固相萃取-GC/LC-MS/MS測(cè)定茶葉中79種農(nóng)藥殘留

曾艷，郎紅，楊巧慧,2，李霞雪，史朝婷

固相萃取-GC/LC-MS/MS測(cè)定茶葉中79種農(nóng)藥殘留

曾艷1，郎紅1，楊巧慧1,2，李霞雪1，史朝婷1

1. 雅安市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，四川 雅安 625000；2. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625000

建立了一套以一次固相萃取前處理方法，運(yùn)用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）兩種檢測(cè)技術(shù)，測(cè)定茶葉中79種農(nóng)藥殘留的可靠、快速、高通量檢測(cè)方法。該方法用20?mL乙腈一次均質(zhì)提取，分取提取液10?mL，用乙腈+甲苯（3∶1）20?mL洗脫過Carbon/NH2小柱凈化，用5?mL乙腈定容混勻，于GC-MS/MS和LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)。結(jié)果表明，79種農(nóng)藥在0.01~0.40?mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（R）在0.995以上；高、低、中3種水平加標(biāo)回收率在67.3%~130.8%內(nèi)；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在15%內(nèi)；98.7%的農(nóng)藥定量限（LOQ）≤0.01?mg·kg-1；使用多種類茶葉實(shí)際檢測(cè)，結(jié)果均合格。因此，該方法能同時(shí)檢測(cè)含有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類和有機(jī)雜環(huán)類5大類農(nóng)藥，更有利于大批量茶葉樣品的多農(nóng)殘檢測(cè)。

茶葉；GC-MS/MS；LC-MS/MS；農(nóng)藥殘留

中國是世界茶文化的發(fā)源地，茶葉也是中國重要的經(jīng)濟(jì)作物和出口農(nóng)產(chǎn)品，歐洲國家和日本是我國茶葉的重要進(jìn)口國。在茶產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的同時(shí)，其衛(wèi)生質(zhì)量和安全也引起了各國的廣泛關(guān)注，其中尤以農(nóng)藥殘留限量關(guān)注度最高[1]。國際食品法典委員會(huì)（CAC）、歐盟和日本等組織和國家制定的茶葉中最高農(nóng)藥殘留限量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)極為嚴(yán)苛，并在不斷發(fā)布新的茶葉進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)，增加茶葉農(nóng)殘檢測(cè)項(xiàng)目，提高茶葉農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)[2]。2014年，歐盟共對(duì)EC396/2005法規(guī)進(jìn)行了22次修訂，附錄Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中涉及茶葉農(nóng)殘限量標(biāo)準(zhǔn)分別為242、193和40個(gè)，共計(jì)475個(gè)[3-4]。農(nóng)藥殘留檢測(cè)已成為茶葉貿(mào)易中最大的技術(shù)壁壘。

目前，茶葉農(nóng)殘檢測(cè)方法中多為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-6]和氣相色譜-質(zhì)譜法[7]，這些方法只能單一檢測(cè)某類農(nóng)藥，如有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類或有機(jī)氯類、擬除蟲類，且前處理多為QuEChERS法；檢測(cè)茶葉農(nóng)殘的國標(biāo)方法多為液相色譜-質(zhì)譜法[8]和氣相色譜-質(zhì)譜法[9]，前處理太過冗長繁鎖、試劑用量大，較難滿足大批量樣品快速分析，其所用檢測(cè)器為單級(jí)質(zhì)譜，對(duì)于基質(zhì)復(fù)雜的茶葉而言，定性較為困難。為了把農(nóng)藥殘留控制在MRLs內(nèi)，迫切需要制定一套可靠、快速、高通量的檢測(cè)方法。本試驗(yàn)以不同品種茶葉為研究對(duì)象，參考了中國[10]、歐盟[11]和日本[12]的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)（沒有限量的農(nóng)藥按日本“一律限量0.01?mg·kg-1”執(zhí)行），共選擇了79種農(nóng)藥（表1），以固相萃取法為前處理手段，采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）兩種檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，建立了茶葉中5大農(nóng)藥類型、79種農(nóng)藥同時(shí)檢測(cè)的高通量方法，實(shí)現(xiàn)了短時(shí)間內(nèi)批量樣品的多種類農(nóng)殘準(zhǔn)確定性定量檢測(cè)。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

