肺炎支原體檢測中應(yīng)用膠體金法與被動凝集法的優(yōu)劣差異

廣東省陽江市婦幼保健院（529500）馮王富 馮梅華 佘意貴

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumonia）是臨床上較為常見的一種非典型肺炎，其病原體為肺炎支原體，好發(fā)于兒童和青少年，癥狀以頑固性咳嗽為主要特征，其病理表現(xiàn)以間質(zhì)性肺炎為主[1]。由于支原體肺炎的癥狀和體征與普通細菌性肺炎相似，因而常導(dǎo)致誤診，造成抗生素的使用不當(dāng)甚至濫用，使患者癥狀反復(fù)遷延不愈，甚至誘發(fā)哮喘等并發(fā)癥[1]。因此近年來對支原體肺炎的病原學(xué)檢測研究逐漸增多，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、被動凝集法和膠體金法等血清學(xué)抗體檢測應(yīng)用較多，而后兩者因具有快速簡便易操作的優(yōu)點因而應(yīng)用廣泛[2]。本研究對比了應(yīng)用膠體金法與被動凝集法在肺炎支原體檢測中的優(yōu)劣差異，現(xiàn)報道如下。

1 材料方法

1.1 一般材料 選取我院2015年3月～2017年10月就診的肺炎患者220例，其中男122例，女98例，年齡5～12歲，平均(8.38士2.77)歲；病程6～18d，平均(12.68士5.39)d，體重指數(shù)（BMI）平均（19.11±2.06）kg/m2，所有患者入院后經(jīng)支原體（MP）快速液體培養(yǎng)后證實其中屬于肺炎支原體肺炎患者110例，非支原體肺炎患者110例。本研究得到醫(yī)院倫理委員會批準；患者及其家屬簽署知情同意。

1.2 檢測方法 所有患者采集空腹靜脈血以備檢測。膠體金法：采用肺炎支原體抗體檢測試劑盒（膠體金法）（上海古朵生物科技有限公司，24人份/盒）。檢測方法：①滴入二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板中央孔中，待完全滲入；②滴入100μl血清于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；③滴加三滴試劑Ⅱ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；滲入三滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入。結(jié)果：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端出現(xiàn)紅色圓斑，為肺炎支原體抗體陽性；反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端不出現(xiàn)紅色圓斑為肺炎支原體抗體陰性。反應(yīng)板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑，或C端、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑，則試劑盒失效[3]。

附表1 兩種檢測方法靈敏度比較[例(%)]

附表2 兩種檢測方法特異度比較[例(%)]

被動凝集法：采用肺炎支原體抗體診斷試劑盒（賽樂迪亞-麥可II，富士瑞必歐株式會社，25人份/盒），操作方法嚴格按說明書進行，結(jié)果判定：顆粒呈紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形為陰性；粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形為（±）；粒子環(huán)明顯增大，其外周邊緣不均勻且雜亂地凝集在周圍，為（+）；凝集粒子在底部整體上呈膜狀延展為（++）[3]。

1.3 療效評價 記錄肺炎支原體肺炎患者在兩種檢測方法下陽性和陰性例數(shù)，則靈敏度=陽性數(shù)/總數(shù)×100%；記錄非肺炎支原體肺炎患者在兩種檢測方法下陽性和陰性數(shù)，則靈敏度=陰性數(shù)/總數(shù)×100%。采用約登指數(shù)評價診斷準確率，約登指數(shù)=靈敏度+特異度-1[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 擬采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法靈敏度比較 在110例支原體肺炎患者中，膠體金法檢測的靈敏度為75.55%，被動凝集法檢測的靈敏度為91.82%，膠體金法檢測靈敏度顯著低于被動凝集法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.73，P＜0.01)。見附表1。

2.2 兩種檢測方法特異度比較 在110例非支原體肺炎患者中，膠體金法檢測的特異度為70.9%，被動凝集法檢測的靈敏度為83.64%，膠體金法檢測特異度顯著低于被動凝集法，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.07.73，P=0.02)。見附表2。

2.3 兩種檢測方法約登指數(shù)比較依據(jù)上述兩表，膠體金法的靈敏度為74.55%，特異度為70.91%，則其約登指數(shù)為0.45；被動凝集法的靈敏度為91.82%，特異度為83.64%，則其約登指數(shù)為0.75，被動凝集法的約登指數(shù)高于膠體金法。

3 討論

肺炎支原體（MP）是支原體肺炎的主要病原體，也是呼吸道感染的常見病原體，MP感染與細菌病毒等因素感染引起的肺炎癥狀體征，在肺部影像學(xué)表現(xiàn)上都極為相似，難以鑒別診斷。因此實驗室病原體檢測在支原體感染中極為重要。WHO推薦MP的分離培養(yǎng)為診斷的金標準[5]，但是實際應(yīng)用中該方法培養(yǎng)時間長，靈敏度較低，培養(yǎng)條件要求高，因而難以實踐運用。研究表明抗MP-IgM是人體受支原體感染后的特異性抗體，因而通過實驗室血清學(xué)檢測抗MP-IgM對于診斷MP感染具有重要意義，除了傳統(tǒng)的冷凝集試驗方法外，近年來隨著對MP抗體的檢測方法研究的深入，諸如補體結(jié)合試驗、被動顆粒凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗以及膠體金法等檢測方法逐漸運用于臨床，效果良好。

膠體金法即金標免疫斑點法（Dot Immungo Gold Method, DM）是應(yīng)用于各種病原體抗體檢測的一種新型的免疫標記技術(shù)。膠體金是由氯金酸在還原劑的作用下聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，該膠體在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子正電荷基團牢固結(jié)合，且不影響蛋白質(zhì)的生物特性；因而蛋白質(zhì)抗體即可被帶有顏色的膠體金顆粒標記出來[6]。被動凝集法的原理是將表面吸附有MP抗原的明膠顆粒替代由動物紅細胞制成的致敏人工明膠顆粒，再與血清中存在的MP抗體在適宜的電解質(zhì)溶液條件發(fā)生特異性的凝集反應(yīng)，從而標記處相應(yīng)的抗體[6]。

本研究表明：膠體金法檢測的靈敏度和特異度均顯著低于被動凝集法；膠體金法檢測的約登指數(shù)也低于被動凝集法，說明被動凝集法較膠體金法具有更高的診斷準確度。分析原因認為：膠體金雖然在特定環(huán)境下可以結(jié)合抗體蛋白，但是難以保證對特定蛋白結(jié)合的特異性，因此其靈敏度和特異度均較低，且當(dāng)IgM含量較少時，檢測結(jié)果會出現(xiàn)假陰性。被動凝集法采用診斷試劑盒直接檢測，操作簡便迅速，結(jié)果判讀容易；其用帶有MP抗原的明膠顆粒替代動物紅細胞所制的人工明膠顆粒，因而可以消除動物紅細胞載體引起的非特異性凝集反應(yīng)，因此其特異性高，靈敏度也增高，此外血清MP抗體的滴度與患者病情呈正相關(guān)，因此更有助于提高診斷的準確性?？梢姳粍幽z測肺炎支原體感染，更為準確可靠，這也與黎翠翠、李藹文等人的研究一致[7]。

綜上所述，被動凝集法檢測患者血清支原體抗體的靈敏度和特異度都顯著高于膠體金法，其約登指數(shù)也高于膠體金法，具有較高的診斷準確度，值得推廣應(yīng)用。