• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    針刺對大鼠酒精戒斷焦慮癥的治療效果及與CRH的關(guān)系

    2019-10-19 21:29:14邢宇雙鄭科文梁啟超吳宜艷趙玉佳
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2019年26期
    關(guān)鍵詞:海馬針刺模型

    邢宇雙 鄭科文 梁啟超 吳宜艷 趙玉佳

    [摘要] 目的 觀察并探究針刺治療大鼠酒精戒斷焦慮癥的作用及其機制。 方法 選取SPF級健康雄性SD大鼠54只,采用完全隨機分組方法將其分為空白組、模型(酒精戒斷焦慮癥模型)組、三陰交組、足三里組、電針兩穴(三陰交+足三里)組、針刺兩穴(三陰交+足三里)組,每組9只。除空白組外,其余各組均連續(xù)腹腔注射酒精28 d制備酒精成癮模型,撤酒精3 d制備酒精戒斷焦慮癥模型,撤酒精期間分別針刺相應(yīng)穴位進行治療,針刺3 d。采用高架十字迷宮(EPM)測其焦慮行為,酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測海馬中促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)濃度,實時熒光定量PCR法檢測海馬中CRH mRNA的表達。 結(jié)果 與空白組比較,模型組進入開放臂次數(shù)比例和停留時間比例明顯減少(P < 0.05),海馬中CRH濃度明顯升高(P < 0.01),CRH mRNA的表達顯著升高(P < 0.01);與模型組比較,電針兩穴組在EPM中進入開放臂次數(shù)比例、停留時間比例明顯增加(P < 0.05或P < 0.01),針刺兩穴組進入開放臂次數(shù)比例增加(P < 0.05),電針兩穴組和針刺兩穴組海馬中CRH濃度明顯降低(P < 0.01),CRH mRNA表達亦顯著降低(P < 0.05或P < 0.01),而單穴位組對各監(jiān)測指標的作用效果不明顯(P > 0.05)。結(jié)論 針刺能緩解酒精戒斷焦慮癥大鼠的焦慮,其抗焦慮的作用可能與調(diào)節(jié)大鼠海馬中CRH的表達有關(guān)。

    [關(guān)鍵詞] 針刺;焦慮;酒精戒斷;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素

    [中圖分類號] R246.6? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210(2019)09(b)-0012-05

    Effect of acupuncture for the treatment of alcohol withdrawal anxiety in rats and its relationship with CRH

    XING Yushuang1,2? ?ZHENG Kewen2? ?LIANG Qichao2? ?WU Yiyan2? ?ZHAO Yujia2

    1.Graduate School, Qiqihar Medical University, Heilongjiang Province, Qiqihar? ?161006, China; 2.School of Pharmacy, Mudanjiang Medical University, Heilongjiang Province, Mudanjiang? ?157011, China

    [Abstract] Objective To observe and explore the effect and mechanism of acupuncture for the treatment of alcohol withdrawal anxiety in rats. Methods Fifty-four SPF healthy male SD rats were selected and randomly divided into blank group, model (alcohol withdrawal anxiety model) group, sānyīnjiāo group, zúsānlǐ group, electro-acupuncture two-point (sānyīnjiāo + zúsānlǐ) group, acupuncture two-point (sānyīnjiāo + zúsānlǐ) group, with 9 rats in each group. Except the blank group, all the other groups were given continuous intraperitoneal injection of alcohol for 28 days to prepare the alcohol addiction model, withdrawal of alcohol for 3 days to prepare the alcohol withdrawal anxiety model, and they were respectively given acupuncture at corresponding points during withdrawal of alcohol for 3 days. The elevated plus-maze (EPM) test was used to measure the anxiety behavior. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure the concentration of corticotropin releasing hormone (CRH) in the hippocampus. The real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of CRH mRNA in hippocampus. Results Compared with the blank group, the percentage of number and residence time of the model group staying in the open arms were significantly reduced (P < 0.05), the concentration of CRH in the hippocampus was significantly increased (P < 0.01), the expression of CRH mRNA was significantly increased (P < 0.01); compared with the model group, the percentage of number of entering the open arm and residence time staying in the open arm during EPM test of the electro-acupuncture two-point group were significantly increased (P < 0.05 or P < 0.01), the percentage of number entering the open arm during EPM test of the acupuncture two-point group was significantly increased (P < 0.05), CRH concentrations in hippocampus of the electro-acupuncture two-point group and the acupuncture two-point group were significantly decreased (P < 0.01), and CRH mRNA expression in hippocampus was also significantly decreased (P < 0.05 or P < 0.01). However, the effect of single acupoint group on each monitoring index was not significant (P > 0.05). Conclusion Acupuncture can relieve the anxiety of rats with alcohol withdrawal anxiety, and its anti-anxiety effect may be related to the regulation of CRH expression in the hippocampus of rats.

