shù)量明顯高于CK組（圖1E）。表明石斛的水提取液母液對斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果。