7890B-7000C型氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀、1290-6470型超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國安捷倫科技有限公司；T25型高速勻漿機(jī)，廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)有限公司；KL-512型氮吹儀，北京康寧科技有限責(zé)任公司；TP-215D型電子天平，北京賽多得期儀器系統(tǒng)有限公司；XH-B型旋渦混合器，江蘇姜堰市康健醫(yī)療器械有限公司；K600型食品粉碎機(jī)，德國博朗公司；TDL-40B型離心機(jī)，上海線安亭科學(xué)儀器廠。

79種標(biāo)準(zhǔn)溶液（表1）購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，質(zhì)量濃度為100?mg·L-1。固相萃取小柱Mega BE Carbon/NH2購自安捷倫科技有限公司。TPT小柱購自月旭科技（上海）股份有限公司。乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯（色譜級(jí)）購自美國天地有限公司。其他試劑為分析純，所用水均為超純水。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：將79種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液用1∶1（∶）的乙腈+丙酮稀釋成2?mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：取混合空白茶葉樣經(jīng)前處理后的溶液作為空白基質(zhì)，分別加入2?mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05、0.25、0.5、1、2?mL至10?mL容量瓶后，用空白基質(zhì)定容混勻，即得到含量為0.01、0.05、0.1、0.2、0.4?mg·L-1的混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

實(shí)際樣品測(cè)試為實(shí)驗(yàn)室隨機(jī)取樣樣品，含紅茶、綠茶、藏茶、黑茶、黃茶和花茶。

2.2 樣品前處理

取試樣于食品粉碎機(jī)里粉碎，過60目篩（0.25?mm），混勻。稱取粉碎混勻試樣5.00?g于50?mL離心管中，每個(gè)處理1個(gè)混合空白樣，3個(gè)平行樣（加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2?mg·kg-1作為試樣），加20?mL乙腈，高速勻漿1.5?min，6?000?r·min-1離心6?min。用移液槍取10?mL濾液于150?mL雞心瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)盡干。加5?mL乙腈+甲苯（3∶1）溶液溶解樣品，混勻并洗3次，收集全部洗滌液40℃蒸干，用5?mL乙腈溶解試樣，漩渦混勻過微孔膜，裝瓶檢測(cè)。

表1 79種農(nóng)藥在茶葉中限量值

2.3 色譜質(zhì)譜條件

2.3.1 GC-MS/MS條件

采用Agilent 7890B-7000C氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，使用Agilent HP-5MS 30?m×250?μm×0.25?μm毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度：270℃；進(jìn)樣量1?μL，不分流進(jìn)樣；柱溫箱梯度升溫程序：80℃保持2?min后，15℃·min-1升至310℃，保持5?min，共計(jì)22.33?min；載氣N2≥99.999%，1?mL·min-1恒流模式；離子源溫度，230℃；四極桿溫度，150℃；電子轟擊源電壓，70?eV；傳輸線：280℃；淬滅氣，He≥99.999%，2.25?mL·min-1；碰撞氣，N2≥99.999%，1.5?mL·min-1；掃描方式，動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（DMRM）。

2.3.2 LC-MS/MS條件

采用Agilent 1290-6470超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，使用Agilent C1850?mm×0.30?mm×1.8?μm柱子；進(jìn)樣量1.0?μL；流動(dòng)相A為甲醇，B為水（含0.1%甲酸）；梯度洗脫程序：0~1?min，10% A；1~6.6?min，10%~80% A；6.6~7.0?min，80%~90% A；7.0~7.10?min，90%~98% A；7.10~11.60?min，98% A；11.60~15.00?min，98%~10% A；流速：0.3?mL·min-1；柱溫30℃；電噴霧電離（ESI）源，正離子模式；干燥氣溫度，350℃；干燥氣流速10?mL·min-1；霧化器壓力，15?psi；鞘氣溫度，300℃；鞘氣流速，11?mL·min-1；毛細(xì)管電壓，4?000?V；掃描方式，DMRM。