    [Key words] Acupuncture; Anxiety; Alcohol withdrawal; Corticotropin releasing hormone

    酒精依賴可導(dǎo)致多種軀體和精神疾病,不僅損害個人健康,更是家庭暴力以及犯罪的重要根源[1]。酒精戒斷綜合征主要表現(xiàn)為不同程度的焦慮癥狀[2],這種焦慮癥狀是導(dǎo)致復(fù)飲的重要風險因素。在焦慮樣癥狀的產(chǎn)生及表達中,常伴隨著促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)-促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)-腎上腺內(nèi)分泌反應(yīng)軸的功能亢進[3-4]。CRH調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、自主神經(jīng)、中樞神經(jīng)和行為反應(yīng),是機體應(yīng)答應(yīng)激刺激的重要神經(jīng)肽[5-6]。研究發(fā)現(xiàn),CRH在介導(dǎo)大鼠酒精焦慮樣癥狀中起著非常重要的作用[7-8]。

    針刺作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的兩大支柱之一,具有療效穩(wěn)固、操作安全簡單、無成癮性等優(yōu)點,自古以來被廣泛用于成癮藥物的脫敏和脫毒治療。研究顯示針刺可緩解焦慮癥狀[9-10]。近年來,一些國內(nèi)外學(xué)者證明了針刺療法對酒精依賴的治療效果[11],為針刺療法在酒精依賴中的應(yīng)用提供了強有力的臨床支持。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認為,焦慮癥之神志不安多由臟腑功能失調(diào)、氣機失常所致,涉及到心、肝、脾、腎。足三里為足陽明胃經(jīng)合穴,三陰交為足三陰經(jīng)的交會穴,具有疏肝調(diào)肝、健脾化痰、補虛培元的作用,對治療焦慮癥狀具有很好的效果。研究證實,針刺足三里和三陰交穴可調(diào)節(jié)大腦紋狀體和伏隔核多巴胺神經(jīng)的興奮性,抑制大鼠過度運動、肌肉僵硬和震顫等酒精戒斷機體癥狀[12]。近幾年張雅紅等[13]在國家自然科學(xué)基金項目資助下,完成了電針治療改善酒精依賴住院患者情緒的研究。

    綜上所述,本研究欲在動物實驗水平上觀察針刺三陰交、足三里對大鼠酒精戒斷焦慮癥的治療作用,并探究其與CRH之間的關(guān)系,為針刺療法防治酒精復(fù)飲提供實驗和理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗動物? SPF級雄性SD大鼠54只,重量220~250 g。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供,質(zhì)量合格證號:23001700000704。實驗動物飼養(yǎng)在SPF級實驗室,溫度(22.0±2.0)℃,食物和水供應(yīng)充足。

    1.1.2 實驗試劑? CRH酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒:紀寧實業(yè)(A04310);RNA提取試劑盒:美國歐米伽公司Omega(R6731-02);逆轉(zhuǎn)錄試劑盒:美國Invitrogen公司(4374967);SYBR Green熒光染料:美國ORIGENE公司(AGF1380A);PCR引物:上海生工生物工程股份有限公司。

    1.1.3 實驗儀器? 針刺針(華佗牌):廣州得源醫(yī)療器械有限公司;電針儀(BT701-1B):上海華誼醫(yī)用儀器有限公司;旋渦混合器(XH-D):上海比朗儀器有限公司;高架十字迷宮(EPM):上海欣軟信息科技有限公司;微型離心機(Mini-10K):湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司;PCR自動系列化分析儀(S1000):美國Bio-Rad;實時熒光定量PCR:美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司;RNA濃度分析儀(NanoDrop 2000):美國Thermo scientific;超凈工作臺(ESCO ACB-4A1):上海博迅實業(yè)有限公司。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 酒精成癮模型的建立及治療? 選取健康SD大鼠54只,體重220~250 g,采用完全隨機分組方法[14],將其隨機分為空白組(生理鹽水)、模型組(20%酒精)、電針兩穴組(20%酒精+電針單側(cè)足三里、三陰交)、針刺兩穴組(20%酒精+針刺單側(cè)足三里、三陰交)、三陰交組(20%酒精+針刺單側(cè)三陰交)、足三里組(20%酒精+針刺單側(cè)足三里),每組9只。除空白組外,其余五組每天腹腔內(nèi)注射20%(W/V)乙醇1.5 mL/100 g,共28 d,制備酒精成癮模型,撤酒精3 d,制備酒精戒斷焦慮征模型。撤酒精期間分別針刺相應(yīng)的穴位進行治療,治療前先將大鼠固定在自制的綁鼠臺上,用酒精進行消毒,電針兩穴組進行治療時,針刺單側(cè)足三里、三陰交,針柄接上電針儀,選用疏密波,頻率為15~25 Hz,電流為1~2 mA,刺激的強度以大鼠被針刺側(cè)的下肢輕微顫抖為度。每天進行1次,每次針刺30 min,連續(xù)治療3 d??瞻捉M和模型組在相同的時間內(nèi)進行與針刺組相同的固定,但不進行針刺治療。

