白芥子散及其拆方對(duì)過(guò)敏性哮喘大鼠神經(jīng)肽的影響

王艷宏， 樊 建， 趙娟萍， 李洪晶， 關(guān) 楓， 馮宇飛， 楊志欣

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

哮喘是一種以肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥和可變性呼氣流量限制為特征的異質(zhì)性疾?。?］，給人們工作、生活、家庭經(jīng)濟(jì)等各方面帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。根據(jù)2013 年哮喘認(rèn)知和管理（AIM） 調(diào)查顯示，中國(guó)哮喘急性發(fā)作比例居亞太地區(qū)首位（67%）［2］，兒童患病率高于成年人，并呈逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)［3］。

目前，中藥經(jīng)皮給藥治療哮喘的方藥大多源于清朝張璐所著《張氏醫(yī)通》 中的白芥子散，其制法為“方用白芥子一兩，延胡索一兩，甘遂和細(xì)辛各半兩，共為細(xì)末，姜汁調(diào)涂肺俞、膏肓與百勞等穴”。2009 年中國(guó)針灸學(xué)會(huì)制定的穴位貼敷臨床應(yīng)用指導(dǎo)意見(jiàn)草案指出： “穴位貼敷以白芥子、延胡索、甘遂、細(xì)辛和生姜為基本處方，現(xiàn)代醫(yī)家可結(jié)合既往臨床經(jīng)驗(yàn)、地域特點(diǎn)等在此基礎(chǔ)上進(jìn)行加減”［4］。該方是中藥穴位貼敷治療哮喘最基礎(chǔ)、最具代表性的方劑之一，臨床上已得到廣泛認(rèn)可，但目前尚無(wú)藥物對(duì)腧穴作用方面機(jī)制的研究。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇P 物質(zhì)（SP）、 血 管 活 性 腸 肽 （VIP）、 降 鈣 素 基 因 相 關(guān) 肽（CGRP） 等與腧穴作用相關(guān)的神經(jīng)肽形態(tài)和數(shù)量變化為指標(biāo)，探討白芥子散及其拆方穴位貼敷對(duì)大鼠施藥腧穴皮膚的作用，以及與肺組織作用的相關(guān)性，以期為開展相關(guān)研究提供全新視角。

1 材料

1.1 試藥 白芥子、延胡索、甘遂、細(xì)辛均購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，生姜購(gòu)于云南匯軒生物科技有限公司，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院孫慧峰教授鑒定為正品，均符合2015 年版《中國(guó)藥典》 一部的相關(guān)要求。妥洛特羅貼劑購(gòu)于日東制藥有限公司。IgE 酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（A04237）， 兔 抗 大 鼠 SP、 VIP、 CGRP 多 克 隆 抗 體（BA3678、PB1017、PB0967）， 多聚體抗兔免疫球蛋白（IgG） -辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、DAB 顯色劑均購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。卵清蛋白（OVA） 購(gòu)于上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.2 儀器 超薄切片機(jī)（RM2245 型，德國(guó)Leica 公司）；低溫高速離心機(jī)（3-18R 型，美國(guó)Tomos 公司）；超聲霧化儀（402B 型，上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司）；光學(xué)顯微鏡（CX441 型，日本Olympus 公司）；病理圖像分析系統(tǒng)（美國(guó)moticam3000 型， 美 國(guó)Moticam 公 司）； 恒 溫 水 浴 鍋（HH-S8 型， 金 壇 華 龍 實(shí) 驗(yàn) 儀 器 廠）； 多 功 能 酶 標(biāo) 儀（DNM-9602 型，北京普朗新技術(shù)有限公司）。

1.3 動(dòng)物 SD 大鼠，雄性，體質(zhì)量（160±10）g，購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （遼）2015-0001，合格證號(hào)211002300016031，在SPF 級(jí)屏障動(dòng)物房［室溫（20±2）℃；相對(duì)濕度55%～70%］ 中飼養(yǎng)1 周。

