N—芳酰基取代的二氫吲哚—3—乙酸類衍生物的設(shè)計(jì)、合成與體外降糖活性研究

張吉泉 武婷婷 馬才玉 馬曉 王建塔 湯磊

中圖分類號(hào) R914 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）03-0318-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.03.08

摘 要 目的：設(shè)計(jì)、合成N-芳酰基取代的二氫吲哚-3-乙酸類衍生物，并評(píng)價(jià)其體外降糖活性。方法：以吲哚衍生物2-[5-（芐氧基）-1-（4-氯苯甲?；?2-甲基-1H-吲哚-3-基]乙酸（GY3）為先導(dǎo)化合物，以4-苯甲氧基苯肼鹽酸鹽及4-氧戊酸甲酯為原料，經(jīng)Fischer吲哚環(huán)合、還原、酰胺化及水解等4步反應(yīng)得到8種N-芳?；?-羥基苯甲酰基、3-氰基苯甲酰基、4-硝基苯甲?；?、4-甲磺?；郊柞；?、4-乙酰胺基苯甲?；?-乙酰氨基苯甲?；悷燉；⑦拎?2-甲?；┤〈亩溥胚?3-乙酸類衍生物。采用人肝癌細(xì)胞HepG2測(cè)試目標(biāo)化合物的體外促葡萄糖消耗活性。結(jié)果：共合成8個(gè)N-芳酰基取代的二氫吲哚-3-乙酸類目標(biāo)化合物，其結(jié)構(gòu)均經(jīng)質(zhì)譜、核磁共振氫譜及碳譜確證。在1.0 μmol/L條件下，所合成化合物在HepG2細(xì)胞上的促葡萄糖消耗百分率為5.4%～9.1%，其中，2-[（2R，3S）-5-芐氧基-2-甲基-1-（4-甲磺?；郊柞；?2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸的降糖活性最好，其促葡萄糖消耗百分率為（9.10±1.81）%，與陽性對(duì)照藥物二甲雙胍接近[（10.58±1.68）%]，但仍弱于先導(dǎo)化合物GY3[（12.15±0.78）%]。結(jié)論：二氫吲哚類化合物的N-芳酰基芳環(huán)上引入不同吸電子取代基團(tuán)，如氰基、硝基、甲磺?；龋浣堤腔钚圆煌潭认陆?，且弱于鹵素取代基的GY3。

關(guān)鍵詞 二氫吲哚-3-乙酸類衍生物；降糖活性；合成；構(gòu)效關(guān)系

ABSTRACT OBJECTIVE： To design and synthesize N-aroyl substituted indoline-3-acetic acid derivatives and evaluate their in vitro hypoglycemic activity. METHODS： Using indoline derivative 2-[5-（benzyloxy）-1-（4-chlorobenzoyl）-2-methyl-1H-inclol-3-yl]acetic acid （GY3） as leading compound， 4-（benzyloxy）phenyl hydrazine hydrochloride and methyl 4-oxopentanoate as raw material， 8 kinds of N-aroyl （3-hydroxybenzoyl， 3-cyanobenzoyl， 4-nitrobenzoyl， 4-methylsulfonylbenzoyl， 4-acetamidobenzoyl， 3-acetylaminobenzoyl， isoniacyl and pyridine-2-formyl） substituted indoline-3-acetic acid derivatives were synthesized via 4 steps reactions： Fischer indole cyclization， reduction， amidation and hydrolyzation. The human hepatoma HepG2 cell lines were used to investigate the glucose consumption activity of the target compounds. RESULTS： Totally 8 various N-aroyl substituted indoline-3-acetic acids were synthesized and their structures were confirmed by mass spectrum（MS）， nuclear magnetic resonance 1H-NMR and 13C spectrum. Under the condition of 1.0 μmol/L， the percentage of glucose- promoting consumption of the synthesized compounds on HepG2 cells was 5.4%-9.1%. 2-[（2R， 3S）-5-benzyloxy-2-methyl-1-（4-methylsulfonyl benzoyl）-2，3-dihydro-indole-3-yl] acetic acid showed the best hypoglycemic activity. The percentage of glucose- promoting consumption was （9.1±1.81）%， which was close to that of positive control metformin [（10.58±1.68）%]， but less potent than that of leading compound GY3[（12.15±0.78）%]. CONCLUSIONS： Different electron-withdrawing substituents are introduced into N-aroyl aromatic rings of dihydroindole compounds， such as cyano， nitro， methyl sulfonyl； hypoglycemic activity decreases in varying degrees and is weaker than halogen substituents.