    1.2.2 行為學(xué)指標測試? 實驗室內(nèi)光線昏暗并保持恒亮,室溫24℃,保持安靜。將每只大鼠置于高架十字迷宮(EPM)的正中央釋放,測試時間為5 min。每只動物完成測試后,清理糞便,并對裝置用酒精進行徹底清潔消毒。測試指標:進入開放臂次數(shù)(OE):即進入到任一開放臂的次數(shù),以大鼠4個爪均進入到臂內(nèi)開始,中途有1個爪從該臂中完全撤出,視為該次進入活動完成;進入開放臂時間(OT):從進入到退出開放臂,在開放臂內(nèi)停留的時間;進入閉合臂次數(shù)(CE):即進入到任一閉合臂的次數(shù),以大鼠4個爪均進入到臂內(nèi)開始,中途有1個爪從該臂中完全撤出,視為該次進入活動完成;進入閉合臂時間(CT):從進入到退出閉合臂,在臂內(nèi)停留的時間。由以上指標分別計算出:①進入開放臂次數(shù)比例(OE%)=OE/(OE+CE)×100%;②開放臂停留時間比例(OT%)=OT/(OT+CT)×100%。

    1.2.3 ELISA檢測CRH濃度? 使用前將試劑盒在室溫下平衡30 min。配置標準品稀釋液,濃度分別為480、240、120、60、30 nmol/L。取海馬,稱重,勻漿,離心,取上清,待測??瞻卓撞患訕樱患语@色劑A、B和終止液用于調(diào)零;標準品孔,每孔加入稀釋好的標準品50 μL,零孔加入標準品/樣品稀釋液50 μL,然后加入辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)試劑50 μL;樣品孔,加入樣品50 μL,然后加入HRP試劑50 μL。輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育60 min。洗滌5次,拍干。在每個孔內(nèi)先加入顯色劑A 50 μL,隨后加入顯色劑B 50 μL,輕輕震蕩以混勻,37℃下避光顯色,顯色10 min。每孔加終止液50 μL,終止反應(yīng)。以空白孔調(diào)零,450 nm波長依序測量各孔的吸光值(OD值)。測定在加入終止液后的10 min內(nèi)進行。

    1.2.4 實時熒光定量PCR法? ①海馬組織中總RNA的提取。用加入β-巰基乙醇的Buffer GTC裂解海馬組織,加入焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate,DEPC)水,充分混勻。加入蛋白酶K進行裂解,并充分混勻,在55℃水浴鍋中溫育10 min。在室溫下,離心樣品,將上清液加入gDNA柱,離心。在裂解產(chǎn)物中加入50%體積的無水乙醇,混勻。樣品轉(zhuǎn)入到HiBind RNA Mini Column上,室溫離心,棄去液體。用RNA wash Buffer Ⅰ、RNA wash Buffer Ⅱ洗柱。用65℃水浴鍋預(yù)熱的DEPC水洗脫柱子,離心。②逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。10 μL的RNA template(2 μg/μL)、3 μL的RT引物工作液(62.5 nmol/L)混合,離心,然后放入PCR儀中,在65℃下,反應(yīng)10 min。隨后冰浴2 min。4 μL的RT buffer(5×)、0.5 μL的RNase inhibitor(40 μg/μL)、2 μL的dNTP mix(2.5 mmol/L)、0.5 μL的RT酶(200 μg/μL)混合,離心,然后放入PCR儀中,在25℃下,反應(yīng)10 min,然后在50℃下,反應(yīng)1 h,最后在85℃條件下,反應(yīng)5 min。將逆轉(zhuǎn)錄所得cDNA稀釋5倍,在-20℃冰箱中儲存?zhèn)溆?。③實時熒光定量PCR 20 μL反應(yīng)體系:9 μL SYBR Green Mix、7.4 μL ddH2O、2 μL cDNA、0.8 μL Reverse Primer(10 μmol/L)、0.8 μL Forward Primer(10 μmol/L)。本實驗中的內(nèi)參基因選用β-actin。實驗中使用的所有引物均由生工生物工程上海有限公司合成并質(zhì)譜檢測,β-actin的上游引物序列:5′-TGACGTGGACATCCGCAAA-3′,下游引物序列:5′-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′;MTA1的上游引物序列:5′-CGCAGCCGTTGAATTTCTTG-3′,下游引物序列:5′-GCGGGACTTCTGTTGAGGC-3′。④實時熒光定量PCR反應(yīng)。在RT-PCR儀中,將SYBR Green,cDNA產(chǎn)物以及引物混合進行擴增,以β-actin作為內(nèi)參基因,反應(yīng)條件為:95℃條件下預(yù)變性,反應(yīng)10 min;95℃條件下變性,反應(yīng)15 s;60℃條件下退火,反應(yīng)1 min;95℃條件下變性,反應(yīng)15 s和60℃條件下退火,反應(yīng)1 min,重復(fù)40個循環(huán),反應(yīng)結(jié)束后,擴增結(jié)束。每個樣本做3個復(fù)孔。用2-ΔΔCt計算mRNA表達量。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 16.0對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示,多組比較采用單因素方差分析(ANOVA),組間兩兩比較采用LSD-t檢驗,以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 針刺治療對大鼠OE%和OT%的影響