2 方法

2.1 白芥子散及其拆方提取物制備 按照處方配比（白芥子∶延胡索∶細(xì)辛∶甘遂∶生姜＝2 ∶2 ∶1 ∶1 ∶6） 并參考文獻(xiàn)［5-8］ （稍作改動(dòng)） 進(jìn)行制備。各稱取處方量白芥子、延胡索、甘遂，粉碎成粗粉后分別加入10 倍量80%乙醇浸泡12 h，75 ℃回流提取3 次，每次2 h，過(guò)濾后合并藥液，減壓濃縮至1.3 g／mL，即得白芥子、延胡索、甘遂提取物。根據(jù)2015 年版《中國(guó)藥典》 一部附錄XD“揮發(fā)油測(cè)定法” 中的甲法，取處方量細(xì)辛置于圓底燒瓶中，加12倍量蒸餾水與玻璃珠數(shù)粒，浸泡2 h 后加熱回流提取6 h，即得細(xì)辛揮發(fā)油。根據(jù)2015 年版《中國(guó)藥典》 “姜汁” 制法，生姜洗凈、晾干表面水分后切成碎塊，榨汁，過(guò)120目篩，姜渣加入適量水，攪拌均勻后2 層紗布濾過(guò)，使姜汁體積與質(zhì)量的比例為1 ∶1，再取姜汁適量，加1.5 倍量石油醚萃取3 次，每次2 h，分液后合并藥液，減壓蒸餾，即得生姜揮發(fā)油。稱取處方量白芥子、 延胡索、 甘遂（2 ∶2 ∶1），粉碎成粗粉后加入10 倍量80%乙醇浸泡12 h，75 ℃回流提取3 次，每次2 h，合并藥液，減壓濃縮至1.3 g／mL。濃縮液及細(xì)辛、生姜揮發(fā)油在45 ℃水浴中以原處方比例均勻混合，即得白芥子散提取物。

2.2 分組 80 只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性藥物組、白芥子散穴位組、白芥子散非穴位組、白芥子穴位組、延胡索穴位組、甘遂穴位組、細(xì)辛穴位組和生姜穴位組，每組8 只。

2.3 模型建立［9］第1 天，大鼠腹腔注射新鮮配制的含10%卵清蛋白生理鹽水溶液（5 mL／kg） 致敏，第8 天同法進(jìn)行第2 次致敏，第15 天以新鮮配制的含1%卵清蛋白生理鹽水溶液 （中速霧化量） 進(jìn)行霧化激發(fā)哮喘，每次7 min，1 次／d，連續(xù)霧化14 d。同時(shí)，觀察大鼠是否出現(xiàn)撓鼻、打噴嚏、腹式呼吸、呼吸急促、點(diǎn)頭呼吸，甚至腹部痙攣等呼吸困難癥狀。正常組大鼠以生理鹽水代替，其余操作同模型組。

2.4 藥物貼敷穴位選取 大鼠施藥穴位以中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)分會(huì)制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》［10］為依據(jù)，與哮喘相關(guān)的穴位選雙側(cè)肺俞穴，非穴位為腧穴位旁開1 cm處。肺俞穴為第3 胸椎下兩旁肋間，左右側(cè)各1 穴。

2.5 給藥 “2.1” 項(xiàng)下各提取物和揮發(fā)油均與適量2%羧甲基纖維素鈉 （CMC-Na） 混合均勻后給藥，面積約1.5 cm×1.5 cm，厚約0.2 cm，陽(yáng)性藥物組大鼠給予妥洛特羅貼劑（面積約1.5 cm×1.5 cm），正常組、模型組大鼠給予2%CMC-Na，連續(xù)10 d，1 次／d，每次6 h。

2.6 樣本采集 末次給藥后24 h 內(nèi)取樣。①稱定各組大鼠體質(zhì)量并記錄，腹腔注射7%水合氯醛麻醉；②打開腹腔，用不加抗凝劑的一次性真空采血管腹主動(dòng)脈取血5 mL，血樣靜置45 min 后4 ℃、3 000 r／min 離心15 min，吸取上清液，置于-80 ℃冰箱中保存；③打開胸腔，暴露并結(jié)扎總支氣管及分支氣管，用含有生理鹽水的輸液器灌洗左肺，并抽取支氣管肺泡灌洗液（BALF），重復(fù)3 次，合并灌洗液，置于4 ℃冰箱中保存；④迅速取出右肺組織，生理鹽水洗凈，置于4%甲醛中固定；⑤取施藥局部組織皮膚，生理鹽水洗凈，置于4%甲醛溶液中固定。

2.7 指標(biāo)檢測(cè)