KEYWORDS Indoline-3-acetic acid derivative； Hypoglycemic activity； Synthesis； Structure-activity relationship

糖尿病是由胰島素分泌不足或胰島素抵抗引起的以高血糖為主要表現(xiàn)的一種臨床綜合征。隨著人們生活水平的不斷提高，糖尿病的患病率呈快速上升趨勢(shì)，在全球范圍內(nèi)已成為危害人類健康的第三大慢性病。我國(guó)糖尿病患者高達(dá)1.14億，已經(jīng)成為全球糖尿病疾病負(fù)擔(dān)最重的國(guó)家之一，如何控制糖尿病及其并發(fā)癥已成為迫切需要解決的重要問題[1]。因此，繼續(xù)研發(fā)作用機(jī)制新穎、降糖活性優(yōu)異且安全性高的新型抗2型糖尿病藥物具有重要的意義。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是細(xì)胞內(nèi)重要的能量感受器，在各組織中廣泛分布，可調(diào)節(jié)機(jī)體的能量代謝狀態(tài)。在糖代謝方面，AMPK的激活可以抑制肝葡萄糖生成過量、降低血糖濃度[2-3]。同時(shí)，還可以通過誘導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUT）向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)位以及轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化，從而開啟GLUT基因的表達(dá)來促進(jìn)周圍組織對(duì)葡萄糖的攝取[2]。此外，激活的AMPK還可以改善胰島素抵抗[4]。在脂代謝方面，活化的AMPK磷酸化羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGR），可抑制膽固醇的合成[5]；激活A(yù)MPK也可以通過磷酸化乙酰輔酶A羧化酶（ACC）阻礙乙酰輔酶A向丙二酰輔酶A轉(zhuǎn)變，從而促進(jìn)脂肪酸在線粒體內(nèi)的氧化代謝、抑制脂肪的合成[6]。還有研究表明，一線糖尿病治療藥物二甲雙胍及噻唑烷二酮類（TZDs）胰島素增敏劑均可通過間接激活A(yù)MPK來發(fā)揮降糖作用[7-8]。本課題組前期基于吲哚結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)、合成了多個(gè)系列衍生物，從中篩選出代表化合物2-[5-（芐氧基）-1-（4-氯苯甲酰基）-2-甲基-1H-吲哚-3-基]乙酸（GY3），研究發(fā)現(xiàn)其具有體內(nèi)外降糖活性，且該化合物對(duì)過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）沒有激活作用，因而可避免PPARγ完全激動(dòng)藥相關(guān)的副作用[9]。作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，GY3可通過激活A(yù)MPK信號(hào)通路發(fā)揮降糖作用[10]。但GY3分子代謝不穩(wěn)定，會(huì)發(fā)生N-去苯甲?；瑥亩档推浣堤腔钚訹11]。有研究表明，C-2，3位雙鍵還原類化合物具有較好的體內(nèi)外降糖活性[12]?；贏MPK激動(dòng)藥在糖脂代謝性疾病上巨大的治療潛力，本課題組以GY3為先導(dǎo)化合物，研究以4苯甲氧基苯肼鹽酸鹽及4-氧戊酸甲酯為起始原料，經(jīng)Fischer吲哚合成法關(guān)環(huán)、雙鍵還原、酰胺縮合及水解等4步反應(yīng)，得到8個(gè)反式二氫吲哚-3-乙酸衍生物。期望在豐富先導(dǎo)化合物GY3構(gòu)效關(guān)系的同時(shí)，通過活性篩選發(fā)現(xiàn)降糖活性好、體內(nèi)安全性高的新型吲哚衍生物。GY3與二氫吲哚-3-乙酸類衍生物的結(jié)構(gòu)示意圖見圖1。