    在EPM測試中,與空白組比較,模型組OE%和OT%明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05);與模型組比較,電針兩穴組可顯著增加OE%和OT%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01),針刺兩穴組能增加OE%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05),而單穴位治療組作用效果不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見表1。

    表1? ?針刺治療對大鼠OE%、OT%的影響(x±s)

    注:與空白組比較,*P < 0.05;與模型組比較,#P < 0.05,##P < 0.01。OT%:開放臂停留時間比例;OE%:進入開放臂次數(shù)比例

    2.2 針刺治療對大鼠CRH濃度的影響

    與空白組比較,模型組大鼠海馬中CRH濃度顯著升高,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01);與模型組比較,電針兩穴組與針刺兩穴組可明顯降低海馬中CRH濃度,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01),而單穴位治療組降低CRH濃度的趨勢不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見表2。

    表2? ?針刺治療對大鼠CRH濃度的影響(nmol/L,x±s)

    注:與空白組比較,**P < 0.01;與模型組比較,##P < 0.01。CRH:促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素

    2.3 針刺對大鼠CRH mRNA表達的影響

    與空白組比較,模型組大鼠海馬中CRH mRNA的表達顯著升高,差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01);與模型組比較,電針兩穴組和針刺兩穴組可明顯降低海馬中CRH mRNA的表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05或P < 0.01),而單穴位治療組對CRH mRNA表達的影響不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見圖1。

    與空白組比較,**P < 0.01;與模型組比較,#P < 0.05,##P < 0.01。CRH:促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素

    圖1? ?針刺對大鼠CRH mRNA表達的影響

    3 討論

    行為反映了個體所承受的外界刺激的特點,雖然人類與動物的行為活動不能完全對等,但其各自的行為活動與它們的心理及生理的關(guān)系十分密切。本研究所采用的EPM是國際公認的檢測動物焦慮行為的首選裝置[15]。本研究結(jié)果顯示,酒精戒斷大鼠可產(chǎn)生焦慮行為,其在開放臂的停留時間與空白組相比較短,進入開放臂的次數(shù)也相對較少??菇箲]藥物可影響EPM的測試結(jié)果,該類藥物對嚙齒類動物的焦慮樣行為具有抑制作用[16]。目前,藥物治療是抗焦慮最為直接的治療方法,在臨床上,苯二氮■類藥物常用于治療酒精戒斷焦慮癥,雖取得了一定的療效,但隨著病情的不斷加重,病期的加長,口服藥量也會隨之相應(yīng)增加,藥物的副作用也隨之產(chǎn)生。并且苯二氮■類藥物具有成癮性,其在臨床應(yīng)用上受到了限制,所以研究和開發(fā)既無成癮性又有很好抗焦慮效應(yīng)的新醫(yī)療手段是治療酒精依賴方面所面臨的緊迫任務(wù)。針灸具有療效穩(wěn)固且無成癮性等優(yōu)點,自古以來就被用于成癮藥物的脫敏、脫毒治療。在目前的研究中,電針兩穴、針刺兩穴治療可明顯改善酒精戒斷期間大鼠的焦慮樣行為,而單穴位治療作用效果不太明顯,說明針刺對焦慮的治療作用與針刺的方式、穴位有關(guān)。