3 結(jié)果與分析

3.1 儀器條件優(yōu)化

3.1.1 GC-MS/MS儀器條件優(yōu)化

GC-MS/MS通過反復(fù)調(diào)整色譜柱升溫程序和載氣流量等關(guān)鍵性氣相參數(shù)；在保證所有農(nóng)藥有較好分離度的同時(shí)，盡量縮短分析時(shí)間（44個(gè)農(nóng)藥組分19?min內(nèi)全部檢出，圖1），在優(yōu)化好的氣相色譜條件下，使用高濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（2?mg·L-1），用全掃描（MS2Scan）方式，NIST譜庫搜索比對(duì)，得到各待測(cè)農(nóng)藥的質(zhì)譜圖。選擇1~2個(gè)相對(duì)豐度較高、質(zhì)荷比較大、無背景干擾的離子作為母離子進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描（Product ion scan），同時(shí)給予不同的碰撞能量電壓（Collision energy，CE），找到豐度高的子離子和最佳CE。最后，用選擇好的離子對(duì)和優(yōu)化好的CE進(jìn)行DMRM。最佳色譜質(zhì)譜條件見2.3.1章節(jié)，44種農(nóng)藥組分的保留時(shí)間、MRM離子對(duì)及最佳CE見表3，MRM總離子圖見圖1。

3.1.2 LC-MS/MS儀器條件優(yōu)化

LC-MS/MS反復(fù)調(diào)整流動(dòng)相及梯度洗脫程序等關(guān)鍵性液相參數(shù)；在優(yōu)化好的色譜條件下，采用單一標(biāo)準(zhǔn)溶液（2?mg·L-1）對(duì)母離子進(jìn)行全掃描（MS2Scan），同時(shí)設(shè)置幾組不同的裂解電壓（Frangment），對(duì)照每種標(biāo)樣的相對(duì)分子量，找到與相對(duì)分子量一致的質(zhì)荷比作為其母離子，選擇母離子響應(yīng)最大值下的裂解電壓，作為后續(xù)最優(yōu)裂解電壓；然后進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描，并同時(shí)優(yōu)化CE，找到特征子離子及其最佳CE。最后采用優(yōu)化好的條件，進(jìn)行DMRM分析。優(yōu)化好的最佳色譜質(zhì)譜條件見2.3.2章節(jié)，35種農(nóng)藥組分的保留時(shí)間、MRM離子對(duì)及最佳CE見表3，MRM總離子圖見圖2。

注：圖中色譜峰編號(hào)對(duì)應(yīng)農(nóng)藥詳見表1

3.2 提取方式及提取劑比較

茶葉中的農(nóng)殘?zhí)崛》绞街饕谐昜13]、振蕩[14]和均質(zhì)提取[15]等，但超聲和振蕩提取都不能完全破壞茶葉的細(xì)胞壁，對(duì)于內(nèi)吸性農(nóng)藥，難以提取完全。均質(zhì)提取則可以完全破壞茶葉細(xì)胞壁使內(nèi)吸性農(nóng)藥完全釋放，但國標(biāo)中均質(zhì)提取兩次，使用大量的有機(jī)溶劑，操作復(fù)雜。因此，本試驗(yàn)采用有機(jī)溶劑一次均質(zhì)提取后，分取適量溶液后續(xù)凈化。目前，植物性樣品中農(nóng)殘檢測(cè)主要提取溶劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈、甲醇和正己烷[13-14]等。甲醇和正己烷對(duì)茶葉組織滲透力不足，難以將極性農(nóng)藥從植物組織中完全萃取，提取效率低，因此本文比較了乙腈、丙酮和乙酸乙酯3種有機(jī)試劑均質(zhì)提取效果。