1 材料

1.1 儀器

Mercury 400核磁共振（NMR）儀（美國(guó)Varian公司）；ZF-2三用紫外儀（上海安亭儀器廠）；WRX-4顯微熔點(diǎn)儀（上海易測(cè)儀器設(shè)備有限公司）；Xevo G2-XS QTof高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）。

1.2 試劑

4-苯甲氧基苯肼鹽酸鹽和GY3（貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院自制，批號(hào)：20150421、20150315，純度：97%、99.5%）；乙酰丙酸（批號(hào)：GC170160，純度：98%）、氰基硼氫化鈉（批號(hào)：GI060128，純度：95%）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC·HCl，批號(hào)：GI070108，純度：99%）、鹽酸二甲雙胍（批號(hào)：FK200050，純度：98%）均購(gòu)自薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司；N-甲基嗎啉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20101213）；磷酸、氫氧化鈉、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙酸、碳酸氫鈉、無水硫酸鈉、CH3CN、CH3OH及鹽酸等均為分析純。

1.3 細(xì)胞

人肝癌HepG2細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所。

2 方法與結(jié)果

2.1 合成路線

二氫吲哚-3-乙酸類衍生物的合成路線圖見圖2。

2.2 合成步驟及鑒定

2.2.1 5-芐氧基-2-甲基-1H-吲哚-3-乙酸甲酯（化合物4）的合成 于500 mL反應(yīng)瓶中加入4-苯甲氧基苯肼鹽酸鹽（化合物2，10.00 g，40 mmol）、甲醇（150 mL），攪拌下加入4-氧戊酸甲酯（化合物3，5.00 mL，48.80 mmol）、磷酸（6.30 mL，0.12 mol），加熱回流反應(yīng)24 h，薄層色譜（TLC）監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全。冷卻至室溫，減壓蒸干溶劑，殘留物中加入乙酸乙酯（200 mL）、水（100 mL），用2.0 mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8～9，分出有機(jī)層，依次用水（100 mL）、飽和氯化鈉（100 mL）洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾并減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析[石油醚-乙酸乙酯（4 ∶ 1，V/V）]得紅棕色固體9.82 g，收率79.6%。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：7.78（s，1H），7.49（d，J=7.2 Hz，2H），7.39（t，J=7.2 Hz，2H），7.34～7.33（m，1H），7.14（d，J=8.4 Hz，1H），7.09（d，J=2.4 Hz，1H），6.85（dd，J=2.4 Hz，1H），5.12（s，2H），3.66～3.65（m，5H），2.38（s，3H）； 電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）：質(zhì)荷比（m/z）310.1[M+H]+，確認(rèn)為化合物4。

2.2.2 3-[（2R，3S）-2-（5-芐氧基-2-甲基-2，3-二氫-吲哚-3-基）]乙酸甲酯（化合物5）的合成 參考文獻(xiàn)[12]，于50 mL反應(yīng)瓶中加入中間體化合物4（1.50 g，4.85 mmol）、冰醋酸（20 mL），攪拌溶解，于冰浴（0 ℃）下分次加入氰基硼氫化鈉（1.52 g，24.24 mmol），加畢于室溫中反應(yīng)4 h；再加入水（30 mL）淬滅反應(yīng)，蒸去溶劑，殘留物加水（20 mL）、乙酸乙酯（30 mL），用飽和碳酸氫鈉調(diào)pH至9，分出有機(jī)層，水層繼續(xù)用乙酸乙酯（30 mL）萃取。合并有機(jī)層，分別用水（20 mL）、飽和氯化鈉（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉干燥，回收溶劑，得淡黃色油狀物1.48 g，經(jīng)硅膠柱層析[石油醚-乙酸乙酯（3 ∶ 1，V/V）]分離得淡黃色油狀物0.32 g。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：7.43～7.30（m，5H），6.76（d，J=2.4 Hz，1H），6.68（dd，J=8.4 Hz，2.8 Hz，1H），6.53（d，J=8.4 Hz，1H），4.96（s，2H），3.70（s，3H），3.61～3.58（m，1H），3.45～3.23（m，1H），2.62（dd，J=16.0 Hz，7.6 Hz，1H），2.52（dd，J=16.0 Hz，7.6 Hz，1H），1.25（d，J=6.0 Hz，3H）；ESI-MS：m/z 312.1[M+H]+，確認(rèn)為化合物5。