    大量的研究結(jié)果顯示,當機體受到內(nèi)外環(huán)境的刺激時,應(yīng)激反應(yīng)會表現(xiàn)出一系列的神經(jīng)內(nèi)分泌物質(zhì)的變化,主要表現(xiàn)為下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(HPA)軸的興奮。下丘腦室旁核是HPA-神經(jīng)內(nèi)分泌軸的中樞位點,CRH則是HPA軸激活的關(guān)鍵性物質(zhì)。研究表明,在應(yīng)激刺激下,CRH濃度以及CRH mRNA表達均顯著增加[17]。在焦慮癥狀中所觀察到的激素含量的變化主要是由CRH的過度分泌所導(dǎo)致的[18]。研究表明,CRH的受體拮抗劑可作為抗焦慮以及抗抑郁的神經(jīng)藥理學(xué)治療方法[19]。邊緣系統(tǒng)具有生命腦、內(nèi)臟腦、情緒腦的稱號,與學(xué)習、記憶以及情感等具有密切的關(guān)系,是較為高級的控制中樞,可作用于內(nèi)臟與機體的內(nèi)環(huán)境。海馬組織的傳入神經(jīng)以及傳出神經(jīng)的調(diào)節(jié)在成癮機制的形成、維持方面扮演著重要的角色。邊緣系統(tǒng)的主要組成部分之一便是海馬,它不僅可以控制并反映情緒,還與認知功能、焦慮作用關(guān)系密切[20]。由本研究結(jié)果可知,模型組大鼠的海馬中CRH濃度以及CRH mRNA表達較空白組大鼠均增加,經(jīng)針刺治療后,其數(shù)值又趨于正常水平,由此提示,CRH在焦慮的發(fā)生中占有重要的地位。

    綜上所述,本研究提示,針刺可緩解酒精戒斷期間的焦慮樣行為,其抗焦慮的作用機制可能與CRH濃度以及CRH mRNA表達有關(guān)。

    [參考文獻]

    [1]? 呂園園,陳寶嫦,許律琴.酒精依賴與雙相情感障礙共病患者的臨床特征及生活質(zhì)量調(diào)查[J].海南醫(yī)學(xué),2019,30(8):1076-1078.

    [2]? 邢宇雙,梁啟超,楊志,等.針刺神門穴治療酒精戒斷焦慮征的研究現(xiàn)狀[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2017,17(34):40-42.

    [3]? Paretkar T,Dimitrov E. The Central Amygdala Corticotropin-releasing hormone(CRH)Neurons Modulation of Anxiety-like Behavior and Hippocampus-dependent Memory in Mice [J]. Neuroscience,2018,390:187-197.

    [4]? 周丹青.LDT中CRF神經(jīng)元對焦慮與睡眠的調(diào)控初探[D].杭州:浙江大學(xué),2016.

    [5]? Wang LA,de Kloet AD,Smeltzer MD,et al. Coupling corticotropin-releasing-hormone and angiotensin converting enzyme 2 dampens stress responsiveness in male mice [J]. Neuropharmacology,2018,133:85-93.

    [6]? Daviu N,Bruchas MR,Moghaddam B,et al. Neurobiological links between stress and anxiety [J]. Neurobiol Stress,2019,11:100191.

    [7]? 楊建飛,王紅,鄭祖艷.頭皮叢刺對焦慮模型大鼠HPA軸CRH、ACTH作用及分子機制研究[J].針灸臨床雜志,2018,34(10):55-58.

    [8]? Savarese A,Lasek AW. Regulation of anxiety-like behavior and Crhr1 expression in the basolateral amygdala by LMO3 [J]. Psychoneuroendocrinology,2018,92:13-20.

    [9]? 姚弘.針刺調(diào)節(jié)焦慮模型大鼠下丘腦C型利鈉肽受體的機制研究[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2016.

    [10]? 梁花花,王亞軍.近10年國內(nèi)外針刺治療焦慮癥研究進展[J].中華中醫(yī)藥雜志,2019,34(3):1131-1133.

    [11]? Cho SH,Whang WW. Acupuncture for alcohol dependence:a systematic review [J]. Alcohol Clin Exp Res,2009, 33(8):1305-1313.

    [12]? Kim JH,Chung JY,Kwon YK,et al. Acupuncture reduces alcohol withdrawal syndrome and c-Fos expression in rat brain [J]. Am J Chin Med,2005,33(6):887-896.