如表2所示，經(jīng)乙腈1次均質(zhì)提取后的農(nóng)藥，在兩種儀器上的平均回收率分別為80.9%和103.9%，經(jīng)丙酮提取的分別為82.4%、174.7%，經(jīng)乙酸乙酯提取后的分別為82.1%、164.9%。分別經(jīng)丙酮和乙酸乙酯提取后的農(nóng)藥于LC-MS/MS上檢測(cè)（35個(gè)），分別有6個(gè)和3個(gè)回收率小于70%，說明提取不完全；于GC-MS/MS上檢測(cè)（44個(gè)）回收率普遍偏大，分別有35個(gè)和36個(gè)的農(nóng)藥回收率超過130%，另有極小部分農(nóng)藥（百菌清、p.p′-DDD、三氯殺螨醇）在兩種提取劑中回收率均低于70%。由此可見，丙酮和乙酸乙酯對(duì)大多數(shù)農(nóng)藥的提取效果不錯(cuò)，但提取的雜質(zhì)也較多，后續(xù)凈化難度大，由此導(dǎo)致大量農(nóng)藥回收率超過130%。以上結(jié)果同時(shí)表明，用乙腈一次均質(zhì)提取，效果也很佳，不需要再次加入乙腈進(jìn)行提取。因此，本試驗(yàn)最終選擇乙腈作為提取試劑，一次均質(zhì)提取。

注：圖中色譜峰編號(hào)對(duì)應(yīng)農(nóng)藥詳見表1

表2 不同提取劑對(duì)79種農(nóng)藥回收率的影響

注：農(nóng)藥的添加水平為0.2?mg·kg-1

Note: Pesticide addition level is 0.2?mg·kg-1

3.3 凈化洗脫液及凈化小柱比較

國標(biāo)中，對(duì)于蔬菜、水果、食用菌的凈化為Florisil和Envi-Carbon小柱[15-16]，使用正己烷和正己烷加丙酮進(jìn)行洗脫，洗脫液用量為10?mL；茶葉凈化通常使用Cleanert TPT柱[8]，采用乙腈加甲苯進(jìn)行洗脫，用量為25?mL；文獻(xiàn)報(bào)道固相萃取中常用Cleanert TPT和Envi-Carbon小柱[13,17-18]，洗脫液也為正己烷、乙腈、乙腈加甲苯。Florisil柱的色素去除能力較差，不適用于茶葉基質(zhì)；Carbon/NH2柱除了有較強(qiáng)的色素去除能力外，還有-NH2結(jié)構(gòu)，具有較高的離子交換容量，能有效去除有機(jī)酸等極性雜質(zhì)，使得基質(zhì)干擾降低許多。因此，本試驗(yàn)以Cleanert TPT和Carbon/NH2小柱進(jìn)行凈化效果比較。洗脫液選擇，一是盡量去除非目標(biāo)物，保留目標(biāo)物；二是盡量較少溶劑置換，減少溶劑對(duì)部分農(nóng)藥的影響。由于Carbon對(duì)平面型農(nóng)藥（如百菌清等）有一定的吸附能力，而甲苯是較強(qiáng)極性的洗脫液，能夠?qū)⑽皆谛≈系霓r(nóng)藥強(qiáng)有力的洗脫下來。因此，本試驗(yàn)以純乙腈和乙腈+甲苯（3∶1）作為洗脫液，進(jìn)行了凈化效果比較。

由表3可知，用乙腈作洗脫液時(shí)，在LC-MS/MS上檢測(cè)的農(nóng)藥全部表現(xiàn)為回收率偏低，在GC-MS/MS上檢測(cè)的農(nóng)藥，有部分偏低（6個(gè)），有部分偏高（11個(gè)）；用TPT小柱進(jìn)行凈化時(shí)，在LC-MS/MS上檢測(cè)的農(nóng)藥，總體回收率表現(xiàn)為偏低（平均回收率為51.99%和70.59%）；在GC-MS/MS上檢測(cè)的農(nóng)藥總體偏高（平均回收率為104.6%和126.7%），總體效果最差，且TPT小柱成本遠(yuǎn)高于Carbon/NH2，不適合于批量樣品檢測(cè)；使用乙腈+甲苯（3∶1）洗脫，用Carbon/NH2作凈化小柱時(shí)，效果達(dá)到最佳，回收率在70%~130%之間的農(nóng)藥有76個(gè)，平均回收率為81.6%和109.0%。綜合考慮，本試驗(yàn)選用乙腈+甲苯（3∶1）作洗脫液，用Carbon/NH2作為凈化小柱。