2.7.1 哮喘潛伏期一般狀態(tài) 記錄各組大鼠活動(dòng)情況、毛發(fā)、舌質(zhì)口唇、呼吸等一般狀態(tài)變化。

2.7.2 大鼠BALF 中肥大細(xì)胞 BALF 4 ℃、2 500 r／min離心10 min 后，吸棄上清液，下層沉淀物加入2%Hank’s溶液，制成細(xì)胞懸浮液，吹于玻璃片上，中性紅染色1 min后加蓋玻片，置于37 ℃恒溫箱中溫育3 min，高倍鏡下計(jì)數(shù)6 個(gè)以上視野的平均肥大細(xì)胞數(shù)目，并觀察細(xì)胞形態(tài)及其脫顆粒情況。

2.7.3 血清IgE 水平 取低溫凍存的血清，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA） 法檢測(cè)IgE 水平，所有操作步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

2.7.4 施藥局部皮膚及肺組織SP、VIP、CGRP 表達(dá) 取4%甲醛固定的大鼠施藥局部皮膚和肺組織，石蠟包埋切片后采用免疫組化PV 二步法檢測(cè)SP、VIP、CGRP 表達(dá)，所有操作步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行：①切片常規(guī)脫蠟至水；②3% H2O2中溫育10 min，PBS 緩沖液洗滌3 次，每次2 min；③切片放入枸椽酸鹽緩沖液（pH＝6），微波爐中修復(fù)2 次，每次5 min，每次間隔10 min；④滴加一抗，37 ℃溫育60 min，PBS 緩沖液洗滌3 次，每次2 min；⑤滴加二抗，37 ℃溫育20 min，PBS 緩沖液洗滌3 次，每次2 min；⑥D(zhuǎn)AB 顯色5 ～10 min；⑦蒸餾水充分洗滌后蘇木素復(fù)染1 min；⑧常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。然后，Motic3000 顯微攝影系統(tǒng)于400 倍下攝片，Image-pro plus 6.0 病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行定量分析，以積分光密度（IOD） 代表基因和蛋白相對(duì)表達(dá)量（IOD ＝陽(yáng)性面積×平均光密度），每組隨機(jī)分析8 個(gè)高倍鏡視野，取其平均值代表該圖片相對(duì)表達(dá)量。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 20.0 Statistics 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)或單因素方差分析。以P＜0.05 或P＜0.01，表示顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 哮喘潛伏期大鼠一般狀態(tài) 正常組大鼠活動(dòng)狀態(tài)正常，舌質(zhì)口唇俱佳，毛色光潔，呼吸平穩(wěn)；模型組大鼠行動(dòng)遲滯，舌質(zhì)口唇發(fā)紫，毛發(fā)枯黃，出現(xiàn)打噴嚏、呼吸急促，并伴有喘鳴音等癥狀；陽(yáng)性藥物組、白芥子散穴位組大鼠精神狀態(tài)顯著改善，反應(yīng)靈敏，未出現(xiàn)呼吸急促、呼吸困難等癥狀；白芥子散非穴位組大鼠反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)枯黃，伴有腹式呼吸等癥狀；白芥子穴位組、細(xì)辛穴位組、生姜穴位組大鼠毛色略光潔，呼吸較平穩(wěn)；甘遂穴位組大鼠呼吸稍急促，輕微紫紺，呼吸困難癥狀減輕；延胡索穴位組大鼠毛發(fā)枯黃，出現(xiàn)撓鼻、呼吸急促，并伴有喘鳴音等癥狀。

3.2 白芥子散及其拆方對(duì)肥大細(xì)胞的影響 表1 顯示，與正常組比較，模型組肥大細(xì)胞數(shù)顯著增多（P＜0.01），約有半數(shù)發(fā)生脫顆?，F(xiàn)象；與模型組比較，白芥子散及其各拆方穴位組上述現(xiàn)象顯著改善（P＜0.05）；與白芥子散穴位組比較，白芥子散非穴位組、延胡索穴位組、甘遂穴位組肥大細(xì)胞數(shù)顯著增多（P＜0.05，P＜0.01），而且脫顆?，F(xiàn)象更嚴(yán)重。