    [13]? 張雅紅,張瑞國,陳云春,等.電針治療對酒精依賴住院患者情緒改善的影響[J].中國民康醫(yī)學(xué),2010,22(10):1197-1198.

    [14]? 趙偉,孫國志.常用實驗動物隨機分組方法[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2009(4):61-62.

    [15]? 宗紹波,魏盛,蘇云祥,等.焦慮大鼠模型高架十字迷宮實驗的復(fù)測信度檢驗及參數(shù)相關(guān)性分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2011,8(30):5-7.

    [16]? Sj?觟stedt C,Ohlsson H,Li X,et al. Socio-demographic factors and long-term use of benzodiazepines in patients with depression,anxiety or insomnia [J]. Psychiatry Res,2017,249:221-225.

    [17]? He JJ,Chen XQ,Wang L,et al. Corticotropin-releasing hormone receptor 1 coexists with endothelin-1 and modulates its mRNA expression and release in rat paraventricular nucleus during hypoxia [J]. Neuroscience,2008, 152(4):1006-1014.

    [18]? Holsboer F,Ising M. Central CRH system in depression and anxiety--evidence from clinical studies with CRH 1 receptor antagonists [J]. Eur J Pharmacol,2008,583(2/3):350-357.

    [19]? Ising M,Holsboer F. CRH-sub-1 receptor antagonists for the treatment of depression and anxiety [J]. Exp Clin Psychopharmacol,2007,15(6):519-528.

    [20]? 嚴文霞,徐衛(wèi)紅,陳旭,等.環(huán)境濃度壬基酚暴露對大鼠焦慮行為及其海馬組織形態(tài)的影響[J].重慶醫(yī)學(xué),2019, 48(3):382-385.

    (收稿日期:2019-04-19? 本文編輯:張瑜杰)

