電化學發(fā)光法定量檢測乙型肝炎表面抗原與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA載量的關系探討

張繼東 曹立華 趙培利 楊延源

【摘 要】目的 探討電化學發(fā)光法（ECLIA）定量檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA（HBV-DNA）載量的關系。方法 選擇2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者為研究對象，抽取患者靜脈血液分離血清，同時采用ECLIA法和熒光定量PCR法對患者血清進行HBsAg含量和HBV-DNA載量檢測，對檢測結果進行分析。結果 有151例患者血清檢測結果為HBsAg陽性，所占比率為88.82%，有96例患者血清檢測結果為HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%，有96例患者的血清檢測結果同時為HBsAg和HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%。利用統(tǒng)計學知識，分析發(fā)現，HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關性，P>0.05。結論 ECLIA法定量檢測HBsAg和熒光定量PCR法檢測HBV-DNA載量之間不具有相關性，在對患者進行診斷時候，同時采用這兩種方法檢測HBsAg和HBV-DNA載量，可以為臨床提供更優(yōu)的診斷依據。

【關鍵詞】電化學發(fā)光法;乙型肝炎表面抗原;熒光定量PCR;乙肝病毒DNA載量

【中圖分類號】R440 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-597X（2019）19-0239-02

肝炎是由乙肝病毒（HBV）傳播造成的一種疾病，其中乙型肝炎是對患者威脅最大的肝炎之一[1]。目前，國內通常主要根據患者血清內HBsAg含量和HBV-DNA載量對乙肝患者的病情精心診斷鑒別[2]。但是由于醫(yī)療設備等原因，利用熒光定量PCR法檢測患者血清HBV-DNA載量的做法難以在全國各個醫(yī)院進行普及[3]。為了提高對乙型肝炎患者的診斷鑒別能力，本文探討的電化學發(fā)光法（ECLIA）定量檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA（HBV-DNA）載量的關系，希望對診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者為研究對象，其中男性患者116例，女性患者54例，患者年齡在13歲至65歲之間，平均年齡為（38.15±10.21）歲，抽取患者靜脈血液分離血清，檢測后留存血清標本。

1.2 方法

采用ECLIA法對患者血清進行HBsAg含量檢測和采用熒光定量PCR法對患者血清進行HBV-DNA載量檢測。電化學發(fā)光法所使用的儀器羅氏全自動電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)E602，檢測過程嚴格按照檢測試劑（來自羅氏診斷產品（上海）有限公司）的說明書來進行操作。熒光定量PCR法所用儀器為上海宏石SLAN96S熒光定量PCR儀，檢測過程嚴格按照檢測試劑（來自東北制藥股份有限公司）的說明書來進行操作以取得最終結果。

1.3 統(tǒng)計學處理

用Microsoft Excel軟件建立數據庫，整理后用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行Pearson相關分析和處理。

2.結果

2.1 HBs Ag定性與HBV-DNA定性檢測結果比較

170例患者中，有151例患者血清檢測結果為HBsAg陽性，所占比率為88.82%，有96例患者血清檢測結果為HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%，有96例患者的血清檢測結果同時為HBsAg和HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%，有55例（32.35%）患者的血清檢測結果為HBsAg陽性和HBV-DNA陰性，有19例（11.18%）患者的血清檢測結果為HBsAg陰性和HBV-DNA陰性，有0例患者的血清檢測結果為HBsAg陰性和HBV-DNA陽性。見下表1。

2.2 HBV-DNA載量與HBsAg定量檢測結果平均值比較

根據HBV-DNA載量進行分組，分為陰性組、低載量組、中載量組和高載量組。若患者血清HBV-DNA載量小于等于1000IU/ml，則為陰性組;若患者血清HBV-DNA載量在103至105IU/ml之間，則為低載量組;若患者血清HBV-DNA載量在10^5 至10^7IU/ml之間，則為中載量組;若患者血清HBV-DNA載量大于1.0*10^7IUml，則為高載量組。各組患者血清HBV-DNA載量和HBsAg定量檢測結果見下表2。

2.3 HBsAg定量與HBV-DNA相關性分析

通過Pearson相關性分析方法，對四組中患者血清HBsAg定量與HBV-DNA載量進行分析，統(tǒng)計分析結果顯示兩者之間的r值均小于3，P>0.05，說明兩者之間缺乏相關性，具體見表3。

3.討論

肝炎是由乙肝病毒（HBV）傳播造成的一種疾病，其中乙型肝炎是對患者威脅最大的肝炎之一，傳播途徑包括血液、性接觸以及母嬰等。乙型肝炎患者的臨床表現具有多樣性、不明顯性的特點，較難被患者發(fā)覺，很容易惡化轉變成肝硬化，小部分患者甚至會惡化成原發(fā)性肝癌，嚴重威脅著患者的生命健康。目前，我國乙型肝炎患者群體越來越多，越來越威脅著國民的生命健康[4-5]。