3.4 凈化洗脫液體積比較

試驗(yàn)中用乙腈+甲苯（3∶1）作洗脫液、Carbon/NH2小柱進(jìn)行凈化，分別使用10、15、20、25、30?mL的乙腈+甲苯（3∶1）進(jìn)行洗脫。圖3為隨機(jī)選擇在GC-MS/MS和LC-MS/MS上檢測(cè)農(nóng)藥的洗脫體積梯度回收率。5個(gè)洗脫梯度下，79種農(nóng)藥的平均回收率分別為：81.3%、83.0%、82.3%、87.4%和86.6%，均在80%~90%，隨著洗脫液體積的增加，其平均回收率總體呈上升趨勢(shì)；但20?mL之后，在GC-MS/MS上檢測(cè)農(nóng)藥的回收率仍在增大，洗脫體積為30?mL時(shí)，回收率在105.4%~151.8%，超過130%的農(nóng)藥有4個(gè)；而LC-MS/MS上檢測(cè)農(nóng)藥的回收率則整體表現(xiàn)為下降，到30?mL洗脫體積時(shí)，其平均回收率在34.1%~80.8%，有33個(gè)農(nóng)藥回收率低于70%。這主要的原因是茶葉中的復(fù)雜基質(zhì)干擾直接影響了待測(cè)物定量的準(zhǔn)確性，目標(biāo)農(nóng)藥在較低洗脫液的使用下，已經(jīng)完全洗脫下來，隨著洗脫體積的增大，一部分干擾物被洗脫下來（如色素），影響了目標(biāo)農(nóng)藥的準(zhǔn)確定量。因此，本試驗(yàn)選擇20?mL的乙腈+甲苯（3∶1）洗脫液凈化，以適應(yīng)所有試驗(yàn)農(nóng)藥的檢測(cè)。

表3 不同洗脫液和凈化小柱對(duì)79種農(nóng)藥回收率的影響

注：農(nóng)藥的添加水平為0.2?mg·kg-1

Note: Pesticide addition level is 0.2?mg·kg-1

注：（A）GC-MS/MS檢測(cè)農(nóng)藥，（B）LC-MS/MS檢測(cè)農(nóng)藥 Note: (A) detected by GC-MS/MS, (B) detected by LC-MS/MS

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線、加標(biāo)回收率及定量限

按以上方法配制了標(biāo)準(zhǔn)曲線，以目標(biāo)組分的響應(yīng)面積（）對(duì)相應(yīng)的質(zhì)量濃度（，mg·L-1）繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在0.01~0.40?mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.995。用本方法進(jìn)行了0.02、0.20、0.40?mg·kg-1的加標(biāo)回收試驗(yàn)，3種加標(biāo)水平下，其回收率達(dá)到67.3%~130.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）<15%；以信噪比（S/N）>10確定79種農(nóng)藥的定量限（LOQ），除甲胺磷定量限為0.02?mg·kg-1外，其他均可達(dá)到0.01?mg·kg-1，特別是LC-MS/MS檢出農(nóng)藥，其定量限在0.000?2~0.009?0?mg·kg-1，比GC-MS/MS定量限更低（表4）。

3.6 實(shí)際樣品檢測(cè)

對(duì)于茶葉的檢測(cè)，茶葉中的基質(zhì)干擾較為嚴(yán)重，不同種類的茶葉，其內(nèi)容物質(zhì)差異也較大，對(duì)農(nóng)殘檢測(cè)的干擾也不同，為了排除這些干擾，本研究將上一年度檢測(cè)無該79種農(nóng)藥殘留的紅茶、綠茶、藏茶、黑茶、黃茶和花茶樣品作為空白試驗(yàn)樣本，減少了不同茶葉基質(zhì)對(duì)試驗(yàn)方法的干擾。