2.2.3 二氫吲哚-3-乙酸類衍生物粗品的合成 取5（0.31 g，1.00 mmol）溶解于乙酸乙酯（5 mL）和乙腈（10 mL）溶液中，再分別加入3-羥基苯甲酸（0.27 g，2.00 mmol）或3-氰基苯甲酸（0.29 g，2.00 mmol）或4-硝基苯甲酸（0.34 g，2.00 mmol）或4-甲磺?；郊姿幔?.40 g，2.00 mmol）或4-乙酰胺基苯甲酸（0.36 g，2.00 mmol）或3-乙酰氨基苯甲酸（0.36 g，2.00 mmol）或異煙酸（0.25 g，2.00 mmol）或2-吡啶甲酸（0.25 g，2.00 mmol），再加入EDC·HCl（0.40 g，2.20 mmol）、N-甲基嗎啉（0.25 mL，2.20 mmol）室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12 h。反應(yīng)液中加入乙酸乙酯（20 mL），分別用1 mol/L鹽酸（10 mL×3次）、飽和碳酸氫鈉（10 mL×3次）、水（10 mL×3次）、飽和氯化鈉（10 mL×3次）洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾并減壓蒸去溶劑，得二氫吲哚-3-乙酸類衍生物粗品。

2.2.4 二氫吲哚-3-乙酸類衍生物的純化 取二氫吲哚-3-乙酸類衍生物粗品（0.81 mmol），溶解于四氫呋喃（9 mL）和甲醇（3 mL）混合溶劑中，于冰鹽浴下加入1 mol/L氫氧化鋰（4.00 mL，4.00 mmol），低溫下攪拌反應(yīng)10 min后，升至室溫再攪拌反應(yīng)3 h，用1 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至3～4，減壓蒸除溶劑，殘留物用乙酸乙酯（20 mL）萃取，有機(jī)層依次用水（10 mL）、飽和氯化鈉（10 mL）洗滌，無硫酸鈉干燥，抽濾并減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析[石油醚-乙酸乙酯（1 ∶ 1，V/V）]分離得目標(biāo)化合物二氫吲哚-3-乙酸類衍生物。制得的8個(gè)二氫吲哚-3-乙酸類衍生物分別為①1a。2-[（2R，3S）-5-芐氧基-1-（3-羥基苯甲?；?2-甲基-2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；②1b。2-[（2R，3S）-1-（3-氰基苯甲?；?5-芐氧基-2-甲基-2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；③1c。2-[（2R，3S）-5-芐氧基-2-甲基-1-（4-硝基苯甲?；?2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；④1d。2-[（2R，3S）-5-芐氧基-2-甲基-1-（4-甲磺酰基苯甲?；?2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；⑤1e。2-[（2R，3S）-1-（4-乙酰氨基苯甲酰基）-5-芐氧基-2-甲基-2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；⑥1f。2-[（2R，3S）-1-（3-乙酰氨基苯甲?；?5-芐氧基-2-甲基-2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；⑦1g。2-[（2R，3S）-5-芐氧基-2-甲基-1-（吡啶-4-甲?；?2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸；⑧1h。2-[（2R，3S）-5-芐氧基-2-甲基-1-（吡啶-2-甲?；?2，3-二氫-吲哚-3-基]乙酸。

①1a，黃色固體，收率：68.3%。熔點(diǎn)（mp）：85～86 ℃；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：7.34～7.26（m，6H），7.17（t，J=7.6 Hz，1H），6.92～6.79（m，5H），5.07（s，2H），3.09（t，J=6.8 Hz，1H），2.62～2.57（m，3H），1.25～1.19（m，3H）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ（ppm）：175.8，171.5，159.7，156.6，141.8，136.8，135.1，133.8，128.7，128.5，128.2，127.8，127.7，127.2，118.6，114.1，113.1，112.1，70.5，60.6，39.7，21.1，14.2； ESI-MS：m/z 440.1[M+Na]+，確定為1a。

