注射用伏立康唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法探究

鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 河南省兒童醫(yī)院 鄭州兒童醫(yī)院（450000）許哲

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 樣品 選取我院采購(gòu)的不同生產(chǎn)廠家、不同生產(chǎn)批次的注射用伏立康唑共8種（商品名：輝瑞威凡，Pfizer Limited生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040662、H20090717、針劑，規(guī)格：200mg/支；珠海億邦制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20058964、H20052296針劑，規(guī)格：50mg/瓶；商品名：迪爾達(dá)寧，晉城海斯制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20160105、H200058963、H20052298針劑，規(guī)格：50mg/瓶；麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20064493針劑，規(guī)格：50mg/瓶）。

選取我院采購(gòu)的鱟試劑2種，美洲鱟試劑（Limulus Amebocyte Lysate，LAL），美國(guó)CR恩度斯弗公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)1606072靈敏度為0.5EU/mL；LALII，廈門市鱟試劑廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)1602024靈敏度0.5EU/mL。選取我院采購(gòu)的BET水（廈門市鱟試劑廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)1602025規(guī)格：每瓶50ml）。選取我院采購(gòu)的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院產(chǎn)品，生產(chǎn)批號(hào)150601-201174，規(guī)格160EU/支）。

1.1.2 檢驗(yàn)儀器 恒溫水浴鍋（北京斯普特科技有限公司生產(chǎn)，型號(hào)：HHS-21-4）；試管恒溫儀（北京京晶科技有限公司，型號(hào)：TAL-40D）；旋渦混合器（德國(guó)IKA公司生產(chǎn)，型號(hào)：VORTEX2）；高溫烘箱（上海喆圖科學(xué)儀器有限公司型號(hào)：THG-9249A）等。實(shí)驗(yàn)使用的所有用具均高溫消毒。

附表 復(fù)核實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2 檢驗(yàn)方法

1.2.1 確定注射用伏立康唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的限值 由臨床用量及靜脈滴注時(shí)間可知細(xì)菌內(nèi)毒素總量限值為1.68EU/mg，但根據(jù)相關(guān)要求[1]，應(yīng)將限值下調(diào)為計(jì)算值的1/3～1/2，即其限值應(yīng)為0.76EU/mg。

1.2.2 復(fù)核本次研究選取的鱟試劑的靈敏度 按2015年版藥典通則部分可知細(xì)菌內(nèi)毒素檢查凝膠法[2]。

1.2.3 注射用伏立康唑干擾實(shí)驗(yàn) 首先對(duì)其進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。然后再進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)：將樣品全部稀釋為0.66mg/mL作為供試品A；將供試品A與BET水把內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為含內(nèi)毒素2、1、0.5、0.25λ的溶液B、C；再取BET作為陰性對(duì)照組D；溶液配好后再按照最新版藥典的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查凝膠法進(jìn)行檢驗(yàn)。做4組平行的B溶液和2組平行的A、C、D溶液。

1.2.4 按照擬定的BET標(biāo)準(zhǔn)檢查樣品 按最新版中國(guó)藥典通則-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查凝膠限度實(shí)驗(yàn)法。

2 結(jié)果

2.1 兩種鱟試劑的靈敏度復(fù)核符合要求（λ都為0.5～2）。見(jiàn)附表。

2.2 干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 配制的A、D溶液經(jīng)試驗(yàn)均為陰性結(jié)果，B、C溶液經(jīng)試驗(yàn)證明均符合鱟試劑靈敏度復(fù)核要求，不僅說(shuō)明實(shí)驗(yàn)有效，而且證明注射用伏立康唑稀釋至0.66mg/mL后，再使用0.25EU/mL的鱟試劑進(jìn)行BET，無(wú)干擾作用。

2.3 按BET標(biāo)準(zhǔn)檢查樣品結(jié)果 由上述結(jié)果可知伏立康唑細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)該＜0.76EU/mg。采用鱟試劑對(duì)其進(jìn)行檢查，確定本次研究使用的8個(gè)樣品均符合要求。

3 討論

伏立康唑是臨床上經(jīng)常使用的一種抗真菌藥物。臨床使用的伏立康唑有多種藥劑形式，例如：膠囊、片劑、注射劑等。目前，我們此次研究的伏立康唑?yàn)樽⑸鋭瑑?yōu)點(diǎn)為藥品作用迅速，準(zhǔn)確，但如何保證注射用伏立康唑的安全使用就成為我們必須要注重的問(wèn)題。研究表明，細(xì)菌內(nèi)毒素已成為多種并發(fā)癥的致病原因。主要原因?yàn)榧?xì)菌內(nèi)毒素可以進(jìn)入血液循環(huán)，從而引起機(jī)體的病理反應(yīng)，即內(nèi)毒素血癥。但由于其不能得到及時(shí)有效的治療，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致微循環(huán)障礙或多器官功能衰竭等，此病的死亡率逐年上升。因此，嚴(yán)格把控注射用藥的細(xì)菌內(nèi)毒素含量、提高用藥的安全性是極為重要的。通過(guò)對(duì)此研究的結(jié)果資料分析顯示，采用2015年版《中華人民共和國(guó)藥典：四部》通則規(guī)定的方法對(duì)注射用伏立康唑細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明稀釋至0.66mg/mL的樣品對(duì)鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)無(wú)干擾，且限值為0.76EU/mg的鱟試劑都可以對(duì)其進(jìn)行BET。

綜上所述，注射用伏立康唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查應(yīng)嚴(yán)格按要求確定限值，確保其小于0.76EU/mg。