    猜你喜歡
    海馬針刺模型
    一半模型
    海馬
    談針刺“針刺之要,氣至而有效”
    重要模型『一線三等角』
    重尾非線性自回歸模型自加權(quán)M-估計的漸近分布
    海馬
    “海馬”自述
    3D打印中的模型分割與打包
    海馬
    針刺聯(lián)合拔罐治療痤瘡50例
    国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲电影在线观看av| 国产av在哪里看| www.999成人在线观看| 日本 欧美在线| 欧美黄色淫秽网站| netflix在线观看网站| 国产成人欧美| 久久中文看片网| 最近最新免费中文字幕在线| 伦理电影免费视频| 激情视频va一区二区三区| 久热这里只有精品99| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 人人妻人人澡人人看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久中文字幕人妻熟女| 女人精品久久久久毛片| 99国产精品一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久香蕉国产精品| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲 国产 在线| 欧美日本中文国产一区发布| bbb黄色大片| 中文字幕久久专区| 亚洲 国产 在线| 久久香蕉国产精品| 免费不卡黄色视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产三级黄色录像| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日韩av在线大香蕉| svipshipincom国产片| 搞女人的毛片| 中文亚洲av片在线观看爽| 日本五十路高清| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品第一国产精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 啦啦啦免费观看视频1| videosex国产| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久久国产成人免费| 日本vs欧美在线观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 搡老妇女老女人老熟妇| 这个男人来自地球电影免费观看| or卡值多少钱| 国产精品 国内视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产麻豆69| 国产单亲对白刺激| www.熟女人妻精品国产| 国产精品一区二区在线不卡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美乱色亚洲激情| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品在线美女| 涩涩av久久男人的天堂| 两个人免费观看高清视频| 一二三四社区在线视频社区8| 国产成人精品在线电影| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 免费看十八禁软件| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲精品一区av在线观看| 国产av精品麻豆| 国产区一区二久久| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 色综合站精品国产| 香蕉丝袜av| 手机成人av网站| 成人永久免费在线观看视频| 在线播放国产精品三级| 成人手机av| 亚洲成国产人片在线观看| 18禁观看日本| 12—13女人毛片做爰片一| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 91成年电影在线观看| 天堂√8在线中文| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 天天添夜夜摸| 电影成人av| 制服诱惑二区| 少妇的丰满在线观看| 亚洲第一电影网av| 99国产精品99久久久久| 国产亚洲精品av在线| 麻豆成人av在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品久久久人人做人人爽| av在线天堂中文字幕| 母亲3免费完整高清在线观看| 成人三级做爰电影| 精品国产亚洲在线| av在线天堂中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品乱码一区二三区的特点 | tocl精华| 精品卡一卡二卡四卡免费| 涩涩av久久男人的天堂| 又大又爽又粗| 午夜日韩欧美国产| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99riav亚洲国产免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲 国产 在线| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美大码av| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人三级做爰电影| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 18禁观看日本| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲电影在线观看av| av有码第一页| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 色尼玛亚洲综合影院| 久久精品91蜜桃| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 最新在线观看一区二区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲第一青青草原| 国产成人av教育| 99国产精品一区二区三区| 他把我摸到了高潮在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩欧美免费精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲国产精品999在线| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人av激情在线播放| 嫩草影视91久久| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产三级在线视频| 大香蕉久久成人网| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美性长视频在线观看| 波多野结衣高清无吗| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 在线天堂中文资源库| 国产私拍福利视频在线观看| 成人免费观看视频高清| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 在线播放国产精品三级| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 老司机靠b影院| 国产91精品成人一区二区三区| 日本a在线网址| 真人一进一出gif抽搐免费| 1024视频免费在线观看| 欧美乱妇无乱码| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产麻豆69| 脱女人内裤的视频| 激情视频va一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| av视频在线观看入口| 亚洲人成伊人成综合网2020| √禁漫天堂资源中文www| 久久人妻熟女aⅴ| 他把我摸到了高潮在线观看| e午夜精品久久久久久久| 97人妻天天添夜夜摸| 国产午夜精品久久久久久| 少妇的丰满在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久香蕉国产精品| 成人18禁在线播放| 国产在线观看jvid| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲国产精品合色在线| 变态另类丝袜制服| 国产人伦9x9x在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | а√天堂www在线а√下载| 我的亚洲天堂| 村上凉子中文字幕在线| 久久香蕉激情| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲熟妇熟女久久| 日韩欧美在线二视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 91国产中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲 国产 在线| 麻豆av在线久日| 国产亚洲精品av在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲国产精品999在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 免费在线观看影片大全网站| 又大又爽又粗| 亚洲色图av天堂| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产成人av激情在线播放| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| www日本在线高清视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美亚洲日本最大视频资源| 最近最新中文字幕大全免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 男女下面进入的视频免费午夜 | 精品人妻在线不人妻| 国产午夜精品久久久久久| 精品第一国产精品| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲视频免费观看视频| 两性夫妻黄色片| 国产精品一区二区免费欧美| 老司机靠b影院| 午夜福利免费观看在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲欧美日韩无卡精品| a级毛片在线看网站| 久久影院123| 99国产极品粉嫩在线观看| 香蕉丝袜av| 老司机午夜福利在线观看视频| 成人国产综合亚洲| 午夜福利欧美成人| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一区在线观看完整版| 中文字幕久久专区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费在线观看完整版高清| 国产亚洲精品久久久久5区| 美女免费视频网站| 亚洲av电影在线进入| 18禁美女被吸乳视频| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲视频免费观看视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本三级黄在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产高清激情床上av| 欧美成人性av电影在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产91精品成人一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲专区中文字幕在线| 天天添夜夜摸| 久久久久国产一级毛片高清牌| www日本在线高清视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 成人欧美大片| av天堂在线播放| 成年人黄色毛片网站| 久久国产精品影院| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产乱人伦免费视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 黄色片一级片一级黄色片| 激情视频va一区二区三区| a级毛片在线看网站| 日韩国内少妇激情av| 国产成人精品在线电影| 亚洲av片天天在线观看| 露出奶头的视频| 成人欧美大片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜免费观看网址| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产主播在线观看一区二区| www.