②1b，白色固體，收率：37.7%。mp：146～149 ℃； 1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ（ppm）：8.15～8.08（m，1H），7.86～7.66（m，4H），7.33～7.25（m，5H），6.92（t，J=2.4 Hz，2H），5.04（s，2H），4.08～4.04（m，1H），2.77（d，J=5.6 Hz，1H），2.35～2.29（m，2H），1.30～1.02（m，3H）； 13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ（ppm）：180.1，175.7，165.9，156.4，137.2，133.3，129.9，129.8，129.0，128.1，127.5，127.3，117.6，117.5，114.3，113.6，112.9，112.8，70.0，63.2，51.6，39.0，34.5，21.7； ESI-MS：m/z 449.1[M+Na]+，確認(rèn)為1b。

③1c，黃色固體，收率：86.3%。mp：203～206 ℃； 1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：12.06（s，1H），8.33（d，J=8.4 Hz，2H），8.06～7.76（m，3H），7.39～7.33（m，5H），7.09～7.03（m，2H），5.08（s，2H），4.01（dd，J=7.2，14.0 Hz，1H），3.11～3.03（m，1H），2.51（d，J=14.0 Hz，2H），1.19～1.16（m，3H）； 13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：173.4，173.0，155.8，148.1，142.9，137.0，135.5，134.6，128.5，127.6，126.8，123.9，118.1，113.2，112.1，111.1，69.6，60.3，31.8，20.7，14.1； ESI-MS：m/z 469.1[M+Na]+，確認(rèn)為1c。

④1d，白色固體，收率：39.4%。mp：218～220 ℃； 1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：8.12～8.06（m，2H），7.76（s，2H），7.49～7.34（m，7H），6.97～6.87（m，1H），5.08（s，2H），4.49（d，J=5.6 Hz，1H），3.99～3.98（m，1H），3.17（s，3H），2.97～2.93（m，1H），2.67～2.59（m，1H），1.27～0.98（m，3H）； 13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：177.9，177.8，153.1，141.0，139.7，132.4，131.8，131.5，131.2，130.8，129.6，122.8，116.5，111.4，110.3，107.1，74.2，65.2，42.8，35.8，24.2，17.2； ESI-MS：m/z 502.1[M+Na]+，確認(rèn)為1d。

⑤1e，白色固體，收率：72.3%。mp：212～213 ℃； 1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ（ppm）：7.69（d，J=7.6 Hz，2H），7.48～7.40（m，5H），7.35～7.27（m，4H），7.01（d，J=2.8 Hz，1H），6.91～6.72（m，1H），5.03（s，2H），3.96～3.92（m，1H），3.18（t，J=7.2 Hz，1H），2.69～2.53（m，2H），2.15（s，3H），1.28～1.16（m，3H）； 13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ（ppm）：175.7，175.1，171.8，157.8，142.0，140.2，138.6，128.9，128.6，128.1，123.6，120.6，115.5，114.1，113.4，112.3，111.0，71.4，64.9，62.7，41.4，32.9，23.9；ESI-MS：m/z 481.1[M+Na]+，確認(rèn)為1e。

⑥1f，白色固體，收率：45.1%。mp：131～133 ℃。1H-NMR（400 MHz，CD3OD+CDCl3）δ（ppm）：8.09（d，J=9.2 Hz，1H），7.71～7.59（m，3H），7.44～7.30（m，6H），7.28～7.24（m，1H），6.89～6.78（m，2H），4.97（s，2H），3.32～3.28（m，1H），3.14（t，J=7.2 Hz，1H），2.54（d，J=6.0 Hz，2H），2.08（s，3H），1.20～1.10（m，3H）； 13C-NMR（100 MHz，CD3OD+CDCl3）δ（ppm）：177.8，174.4，141.2，141.0，140.8，133.7，133.3，132.5，132.4，131.9，131.5，131.4，129.1，126.3，126.1，122.1，118.0，116.2，111.0，74.4，67.4，48.4，38.1，27.4，13.8；ESI-MS： m/z 459.1 [M+H]+，確認(rèn)為1f。