表1 白芥子散及其拆方對(duì)肥大細(xì)胞的影響n＝8）

表1 白芥子散及其拆方對(duì)肥大細(xì)胞的影響n＝8）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃＃P＜0.01；與白芥子散穴位組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組別 肥大細(xì)胞數(shù)／個(gè) 肥大細(xì)胞脫顆粒率／%正常組 15.17±2.32 23.08±2.81模型組 37.67±2.72** 43.72±3.21**陽(yáng)性藥物組 19.20±2.40＃＃ 25.27±2.20＃＃白芥子散穴位組 16.67±2.73＃＃ 25.78±2.20＃＃白芥子散非穴位組 35.67±2.95ΔΔ 40.51±3.35ΔΔ白芥子穴位組 18.83±2.36＃＃ 26.90±2.04＃＃延胡索穴位組 29.67±2.73＃ΔΔ 31.81±2.88＃＃Δ甘遂穴位組 23.50±2.23＃＃Δ 29.42±2.12＃＃細(xì)辛穴位組 21.07±2.37＃＃ 30.20±2.53＃＃生姜穴位組 20.45±2.45＃＃ 28.87±2.25＃＃

圖1 顯示，正常組大鼠肥大細(xì)胞體積大，大多數(shù)胞質(zhì)顆粒呈圓形或橢圓形，細(xì)胞膜完整，極少數(shù)發(fā)生脫顆?，F(xiàn)象；模型組大鼠肥大細(xì)胞數(shù)目密集，體積小，形狀不規(guī)則，大多數(shù)細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞邊界模糊，少數(shù)有雙核現(xiàn)象，脫顆?，F(xiàn)象明顯增多；白芥子散穴位組、陽(yáng)性藥物組大鼠肥大細(xì)胞形態(tài)與正常組相似；白芥子散非穴位組大鼠肥大細(xì)胞形狀不規(guī)則，脫顆粒現(xiàn)象較為嚴(yán)重，與模型組相似。

3.3 白芥子散及其拆方對(duì)IgE 水平的影響 表2 顯示，與正常組比較，模型組IgE 水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，除延胡索穴位組外其余各穴位組其水平顯著降低（P＜0.01）；與白芥子散穴位組比較，白芥子散非穴位組、延胡索穴位組其水平顯著升高（P＜0.01）。

表2 白芥子散及其拆方對(duì)IgE 水平的影響n＝8）

表2 白芥子散及其拆方對(duì)IgE 水平的影響n＝8）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃＃P＜0.01；與白芥子散穴位組比較，△△P＜0.01

組別 IgE／（ng·mL-1）正常組 9.64±0.22模型組 15.11±1.75**陽(yáng)性藥物組 11.14±1.27＃＃白芥子散穴位組 10.99±1.24＃＃白芥子散非穴位組 14.59±0.62△△白芥子穴位組 11.38±1.10＃＃延胡索穴位組 14.42±1.58△△甘遂穴位組 11.85±1.15＃＃細(xì)辛穴位組 11.53±1.28＃＃生姜穴位組 11.69±1.35＃＃

圖1 各組大鼠肥大細(xì)胞形態(tài)（×400）

3.4 白芥子散及其拆方對(duì)SP、 VIP、 CGRP 表達(dá)的影響 圖2、表3 顯示，與正常組比較，模型組2 個(gè)部位中SP 表達(dá)顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組施藥局部皮膚中其表達(dá)顯著降低（P＜0.01），除白芥子散非穴位組、延胡索穴位組、甘遂穴位組外各給藥組肺組織中亦然（P＜0.05，P＜0.01）；與白芥子散穴位組比較，白芥子散非穴位組、延胡索穴位組2 個(gè)部位中其表達(dá)顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