應(yīng)用本研究所建立的方法對(duì)2018年實(shí)驗(yàn)室隨機(jī)抽取茶葉樣品：綠茶52份，紅茶19份，藏茶17份，黑茶5份，黃茶5份，花茶2份共100份進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，100份樣品中GC-MS/MS共檢出農(nóng)藥166次：聯(lián)苯菊酯60次，氯氟氰菊酯49次，甲氰菊酯22次，三氯殺螨醇22次，硫丹1次，氯菊酯1次；LC-MS/MS上共檢出農(nóng)藥207次：毒死蜱59次，噻嗪酮45次，吡蟲啉39次，噠螨靈32次，多菌靈19次，啶蟲脒13次，其他農(nóng)藥均未檢出，所有檢出農(nóng)藥均未超出國家限量值，合格率100%。由檢出的農(nóng)藥種類可見，高毒、高殘留的有機(jī)磷類農(nóng)藥均未檢出，檢出率最高的是低毒、低殘留的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥（檢出132次），表明這是茶葉常用農(nóng)藥類。

表4 茶葉中79種農(nóng)藥的儀器采集條件、相關(guān)系數(shù)、添加回收率和定量限（n=3）

注：*標(biāo)注為定量離子對(duì)

Note: Marked*are the quantitative ion pairs

續(xù)表4

農(nóng)藥名稱Pesticide name保留時(shí)間/minRetention time離子對(duì)/m·z-1Tranisition裂解電壓Fragment/V碰撞能量電壓CE/VR2添加水平Add level/mg·kg-1定量限LOQ/mg·kg-1 0.020.20.4 回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/% p.p′-DDD14.72235.0-199.1/235.0-165.2*/20/150.999?189.112.4117.88.099.84.10.041?7 p.p′-DDE15.16235.0-199.1/235.0-165.2*/20/150.999?172.310.7121.18.2103.32.00.011?6 炔螨特Propargite15.31149.9-135.1/135.0-77.1*/30/50.999?4105.113.5105.15.8113.52.10.015?2 聯(lián)苯菊酯Bifenthrin15.69181.2-166.2/181.2-165.2*/25/100.999?4108.010.4124.87.896.11.40.011?4 亞胺硫磷Phosmet15.74160.0-133.1/160.0-77.1*/20/100.999?2118.18.2124.18.7110.72.00.011?4 甲氰菊酯Fenpropathrin15.83181.0-127.0/207.9-181.0*/5/350.998?299.411.6129.010.997.30.60.010?2 伏殺硫磷Phosalone16.19182.0-102.1/182.0-111.0*/15/150.999?2109.211.1126.910.0107.61.80.010?9 氯氟氰菊酯Cyhalothrin16.32197.0-141.0/208.0-181.1*/5/100.999?0106.711.873.610.2103.30.90.010?9 氯菊酯Prermethrin16.96183.1-165.1/183.1-168.1*/10/100.999?397.514.174.14.2102.21.30.006?2 氟氯氰菊酯Cyfluthrin17.32162.9-90.9/162.9-127.0*/5/150.999?0110.89.4114.38.7100.30.10.006?6 氯氰菊酯Cypermethrin17.56164.9-91.01/63.0-127.0*/5/100.999?1115.08.1111.47.6102.11.90.008?1 氟氰戊菊酯Flucythrinate17.67198.9-157.9/156.9-107.1*/15/100.999?2113.17.8109.55.4101.90.50.010?9 醚菊酯Ethofenprox17.73163.0-135.1/163.0-107.1*/20/100.999?0112.312.0117.36.2100.80.00.011?4 氰戊菊酯Fenvalerate18.26167.0-89.0/167.0-125.1*/15/400.999?2130.35.1117.95.4105.20.70.007?0 氟胺氰菊酯Tau-fluvalinate18.26250.0-200.0/250.0-55.0*/15/200.999?3110.19.5128.810.2107.10.80.008?9 溴氰菊酯Deltamethrin18.81250.7-172.0/252.9-93.0*/10/50.999?5115.24.4127.710.4112.11.40.012?2 涕滅威亞砜Aldicarb-sulfoxide3.77207.0-89.0/207.0-132.0*805/50.999?891.74.883.52.288.82.90.000?5 涕滅威砜Aldicarb-sulfone4.16223.0-148.0/223.0-86.0*1105/150.999?881.53.588.76.291.60.30.005?3 多菌靈Carbendazim4.38192.0-132.0/192.0-160.0*10025/150.999?484.48.274.81.498.94.40.000?5 滅多威Methomyl4.61163.1-106.2/163.1-88.2*705/50.999?380.84.982.76.189.61.10.000?6 噻蟲嗪Thiamethoxam4.82292.1-181.1/292.1-211.1*8025/100.999?582.56.585.10.992.10.90.000?3 久效磷Monocrotophos5.07224.1-127.1/224.1-192.9*8010/50.999?3127.51.5115.25.1116.63.20.000?6 吡蟲啉Imidacloprid5.53256.0-175.0/256.0-209.0*8010/100.999?879.414.481.53.593.80.50.001?0 樂果Dimethoate5.93230.0-125.1/230.0-199.0*8020/50.999?578.39.991.42.391.50.00.007?7 3-克百威3-Hydroxycarbofuran5.93238.0-181.0/238.0-163.0*805/100.999?478.54.287.49.178.53.90.000?4 啶蟲脒Acetamiprid5.96223.1-90.1/223.1-126.0*11040/250.999?378.013.685.61.791.01.30.000?5 涕滅威Aldicarb6.77116.0-70.0/116.0-89.0*805/50.999?181.12.182.32.387.52.00.000?4 磷胺Phosphamidon6.96300.1-227.0/300.1-174.1*11010/150.999?276.310.388.51.392.51.70.001?6 克百威Carbofuran7.42222.0-123.1/222.0-165.1*10020/100.999?583.46.182.94.288.10.10.000?3 甲萘威Carbaryl7.64202.0-117.9/202.0-145.0*805/50.999?682.85.779.54.677.48.60.000?2 嘧霉胺Pyrimethanil8.16200.2-82.1/200.2-107.1*12030/250.999?288.37.783.91.491.52.00.001?1 甲霜靈Metalaxyl8.20280.2-248.1/280.2-220.1*9010/100.999?587.08.385.72.992.60.20.000?2

