芎芍膠囊對動脈粥樣硬化模型兔血脂和超敏C反應(yīng)蛋白的影響

動脈粥樣硬化(AS)是動脈硬化血管病中最常見、最重要的一種，其特點是動脈管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小，由于在動脈內(nèi)膜上積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣，因此稱為AS。目前對于AS的發(fā)病機制研究僅處在假說或推測水平上，對本病發(fā)病機制目前還不十分明確，有多種學說從不同角度來闡述，包括脂質(zhì)浸潤學說、血栓形成學說、平滑肌細胞克隆學說、炎癥學說等。近年來，多數(shù)學者支持炎癥學說，炎癥學說認為AS是一種慢性炎癥性疾病，從AS斑塊形成到斑塊破裂，以致血栓形成的各個階段，都有不少炎癥細胞和炎癥介質(zhì)的參與[1-4]。此外豐富的證據(jù)表明血脂異常亦是AS的危險因素[5-6]，強化降脂治療可延緩其發(fā)生和發(fā)展，降低心腦血管病的發(fā)生率和死亡率。然而在接受他汀類藥物治療的病人中，仍有部分病人發(fā)生急性冠狀動脈事件[7-8]，這提示AS是一個多因素參與和調(diào)控的復雜病理過程。中醫(yī)學以中醫(yī)理論為指導，從宏觀著手，整體施治，綜合調(diào)整，理論上可以從多角度、多層次出發(fā)防治AS，更好地提高療效。中醫(yī)學無AS病名，根據(jù)發(fā)展到中晚期的表現(xiàn)和病位不同涉及頭痛、眩暈、胸痹、真心痛、中風等病癥。雖然中醫(yī)對于AS的病因病機還沒有形成共識，但是本虛標實，標實為瘀、痰的觀點已基本達成一致。血瘀的病機貫穿AS整個過程，中醫(yī)活血化瘀療法正是針對這種血瘀證而設(shè)立的。以往的研究證實，活血化瘀藥(芎芍膠囊)能夠降脂、抑制平滑肌細胞(SMC)增殖、防止AS血管重構(gòu)，抗AS作用確切[9-14]。本實驗動物造模與給藥同時進行，從防治的角度出發(fā)，觀察芎芍膠囊對AS兔血脂及超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 純種新西蘭大耳兔60只，一級，雄性，2月齡，體重1.9～2.7(2.275±0.155)kg，由北京協(xié)和醫(yī)院提供。實驗飼養(yǎng)地選為符合二級動物飼養(yǎng)標準的中國中醫(yī)科學院基礎(chǔ)研究所實驗動物中心，中央送風，集中控溫、控濕，室溫恒定22 ℃，濕度為50%～60%，明暗周期12 h(07：00～19：00)，配以沖水式飼料籠架、自動給水器。兔籠、籠架均經(jīng)高壓消毒。兔自由進水，定時定量投喂飼料，實驗正式開始前先予普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)9 d。

1.2 實驗藥物及飼料 芎芍膠囊由中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院制劑廠提供，將川芎和赤芍按2∶1配比煎煮濃縮制成顆粒粉劑，每粒膠囊含生藥川芎2 g、赤芍1 g，生產(chǎn)批號20121126；辛伐他汀由杭州默沙東公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號120544；基礎(chǔ)飼料、高脂飼料由北京華阜康生物有限公司生產(chǎn)，普通飼料質(zhì)量合格證明號0306258，生產(chǎn)批號為20130107；含藥飼料及第1批高脂飼料質(zhì)量合格證明號0306257，生產(chǎn)批號為20130107；第2批高脂飼料質(zhì)量合格證明號0309288，生產(chǎn)批號為20130219。高脂飼料前2周的配方為1%膽固醇+7.5%蛋黃粉+5%豬油+86.5%基礎(chǔ)飼料，為增加AS造模效果，從第3周開始配方調(diào)整為1%膽固醇+15%蛋黃粉+5%豬油+79%基礎(chǔ)飼料。

1.3 主要實驗儀器 全自動生化分析儀RA-100型，德國Sigma 3K15型離心機。

1.4 造模及干預(yù)方法 根據(jù)國內(nèi)外文獻報道[15-16]采用單純高脂飼料喂養(yǎng)建立兔AS模型，以新西蘭大耳兔60只，采用隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、芎芍膠囊小劑量組(小劑量組)、芎芍膠囊中劑量組(中劑量組)、芎芍膠囊大劑量組(大劑量組)、辛伐他汀組，每組10只。根據(jù)《臨床藥理實驗》中的人-兔用藥劑量換算公式D兔=R人兔×D人，查表R人兔=3.08(標準體重人以60 kg計，兔以1.8 kg計)，再根據(jù)S=W實際/W標準查表得到相應(yīng)校正系數(shù)計算兔用藥劑量。芎芍膠囊人常用量為每次2粒、每日3次，兔小劑量為等量，中、大劑量分別為2倍及4倍常用量，折算為兔用量小劑量組為0.3 g/(kg·d)即川芎0.6 g/(kg·d)+赤芍0.3 g/(kg·d)，中劑量組及大劑量組以2倍劑量遞增。對照組予普通飼料150 g/d，模型組及各用藥組予高脂飼料150 g/d，從實驗開始持續(xù)喂養(yǎng)14周，每次投喂食物均有專人負責并做記錄。