圖2 各組大鼠SP 水平（×400）

表3 白芥子散及其拆方對(duì)SP、VIP、CGRP 表達(dá)的影響n＝8）

表3 白芥子散及其拆方對(duì)SP、VIP、CGRP 表達(dá)的影響n＝8）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與白芥子散穴位組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 施藥局部S皮P／ 膚（ IOD ·0.25 cm-2肺）組織 施藥局部V皮I P膚／（ I OD·0.25 cm-2肺）組織 施藥局部皮膚CG RP ／（IOD·0.25 cm-肺2） 組織正常組 15 179.40±1 517.86 15 850.62±1 188.44 22 571.40±2 086.82 23 515.82±2 660.05 17 454.16±2 019.19 18 093.18±2 436.25模型組 25 441.00±2 579.99** 24 110.15±2 472.45** 14 861.79±1 821.02** 18 077.51±2 443.04** 26 251.52±1 946.11** 26 022.54±2 309.73**陽(yáng)性藥物組 16 965.54±1 562.56＃＃ 17 483.72±1 960.79＃＃ 22 217.18±1 604.51＃＃ 23 076.07±2 281.45＃ 19 353.66±1 690.2＃＃ 18 461.14±2 089.82＃＃白芥子散穴位組 15 900.77±1 733.70＃＃ 16 922.79±1 790.90＃＃ 22 796.03±1 886.41＃＃ 23 114.95±2 515.74＃ 16 739.73±1 065.81＃＃ 18 117.95±1 224.26＃＃白芥子散非穴位組 20 301.86±1 773.20＃?！?3 154.15±2 090.33△△18 175.11±1 980.28?！鳌?8 819.16±2 412.91△ 21 382.70±2 253.33△△ 23 448.13±2 564.18＃?！鳌靼捉孀友ㄎ唤M 17 557.12±1 826.29＃＃ 19 403.46±1 590.33＃ 21 038.92±2 001.69＃＃ 22 376.49±2 399.19 19 481.93±1 811.78＃＃ 18 969.51±2 288.98＃＃延胡索穴位組 19 727.72±1 965.57＃＃△22 990.50±2 004.40△ 19 305.15±1 328.11＃＃ 18 933.51±1 743.75△ 20 413.21±1 501.43?！?21 344.75±1 732.53＃＃△甘遂穴位組 17 319.86±1 492.24＃＃ 19 876.14±1 741.59 21 869.13±1 875.67＃＃ 21 936.84±2 461.04 18 264.26±2 133.59＃＃ 19 183.02±2 349.94＃＃細(xì)辛穴位組 17 298.66±2 413.85＃＃ 20 201.33±2 361.35＃ 20 292.28±1 000.45＃＃ 22 338.49±1 580.88 18 885.53±1 990.40＃＃ 20 550.13±2 476.03＃＃生姜穴位組 17 201.66±1 879.30＃＃ 19 687.14±2 401.35＃ 21 032.15±1 210.45＃＃ 22 157.52±1 410.65 18 535.53±1 990.40＃＃ 19 010.02±2 349.94＃＃

圖3、表3 顯示，與正常組比較，模型組2 個(gè)部位中VIP 表達(dá)顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，白芥子散及其各拆方穴位組施藥局部皮膚中其表達(dá)顯著升高（P＜0.01），白芥子散穴位組肺組織中其表達(dá)亦然（P＜0.05）；與白芥子散穴位組比較，白芥子散非穴位組2 個(gè)部位中其表達(dá)顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），延胡索穴位組肺組織中其表達(dá)亦然（P＜0.05）。

圖3 各組大鼠VIP 水平（×400）

圖4、表3 顯示，與正常組比較，模型組2 個(gè)部位中CGRP 表達(dá)顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組肺組織中其表達(dá)顯著降低（P＜0.01），除白芥子散非穴位組外各給藥組施藥局部皮膚中其表達(dá)亦然（P＜0.05，P＜0.01）；與白芥子散穴位組比較，白芥子散非穴位組、延胡索穴位組2 個(gè)部位中其表達(dá)顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

圖4 各組大鼠CGRP 水平（×400）

4 討論

過(guò)敏性哮喘的病理生理基礎(chǔ)是過(guò)敏性炎癥，主要表現(xiàn)為胸悶、胸痛、咳嗽、喘息、呼吸困難等癥狀，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今尚未完全闡明，可能由多種機(jī)制共同參與，如免疫-炎癥機(jī)制和神經(jīng)-內(nèi)分泌機(jī)制等（圖5）［11-13］。其中，免疫-炎癥機(jī)制認(rèn)為哮喘在本質(zhì)上是一種變態(tài)反應(yīng)性氣道炎癥，而肥大細(xì)胞是其主要效應(yīng)細(xì)胞［14］，與非哮喘患者相比，哮喘患者BALF 中肥大細(xì)胞數(shù)目明顯增多，其分泌的組胺、類胰蛋白酶水平明顯升高［15］，此外肥大細(xì)胞還可通過(guò)脫顆粒反應(yīng)釋放多種炎癥介質(zhì)，如白三烯、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等，進(jìn)而引起氣道損傷和肺部病理加重［16］。

圖5 過(guò)敏性哮喘發(fā)病機(jī)制

IgE 能激活嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、參與體內(nèi)抗原呈遞的細(xì)胞，故IgE 既是引起過(guò)敏性哮喘發(fā)作的關(guān)鍵，又是免疫病理改變的重要指標(biāo)［17］。當(dāng)機(jī)體受到過(guò)敏原刺激時(shí)，IgE 交聯(lián)導(dǎo)致肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞脫顆粒并釋放炎癥介質(zhì)（如白三烯和組胺），從而引發(fā)哮喘炎癥反應(yīng)［18］。