隨著醫(yī)療技術的發(fā)展，在臨床應用上熒光定量PCR法愈發(fā)的成熟，利用熒光定量PCR法檢測患者血清HBV-DNA載量成為主要的診斷鑒別乙肝的有效方法[6]。患者感染HBV主要在于乙肝病毒在宿主體內不斷進行復制，所以若可以對乙肝病毒的復制活動進行檢測，那對乙肝患者的診斷就會更加準確，而恰好HBV-DNA載量水平便可以很好的反應乙肝病毒的復制活動。有相關文獻表明，目前評價乙肝病毒在宿主體內的復制情況的“金標準”就是患者血清的HBV-DNA載量水平。測定HBV-DNA載量水平為診斷治療患者提供了可靠的依據，是非常重要的指標。但是，熒光定量PCR法的操作非常復雜，需要非常專業(yè)的高能力的人員和非常好的實驗室條件才可以進行，這種苛刻的條件嚴重束縛了這種技術在全國的推廣，只有那些具有非常好人力資源和技術資源的醫(yī)院才有能力獨自進行熒光定量PCR法的操作。此外，慢性乙型肝炎患者在經過一段時間的藥物治療后，一定比例的患者血清HBV-DNA會下降到較為低的水平，難以被檢測。因此，以其為依據，判定何時對患者停止抗病毒藥物的使用具有一定的局限性。

乙型肝炎病毒在感染患者正常的肝細胞過程中，由病毒S基因編碼的多肽的HBV外膜蛋白起到了重要的作用。正常健康者在受到HBV感染后的5到7天內，血清中就會有HBsAg的出現，在非活動攜帶狀態(tài)期、免疫耐受期、再活動期和免疫清除期，H B V感染以及部分肝硬化和肝癌患者的血清中均可檢測到H B s A g;在HBV感染的急性期，對患者的血清進行檢測，仍舊可以檢測到H B s A g，所以對患者血清進行HBsAg進行檢測一直是臨床上一種傳統(tǒng)的診斷HBV感染的方法。對于HBsAg的檢測方法，以往一般采用酶聯免疫吸附法（ELISA）進行檢測。有一部分文獻以該方法進行HBsAg檢測，得出了患者血清內HBsAg水平和HBV-DNA載量之間具有正的相關性的結論。但也有一部分文獻認為患者血清內HBsAg水平和HBV-DNA載量之間之間不具有相關性。

近幾年來，國際上對通過電化學發(fā)光法（ECLIA）檢測血清HBsAg含量而非ELISA法，分析HBsAg含量與HBV-DNA表現出了較強的興趣。本文也是在電化學發(fā)光法（ECLIA）的基礎上，探討電化學發(fā)光法（ECLIA）定量檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA（HBV-DNA）載量的關系，希望對診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。本次研究結果顯示，在170例患者當中，有151例患者血清檢測結果為HBsAg陽性，所占比率為88.82%，有96例患者血清檢測結果為HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%，有96例患者的血清檢測結果同時為HBsAg和HBV-DNA陽性，所占比率為56.47%。利用統(tǒng)計學知識，分析發(fā)現，HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關性，P>0.05。本次研究認為HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關性，這與一些文獻的結論相一致，但是也與采用ELISA方法檢測HBsAg的文獻結論不同。不同原因可能在于所用方法不同，也可能是由于研究對象本身所具有的特性不同。

綜上所述，ECLIA法定量檢測HBsAg和熒光定量PCR法檢測HBV-DNA載量之間不具有相關性，在對患者進行診斷時候，同時采用這兩種方法檢測HBsAg和HBV-DNA載量，可以為臨床提供更優(yōu)的診斷依據，提高治療效果。

參考文獻

[1]楊正南.磁微?；瘜W發(fā)光法檢測HBsAg與熒光定量PCR檢測HBV-DNA載量的關系[J].中國繼續(xù)醫(yī)學教育，2017，9（17）：63-64.

[2]楊正南.乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性與乙肝病毒核酸載量的相關性[J].當代醫(yī)藥論叢，2018，16（2）：174-175.

[3]周新媚，李秀華，李廣平等.電化學發(fā)光免疫法與酶聯免疫法檢測乙肝病毒標志物比較研究[J].中國醫(yī)藥科學，2017，7（23）：116-118.

[4]陸正賢，倪沈玨，曹利華等.電化學發(fā)光免疫法定量檢測乙肝病毒的臨床應用[J].當代醫(yī)學，2018，24（29）：107-108.

[5]劉昌文，季忠庶.ELISA法與電化學發(fā)光法在檢測乙肝病毒血清標志物結果中的對比應用研究[J].中國醫(yī)療器械信息，2017，23（17）：98-99.

[6]林麗.電化學發(fā)光法與酶聯免疫吸附法在乙肝病毒感染中的診斷價值[J].臨床合理用藥雜志，2019，12（12）：175-176.

作者簡介：

張繼東，男，1971年4月，河北張家口市，大學本科，副主任技師，檢驗研究， 河北省秦皇島市第三醫(yī)院檢驗科

曹立華，女，河北省秦皇島市第三醫(yī)院副院長 ，肝病專家

趙培利，女，河北省秦皇島市第三醫(yī)院醫(yī)教科

楊延源，女，河北省秦皇島市第三醫(yī)院公共衛(wèi)生科