1.5 檢測指標及方法 每日觀察兔飼喂及給藥期間的基本情況并做記錄。每周稱重1次，每天記錄飼喂具體情況，包括飼喂具體飼料量、飼喂藥物、其他輔助飼料。每天記錄活動情況、毛色情況、疾病情況、目睛情況。實驗開始前和實驗第6周、12周及14周在空腹禁食8 h，不禁水后，從耳緣靜脈取血，離心機分離血清，采用全自動生化儀測定總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、載脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ)、載脂蛋白B100(ApoB100)、hs-CRP。

2 結(jié) 果

2.1 動物一般情況 實驗開始除對照組外，其他各組兔均存在不同程度的食欲不振、飲食量減少、腹瀉。實驗期間除對照組外，其他各組在毛色、精神、飲食、二便方面差異無統(tǒng)計學意義。兔共死亡8只，對照組2只分別因腹脹脫肛、腹瀉死亡，小劑量組4只分別因肺淤血、腸梗阻、腹瀉、發(fā)熱死亡，中劑量組1只死于腹瀉，辛伐他汀組1只死于腸梗阻。兔血標本出現(xiàn)溶血11例，分別為對照組3例，模型組1例，小劑量組2例，中劑量組1例，大劑量組3例，辛伐他汀組1例。

2.2 各組血脂指標比較(見表1)

2.3 各組hs-CRP比較(見表2)

表1 各組血脂指標比較(±s) mmol/L

與對照組同時間比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組同時間比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與大劑量組同時間比較，5)P<0.05

表2 各組hs-CRP比較(±s) mmol/L

與對照組同時間比較， 1)P<0.05；與模型組同時間比較，2)P<0.05，3)P<0.01

3 討 論

在AS發(fā)病中，血脂異常被公認為是主要危險因素之一，現(xiàn)已知血清TC、TG、LDL、ApoB100水平與AS形成呈正相關(guān)，HDL、ApoAⅠ水平與AS形成呈負相關(guān)[15]，尤其是高TG、高LDL、低HDL被稱作是AS的脂質(zhì)三聯(lián)征，因此調(diào)節(jié)血脂代謝已成為防治AS的一個重要方面。本研究結(jié)果顯示，各用藥組6周及12周血脂指標與模型組比較未見明顯變化；14周時，各用藥組HDL與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義，小劑量組、中劑量組、辛伐他汀組ApoAⅠ、TC、LDL較模型組降低(P<0.05或P<0.01)，小劑量組、中劑量組TC低于大劑量組(P<0.05)，中劑量組、辛伐他汀組LDL低于大劑量組(P<0.05)，各用藥組ApoB100較模型組下降(P<0.01)，說明芎芍膠囊可能通過調(diào)節(jié)TC、LDL、ApoB100發(fā)揮抗AS作用，且芎芍膠囊小劑量(常用量)即能發(fā)揮療效，與辛伐他汀組比較差異無統(tǒng)計學意義，芎芍膠囊中劑量及大劑量未能進一步降低血脂水平。此外發(fā)現(xiàn)芎芍膠囊需要連續(xù)服用藥物較長時間(至少14周)才能發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂、抗AS作用，這與既往的研究結(jié)果不符[9]，可能與AS造模方法不同有關(guān)。本實驗選用的是經(jīng)典的單純高脂飼料喂養(yǎng)AS造模，而既往相關(guān)類似實驗采取的是內(nèi)膜損傷聯(lián)合高脂飼料造模。相比單純高脂飼料AS造模，人為內(nèi)膜受損則可以加快AS形成，從而節(jié)省AS造模所需要的時間[17]。單純高脂飲食雖能建立兔AS模型[16,18]，但是此法造模周期過長(至少8周)，且兔抵抗力差，易導致兔繼發(fā)胃腸道感染、腸梗阻等死亡，從而影響實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定性。此外有研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食在誘發(fā)兔動脈粥樣硬化的同時，其肝臟呈現(xiàn)明顯的脂肪性肝炎樣改變，而高脂飲食誘導的肝臟炎癥反應(yīng)是否會促進AS發(fā)生和發(fā)展也有待進一步研究探討[19]。

炎癥貫穿了AS的發(fā)生、發(fā)展過程，從AS起始即脂紋現(xiàn)象到斑塊形成乃至臨床事件的各個階段，都有不少炎癥細胞和炎癥介質(zhì)的參與，如C反應(yīng)蛋白(CRP)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子、P-選擇素、細胞間黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶等。在此基礎(chǔ)上的大量研究發(fā)現(xiàn)降低炎癥標志物水平可抑制AS的發(fā)生發(fā)展[20]，這為臨床從抗炎癥角度治療AS提供了理論依據(jù)及新思路。從本實驗結(jié)果來看，14周時各用藥組hs-CRP較模型組明顯下降，各用藥組之間比較差異無統(tǒng)計學意義，說明芎芍膠囊小劑量(常用量)即可通過降低炎癥因子發(fā)揮抗AS作用，而中、大劑量芎芍膠囊未能進一步降低hs-CRP，可能存在天花板效應(yīng)。

綜上所述，芎芍膠囊抗AS作用確切，可能通過調(diào)節(jié)血脂、抗炎等干預(yù)和防治AS。