氣道上皮表面下方的感覺(jué)神經(jīng)纖維在感受到環(huán)境變化時(shí)，可刺激神經(jīng)肽釋放，引起支氣管管腔收縮及黏液過(guò)度分泌，進(jìn)而引發(fā)哮喘，其中神經(jīng)肽SP、VIP、CGRP 在哮喘氣道慢性炎癥和氣道高反應(yīng)性形成過(guò)程中起到重要作用。哮喘患者氣道上皮受損時(shí)，SP、CGRP 釋放增加，引起患者氣道平滑肌收縮、腺體分泌增加、微血管滲漏、炎癥浸潤(rùn)等病理生理改變［19］。鄭秀麗等［20］發(fā)現(xiàn)，過(guò)敏性哮喘大鼠肺組織中VIP 水平明顯降低，而SP、CGRP 水平明顯升高；相關(guān)研究報(bào)道［21-22］，SP、CGRP 水平升高會(huì)刺激IgE 分泌增多，而VIP 能拮抗SP、CGRP，它不僅是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)內(nèi)源性支氣管擴(kuò)張劑，對(duì)支氣管平滑肌具有舒張作用，而且對(duì)炎癥介質(zhì)的釋放和抗損傷具有較強(qiáng)的抑制作用，能降低IgE 水平，參與調(diào)節(jié)免疫變態(tài)反應(yīng)。

《黃帝內(nèi)經(jīng)》 首次提出“肺主皮毛”，認(rèn)為皮膚與肺之間存在特殊的關(guān)系，指出“皮毛疾病可以治肺而收功，肺疾病亦可以治療皮毛而奏效”［23］，肺與皮毛相生相合，兩者通過(guò)經(jīng)脈相互聯(lián)系，而穴位則是經(jīng)脈在皮膚的特定敏感點(diǎn)，故臨床上常采用穴位貼敷療法治療肺系疾病。清代外治大師吳師機(jī)曾強(qiáng)調(diào)， “膏藥貼法與針灸通”；現(xiàn)代相關(guān)研究亦表明其相關(guān)性［24-26］，在正常穴位存在少量組胺（HA）和5-羥色胺（HT） 標(biāo)記的完整形態(tài)的肥大細(xì)胞，但在針刺后其細(xì)胞聚集數(shù)與未針刺的穴位相比顯著增多；針刺穴位后SP、CGRP 高表達(dá)的神經(jīng)纖維在其局部分布，而且肥大細(xì)胞聚集在SP 或CGRP 陽(yáng)性神經(jīng)纖維周圍。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)合皮膚免疫學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)、經(jīng)絡(luò)腧穴學(xué)的研究思路，采用中性紅染色法、ELISA 法、免疫組化法探討白芥子散穴位與非穴位貼敷對(duì)施藥局部皮膚及肺組織的作用特征，以及其各拆方藥味穴位貼敷治療過(guò)敏性哮喘的差異，證實(shí)白芥子散貼敷治療過(guò)敏性哮喘的有效性（穴位貼敷明顯優(yōu)于非穴位貼敷），可有效減少過(guò)敏性哮喘大鼠BALF 中肥大細(xì)胞數(shù)并改善脫顆?，F(xiàn)象；明顯降低過(guò)敏性哮喘大鼠血清中IgE 水平（白芥子起到主要作用）；有效回調(diào)肺組織與施藥局部皮膚中SP、VIP、CGRP 表達(dá)。各拆方藥味對(duì)施藥局部皮膚、肺組織中3 種神經(jīng)肽表達(dá)的影響不盡相同，各組成藥味相輔相成，更進(jìn)一步證實(shí)白芥子散配伍應(yīng)用的科學(xué)性。生姜對(duì)施藥局部皮膚中SP 表達(dá)的影響最大，甘遂對(duì)施藥局部皮膚中VIP、CGRP 表達(dá)的影響最大，白芥子對(duì)肺組織中3 種神經(jīng)肽表達(dá)的影響最大，延胡索對(duì)施藥局部皮膚和肺組織中3 種神經(jīng)肽表達(dá)的影響最小。由此提示，穴位貼敷對(duì)施藥局部皮膚產(chǎn)生的效應(yīng)與整體功能的調(diào)節(jié)相聯(lián)系，這可能是穴位貼敷整體效應(yīng)產(chǎn)生的作用基礎(chǔ)。