續(xù)表4

農(nóng)藥名稱Pesticide name保留時(shí)間/minRetention time離子對(duì)/m·z-1Tranisition裂解電壓Fragment /V碰撞能量電壓CE/VR2添加水平Add level/mg·kg-1定量限LOQ/mg·kg-1 0.020.20.4 回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/% 氯蟲苯甲酰胺Chlorantraniliprole8.41483.8-453.1/483.8-285.9*11015/150.999?483.21.986.55.596.91.00.002?0 嘧菌酯Azoxystrobin8.53404.0-344.1/404.0-372.1*11030/100.999?177.98.787.21.894.70.40.000?4 烯酰嗎啉Dimethomorph8.81389.0-165.2/389.0-302.1*13035/250.999?5119.012.497.02.399.40.30.003?6 三唑磷Triazophos8.93314.0-119.2/314.0-162.1*10040/200.999?380.511.590.61.397.63.30.003?3 氟蟲腈Fipronil9.11437.0-290.0/437.0-368.0*12020/150.999?572.56.979.311.281.61.00.000?4 阿維菌素苯甲酸鹽Emamectin-benzoate9.13886.5-126.0/886.5-158.0*15045/400.999?2103.512.087.510.2124.15.30.000?6 咪酰胺Prochloraz9.28376.0-70.2/376.0-308.1*8030/100.999?081.45.178.81.085.54.60.001?3 丙環(huán)唑Propiconazole9.34342.0-159.0/342.0-69.0*12020/200.999?183.02.884.50.794.70.40.005?7 吡唑醚菌酯Pyraclostrobin9.36388.0-163.0/388.0-194.2*9030/100.999?088.66.690.43.198.03.60.000?5 二嗪磷Diazinon9.35305.1-153.2/305.1-169.2*12025/200.999?182.65.886.33.493.02.20.000?4 辛硫磷Phoxim9.35299.0-129.0/299.0-77.0*8020/200.999?277.14.685.47.290.72.70.000?5 苯醚甲環(huán)唑Difenoconazoie9.47406.1-337.1/406.1-251.1*11020/200.999?389.04.180.54.190.210.80.000?3 噻嗪酮Buprofezin9.72306.2-116.2/306.2-202.1*8015/100.999?578.14.986.94.293.89.50.000?3 毒死蜱Chlorpyrifos9.96349.9-321.9/349.9-197.9*9010/200.999?176.711.780.04.897.06.10.000?6 噻螨酮Hexythiazox9.95353.0-168.0/353.0-228.0*12020/100.999?269.04.968.71.992.51.40.000?3 二甲戊靈Pendimethalin10.00282.2-194.0/282.2-212.0*7020/100.999?494.47.474.46.793.33.80.000?7 噠螨靈Pyridaben10.35365.0-308.6/365.0-147.2*8010/250.999?274.37.474.54.390.811.60.000?2 阿維菌素Abamectin10.48895.5-449.2/895.5-751.3*19050/450.999?578.83.375.80.373.76.10.008?8 滅幼脲Chlorbenzuron11.51310.0-275.5/310.0-293.1*13010/100.999?4119.37.582.62.6102.311.10.000?5

