木犀草素的測定與分析

黃酮類化合物在植物界分布很廣，是一類重要的天然有機(jī)化合物，約20%的植物都含有黃酮類化合物，例如銀杏葉中富含蘆丁，山楂中槲皮素含量較高，木犀草素是白毛夏枯草或青蘭的有效成分。常見的黃酮類物質(zhì)有蘆丁、槲皮素、桑色素，木犀草素等。

1、木犀草素的介紹

木犀草素為黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)228℃～230℃，分子式為C15H10O6，分子量為286.24，木犀草素化學(xué)名為3，4，5，7-四羥基黃酮。因最初從木犀草科木犀草屬草本植物木犀草的葉、莖、枝中分離出而得名，是一種天然色素組分。可溶于甲醇、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑及堿性溶液，微溶于熱水，溶于濃硫酸生成鋅鹽，呈暗紅黃色。木犀草素分子因存在酚羥基，故其水溶液呈微弱酸性，木犀草素能與鐵、鎂、鈣、銅、鋁、鋯等金屬離子生成帶色絡(luò)合物，是一種重要黃酮化合物，在自然界以糖甙型或游離型存在。木犀草素在自然界分布廣泛，目前發(fā)現(xiàn)主要存在于金銀花、菊花、荊芥、白毛夏枯草、洋薊、紫蘇屬、黃芩屬等天然藥物和芹菜、甜椒、辣椒、落花生等蔬菜果實(shí)中，其它如橄欖油和紅酒及野鳳仙花、百里香草、唇形科植物筋骨草等也含有木犀草素。

2、木犀草素生理功能

（1）抗氧化：體內(nèi)存在許多清除自由基和抑制自由基物質(zhì)，使體內(nèi)自由基生成和消除維持相對(duì)平衡。以木犀草素等為代表黃酮類化合物具有自由基清除劑作用，它主要通過酚羥基與自由基反應(yīng)生成較穩(wěn)半醌式自由基，從而終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

（2）抑菌：一定濃度木犀草素可抑制葡萄球菌、枯草桿菌、啤酒酵母和大腸桿菌生長，對(duì)卡他菌、白色念珠菌、變形桿菌也有抑制作用，可用作食品防腐保鮮劑。

（3）抗炎：木犀草素具有抗炎癥作用，炎癥發(fā)生與體內(nèi)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等密切相關(guān)，木犀草素等黃酮類化合物抗炎主要通過影響細(xì)胞分泌過程、有絲分裂基細(xì)胞間相互作用及減少殺傷性T細(xì)胞產(chǎn)生而起效。

（4）抗腫瘤：木犀草素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用主要是通過靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞生長中信號(hào)轉(zhuǎn)遞、基因表達(dá)、酶活化或抑制而實(shí)現(xiàn)，有較廣抗癌譜。木犀草索抗腫瘤機(jī)制，既可直接作用于腫瘤細(xì)胞干擾細(xì)胞代謝，抑制細(xì)胞生長，誘導(dǎo)或增敏細(xì)胞凋亡;還可通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，發(fā)揮抗腫瘤作用，是一種非常有前途的潛在抗腫瘤藥物，可減少結(jié)腸癌和卵巢癌發(fā)病率。

3、黃酮類化合物的分析方法

紫外光譜是分析黃酮化合物的重要手段，該方法樣品需要量少，用特殊試劑使黃酮母核上一個(gè)或幾個(gè)官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，大大增加了從紫外光譜上得到的結(jié)構(gòu)信息的數(shù)量。大多數(shù)黃酮類化合物的紫外光譜有兩個(gè)主要吸收峰組成，其中之一出現(xiàn)在240-280nm范圍內(nèi)（帶Ⅱ），另一個(gè)在300-400nm范圍內(nèi)（帶Ⅰ）。一般來說帶Ⅱ是A環(huán)苯酰系統(tǒng)引起，而帶Ⅰ則是B環(huán)肉桂酰系統(tǒng)引起。將果茶樣品經(jīng)由乙醚浸泡除雜，用甲醇索式抽提，并以蘆丁為對(duì)照品，采用吸光光度法測定總黃酮的含量。

分光光度法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，通過三氯化鋁等衍生體系，分別在412nm和499nm處測定枳具子總黃酮含量。采用光譜法在抗壞血酸存在下直接檢測槲皮素，通過優(yōu)化溶劑、pH 、波長等實(shí)驗(yàn)條件，大大提高了槲皮素的檢測限?；贜aOH 堿性介質(zhì)中鐵氰化鉀可以直接氧化蘆丁和桑色素產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，建立了高效液相色譜分離柱，采用化學(xué)發(fā)光法測定桑葉中蘆丁和桑色素含量，取得了很好的效果。采用電化學(xué)檢測毛細(xì)管電泳法同時(shí)測定了蘆丁和槲皮素，研究了緩沖液濃度、注射時(shí)間、檢測電位對(duì)測定的影響，并成功用于中草藥中蘆丁和槲皮素的測定。采用β-環(huán)糊精修飾區(qū)帶毛細(xì)管電泳-內(nèi)標(biāo)定量法分析槐花和槐米中蘆丁和槲皮素。在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，蘆丁和槲皮素在7min內(nèi)得到基線分離。該方法分析實(shí)際樣品對(duì)槐花和槐米的藥用開發(fā)具有重要的參考價(jià)值。各種分析方法都發(fā)揮了積極的作用，但仍然存在一定問題。一般來說，光譜法雖然簡單，但靈敏度不夠高，容易受到有色物質(zhì)的干擾;色譜法在多組分分離上具有很大優(yōu)勢，但是色譜柱的制備一般比較麻煩，而且儀器操作復(fù)雜，成本較高。鑒于黃酮類化合物的分子結(jié)構(gòu)中具有電活性基團(tuán)-酚羥基，特別是B環(huán)上的酚羥基，易脫氫失去電子被還原，適宜采用電化學(xué)方法進(jìn)行檢測。該方法成本低、操作簡便、響應(yīng)迅速、靈敏度高。關(guān)于黃酮類的電化學(xué)研究正成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。以滴汞電極為工作電極，應(yīng)用線性掃描和循環(huán)伏安法研究了蘆丁的電化學(xué)行為，以滴汞線性掃描法測定甘草內(nèi)黃酮的含量，靈敏度及準(zhǔn)確度均明顯提高，結(jié)果令人滿意。當(dāng)然，電化學(xué)法也存在一些不足，最主要的電極的重復(fù)性和穩(wěn)定性有待提高。尤其是汞電極法，其電極毒性已經(jīng)使該方法應(yīng)用逐漸減少。盡管如此，通過采用新材料對(duì)電極表面進(jìn)行修飾，改善電極的穩(wěn)定性、重復(fù)性，提高電極的靈敏度、選擇性，在現(xiàn)有方法的基礎(chǔ)上，化學(xué)修飾電極必將發(fā)揮重要的作用。

黃酮類化合物在治療各種疾病，改善飲食結(jié)構(gòu)、提高生活質(zhì)量方面發(fā)揮了越來越大的作用。因此，對(duì)天然產(chǎn)物和藥品中黃酮類物質(zhì)的檢測具有很大的實(shí)際意義，人們正積極進(jìn)行這方面的研究。

作者簡介：范娜，出生于1986年5月1日，山東省壽光市人，大學(xué)本科，主要研究方向是化工。