⑦1g，白色固體，收率：55.3%。mp：163～165 ℃； 1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：8.90（d，J=4.5 Hz，2H），7.82～7.78（m，2H），7.69～7.65（m，2H），7.51～7.46（m，1H），7.48～7.31（m，5H），6.85（m，1H），6.82（m，1H），5.06（s，2H），4.69～4.67（m，1H），3.22（m，1H），3.11～3.04（m，1H），2.59～2.56（m，1H），1.07（d，J=6.4 Hz，3H）； 13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ（ppm）：176.5，168.0，150.1，143.6，135.1，134.8，134.2，129.5，127.1，125.4，125.0，118.5，115.6，110.8，72.9，65.6，43.8，36.5，20.8；ESI-MS：m/z 425.1[M+Na]+，確認(rèn)為1g。

⑧1h，白色固體，收率：48.0%。mp：166～169 ℃； 1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：8.94（d，J=4.4 Hz，1H），8.32（d，J=8.8 Hz，1H），7.93～7.76（m，1H），7.77（d，J=7.6 Hz，1H），7.50～7.47（m，1H），7.41～7.29（m，5H），6.91（dd，J=2.4，8.8 Hz，1H），6.85（d，J=2.4 Hz，1H），5.05（s，2H），4.67～4.65（m，1H），3.23（d，J=9.6 Hz，1H），3.02～2.94（m，1H），2.57～2.52（m，1H），1.06（d，J=6.4 Hz，3H）； 13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ（ppm）：174.4，165.2，156.5，153.5，147.5，138.9，136.9，135.2，128.1，127.6，127.5，125.4，124.5，119.2，114.1，111.6，70.3，62.0，44.8，39.3，21.4； ESI-MS：m/z 425.1[M+Na]+，確認(rèn)為1h。

2.3 體外降糖活性測(cè)試

本研究以HepG2細(xì)胞作為模型，根據(jù)受試化合物的促葡萄糖消耗百分率為指標(biāo)來評(píng)價(jià)降糖活性[13]。試驗(yàn)設(shè)溶劑對(duì)照組（二甲基亞砜）、陽性對(duì)照組（二甲雙胍，1 μmol/L）和不同受試化合物組。二甲雙胍用二甲基亞砜配制成0.2 mol/L的貯備液，受試化合物用二甲基亞砜配制成100 mmol/L或10 mmol/L，臨用前用二甲基亞砜等比稀釋成1.0 μmol/L。HepG2細(xì)胞用含10%胎牛血清的高糖型DMEM培養(yǎng)基于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，隔天更換新鮮培養(yǎng)液，2～3 d傳代1次。試驗(yàn)時(shí)，HepG2細(xì)胞接種于96孔板，并設(shè)無細(xì)胞空白對(duì)照組。待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%～80%融合度，棄去原培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗2遍，換上含0.2%牛血清白蛋白、1 nmol/L胰島素的無血清1640培養(yǎng)液，并進(jìn)行分組加藥。通過葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法（GOD-POD法）測(cè)定HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗量，計(jì)算促葡萄糖消耗百分率（%）=（溶劑對(duì)照組葡萄糖含量-加藥組葡萄糖含量）/溶劑對(duì)照組葡萄糖含量×100%。不同化合物在HepG2細(xì)胞上的促葡萄糖消耗百分率見表1。

從表1中結(jié)果可以看出，N-芳酰基取代的芳環(huán)上吸電子基團(tuán)取代后降糖活性總體上均小于鹵素取代（GY3）。其中，對(duì)位吸電子基團(tuán)取代活性略強(qiáng)于間位吸電子基團(tuán)取代（1c vs. 1b，1e vs. 1f），強(qiáng)吸電子基團(tuán)甲磺?；〈衔?d的促糖消耗活性最好，但仍弱于先導(dǎo)化合物GY3及陽性對(duì)照藥物二甲雙胍。