4 討論與結(jié)論

本研究采用1次均質(zhì)提取，固相萃取凈化技術(shù)進(jìn)行前處理，利用GC-MS/MS和LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定茶葉中79種農(nóng)藥殘留。試驗(yàn)用20?mL乙腈1次均質(zhì)提取，分取提取液10?mL，用乙腈+甲苯（3∶1）20?mL洗脫過Carbon/NH2小柱凈化，用乙腈定容混勻，于GC-MS/MS和LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)。結(jié)果表明，79種農(nóng)藥在0.01~0.40?mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（R）在0.995以上；高、低、中3種水平加標(biāo)回收率在67.3%~130.8%內(nèi)；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在15%內(nèi)；滿足多農(nóng)殘檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度，98.7%的農(nóng)藥定量限（LOQ）≤0.01?mg·kg-1，定量準(zhǔn)確；使用多種類茶葉實(shí)際檢測(cè)，結(jié)果合格，應(yīng)用可靠。

該方法只測(cè)試了79種農(nóng)藥，局限于筆者實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，但種類齊全，涵蓋了歐盟、日本和中國標(biāo)準(zhǔn)中茶葉限量的5種主要農(nóng)藥類型（有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯和有機(jī)雜環(huán)類），避免了只單一檢測(cè)其中某類農(nóng)藥的弊端。在以后試驗(yàn)中，可增加更多的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，以期更有利于大批量茶葉樣品的多農(nóng)殘檢測(cè)。

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Determination of 79 Pesticide Residues in Tea by Solid Phase Extraction with GC-MS/MS and LC-MS/MS

ZENG Yan1, LANG Hong1, YANG Qiaohui1,2, LI Xiaxue1, SHI Chaoting1

1. Ya'an Quality Inspection of Agricultural Products Monitoring Center, Ya'an 625000, China;2. College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya'an 625000, China

In order to detect various pesticide residues in tea, a reliable, rapid and high throughput detection method was established: a solid phase extraction was developed for the determination of 79 pesticide residues in tea by gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). These samples were extracted by 20?mL acetonitrile. 10?mL extracts were cleaned by Carbon/NH2column with 20?mL acetonitrile + toluene (3∶1) and then mixed with 5?mL acetonitrile, then these procdssed samples were detected by GC-MS/MS and LC-MS/MS, respectively. The results show that the concentrations of 79 pesticide residues had good linearity relationships in the range of 0.01-0.40?mg·L-1, with the correlation coefficients (R) above 0.995, the recoveries of high, low and medium levels were ranged from 67.3%-130.8%, the relative standard deviations (RSDs) were less than 15%, the limits of quantification (LOQs) of 98.7 % pesticides were less than or equal to 0.01?mg·kg-1, multiple types of tea were detected, and the results were proved to be qualified. Consequently, the method can simultaneously detect 5 kinds of pesticides, including organophosphorus, organochlorine, pyrethroids, carbamates and organic heterocyclic pesticides, which would be useful to determine multi-pesticide residues in high numbers of tea samples.

tea, GC-MS/MS, LC-MS/MS, pesticide residues

S571.1；O657.63

A

1000-369X(2019)05-576-11

2019-03-01

2019-04-24

雅安市重點(diǎn)科技項(xiàng)目（2017yyjskf05）

曾艷，女，碩士研究生，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品及產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量安全研究，Email: 276874503@qq.com