精华液| 色在线成人网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美日本中文国产一区发布| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜福利影视在线免费观看| 久热这里只有精品99| x7x7x7水蜜桃| 老司机在亚洲福利影院| 午夜福利免费观看在线| 国产精品一区二区在线不卡| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 久久中文看片网| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品国产亚洲在线| tocl精华| 国产精品综合久久久久久久免费 | 一级a爱视频在线免费观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成+人综合+亚洲专区| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产免费男女视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 香蕉久久夜色| 亚洲av第一区精品v没综合| 一本大道久久a久久精品| 免费看美女性在线毛片视频| 91九色精品人成在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 91精品国产国语对白视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲色图综合在线观看| 国产三级黄色录像| 91在线观看av| 午夜亚洲福利在线播放| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲av熟女| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲精华国产精华精| 九色亚洲精品在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 在线观看www视频免费| 久久性视频一级片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| av福利片在线| 久久久久亚洲av毛片大全| 老司机午夜十八禁免费视频| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 在线观看免费视频网站a站| 精品久久久久久成人av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 九色国产91popny在线| 99热只有精品国产| 久久青草综合色| 久久久水蜜桃国产精品网| 日日爽夜夜爽网站| 嫩草影院精品99| 91在线观看av| 欧美成人性av电影在线观看| 国产精品免费视频内射| 国产色视频综合| 丝袜在线中文字幕| 一区在线观看完整版| 国产精品综合久久久久久久免费 | 亚洲电影在线观看av| 久久九九热精品免费| 麻豆久久精品国产亚洲av| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲少妇的诱惑av| 婷婷丁香在线五月| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 在线天堂中文资源库| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲av成人av| 国产成人精品久久二区二区免费| 日本免费a在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲七黄色美女视频| 亚洲人成电影观看| 极品人妻少妇av视频| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲人成77777在线视频| 国内精品久久久久精免费| 午夜福利一区二区在线看| 精品欧美一区二区三区在线| 国产野战对白在线观看| 两性夫妻黄色片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产野战对白在线观看| 午夜老司机福利片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品,欧美在线| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av电影在线进入| 又黄又粗又硬又大视频| 麻豆av在线久日| 国产一区二区三区视频了| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 满18在线观看网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 后天国语完整版免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产精品一区二区精品视频观看| 又大又爽又粗| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 久热这里只有精品99| 九色国产91popny在线| 啦啦啦 在线观看视频| netflix在线观看网站| 一夜夜www| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜福利视频1000在线观看 | 99久久精品国产亚洲精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产片内射在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 色播在线永久视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 在线观看www视频免费| 人人妻人人澡人人看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩欧美国产在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 香蕉久久夜色| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| av天堂久久9| 欧美日本中文国产一区发布| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产成人影院久久av| 日韩免费av在线播放| 女人被狂操c到高潮| 黄色女人牲交| 国产1区2区3区精品| 久久中文字幕人妻熟女| 久热爱精品视频在线9| 波多野结衣一区麻豆| 日本五十路高清| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲男人天堂网一区| 午夜日韩欧美国产| 一级片免费观看大全| 丝袜在线中文字幕| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 免费搜索国产男女视频| 老汉色∧v一级毛片| 桃色一区二区三区在线观看| 在线永久观看黄色视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 激情视频va一区二区三区| 无人区码免费观看不卡| 午夜a级毛片| 最新美女视频免费是黄的| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 日本五十路高清| 午夜成年电影在线免费观看| 日韩三级视频一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 黄色视频不卡| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成人啪精品午夜网站| 两个人免费观看高清视频| 在线av久久热| 999精品在线视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 色综合站精品国产| 人人澡人人妻人| 国产高清激情床上av| 女人精品久久久久毛片| 男女午夜视频在线观看| x7x7x7水蜜桃| 久久婷婷成人综合色麻豆| 麻豆av在线久日| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲av五月六月丁香网| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲午夜理论影院| 啦啦啦 在线观看视频| 人人澡人人妻人| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| x7x7x7水蜜桃| 国产高清视频在线播放一区| 久久香蕉激情| 自线自在国产av| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲专区中文字幕在线| 香蕉国产在线看| 欧美日韩黄片免| 免费搜索国产男女视频| 91九色精品人成在线观看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 69av精品久久久久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久中文字幕一级| netflix在线观看网站| 久久香蕉国产精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 日本 av在线| 色av中文字幕| 午夜福利18| 成人国语在线视频| 国产三级在线视频| 欧美色视频一区免费| 999精品在线视频| 制服丝袜大香蕉在线| 99riav亚洲国产免费| 色哟哟哟哟哟哟| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品电影一区二区在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 美女免费视频网站| 中文字幕最新亚洲高清| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 波多野结衣巨乳人妻| 国产亚洲精品久久久久5区| 757午夜福利合集在线观看| cao死你这个sao货| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 精品第一国产精品| 欧美午夜高清在线| 国产成人av激情在线播放| 亚洲中文av在线| 在线观看舔阴道视频| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久久久国内视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 伦理电影免费视频| 日本 av在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费av毛片视频| 高清在线国产一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 级片在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产一区二区激情短视频| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久水蜜桃国产精品网| 9191精品国产免费久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 在线观看66精品国产| tocl精华| 国产精品影院久久| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美黑人精品巨大| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲av电影在线进入| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产成人影院久久av| 亚洲全国av大片| 精品欧美一区二区三区在线| 1024香蕉在线观看| 精品高清国产在线一区| av视频在线观看入口| 精品国产亚洲在线| 国内精品久久久久久久电影| 在线观看一区二区三区| 精品第一国产精品| 亚洲人成77777在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲美女黄片视频| 伦理电影免费视频| av有码第一页| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文|