糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型建立及INF-α干預(yù)機(jī)制研究

張國(guó)艷 張佳田 隋洪玉

摘要：目的? 探討糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型建立及TNF-α干預(yù)機(jī)制。方法? 選擇 SD大鼠60只作為對(duì)象，隨機(jī)數(shù)字法分為對(duì)照組和觀察組，各30只。對(duì)照組大鼠腹腔注射檸檬酸緩沖液，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上采用高糖高脂飼料聯(lián)合5%葡萄糖飲水喂養(yǎng)，誘導(dǎo)胰島素抵抗，2周后腹腔注射STZ，連續(xù)注射3 d，誘發(fā)持續(xù)高糖血癥。采用酶聯(lián)免疫吸附法在建模前、建模2周、建模4周檢測(cè)觀察組大鼠血糖、尿白蛋白、肌酐水平，同時(shí)檢測(cè)兩組大鼠TNF-α水平，分析糖尿病動(dòng)物模型建立及TNF-α干預(yù)機(jī)制。結(jié)果? ①對(duì)照組大鼠全身狀態(tài)良好，體質(zhì)量增加，皮毛光滑亮澤，觀察組大鼠建模成功后出現(xiàn)多食、多飲、多尿及生長(zhǎng)遲緩現(xiàn)象，成模4周后體重低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;②觀察組建模2周血糖水平（8.21±0.21）mmol/L，建模4周血糖水平（31.21±1.04）mmol/L，均高于對(duì)照組的（6.32±0.19）mmol/L、（6.74±0.24）mmol/L），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;③觀察組建模2周TNF-α水平為（3.03±0.23）mmol/L，建模4周TNF-α水平為（12.10±1.12）mmol/L，均高于對(duì)照組的（1.64±0.58）mmol/L、（1.69±0.62）mmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 高糖高脂飼料聯(lián)合濃度為5%葡萄糖飲水配合小劑量STZ能建立理想的糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型，可以明確糖尿病腎病發(fā)展伴有TNF-α炎癥因子水平升高，進(jìn)一步為TNF-α干預(yù)機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：高糖高脂飼料;STZ;糖尿病腎病;大鼠動(dòng)物模型;TNF-α

中圖分類號(hào)：R587.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.05.030

文章編號(hào)：1006-1959（2019）05-0101-02

Abstract：Objective? To investigate the establishment of animal models of diabetic nephropathy rats and the mechanism of TNF-a intervention. Methods? 60 SD rats were selected as the subjects. The random number method was divided into control group and observation group， 30 each. Rats in the control group were intraperitoneally injected with citrate buffer. The observation group was fed with high-sugar and high-fat diet combined with 5% dextrose water to induce insulin resistance. After 2 weeks， STZ was injected intraperitoneally for 3 consecutive days，induced persistent hyperglycemia.The levels of blood glucose， urinary albumin and creatinine in the observation group were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） before modeling， 2 weeks of modeling， and 4 weeks of modeling. The levels of TNF-α in the two groups were also measured and TNF-a intervention mechanism. Results? ①The rats in the control group had good systemic condition， the body mass increased， and the fur was smooth and shiny. The rats in the observation group showed polyphagia， polydipsia， polyuria and growth retardation after successful modeling. After 4 weeks of modeling， the body weight was lower than that of the control group，the difference was statistically significant （P<0.05）; ②The observation group modeling 2 weeks blood glucose level （8.21±0.21） mmol/L， modeling 4 weeks blood glucose level （31.21±1.04） mmol/L， they were higher than the control group （6.32±0.19） mmol/L， （6.74±0.24） mmol/L， the difference was statistically significant （P<0.05）; ③The level of TNF-α in the observation group was （3.03±0.23） mmol/L for 2 weeks， and the level of TNF-α was （12.10±1.12） mmol/L for 4 weeks， which was higher than that of the control group （1.64±0.58） mmol/L， （1.69±0.62） mmol/L， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion? The high concentration of high-fat and high-fat diet combined with 5% dextrose drinking water combined with low-dose STZ can establish an ideal animal model of diabetic nephropathy in rats. It can be confirmed that the development of diabetic nephropathy is accompanied by elevated levels of TNF-a inflammatory factors， and further intervention for TNF-α. Mechanism research laid the foundation.

Key words：High-sugar and high-fat diet;STZ;Diabetic nephropathy;Rat animal model;TNF-α

糖尿病（diabetes mellitus，DM）是臨床上高發(fā)的代謝性疾病，其并發(fā)癥多，預(yù)后差，且隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)[1]。而糖尿病腎病則是糖尿病患者中常見(jiàn)的合并癥之一[2]，起病隱匿，緩慢進(jìn)展，早期的腎臟病有關(guān)癥狀不多，增加了臨床診治難度。如果發(fā)展到末期會(huì)導(dǎo)致腎衰竭，且患者一旦發(fā)生腎臟損害，將會(huì)出現(xiàn)持續(xù)尿蛋白，嚴(yán)重者將會(huì)伴有腎功能衰竭[3，4]。目前，關(guān)于 TNF-α干預(yù)機(jī)制的研究較少，本文作者研究糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制及TNF-α干預(yù)機(jī)制，希望為臨床治療糖尿病腎病提供新的研究方向，同時(shí)希望通過(guò)研究TNF-α干預(yù)機(jī)制可以為臨床早期診斷糖尿病腎病的檢測(cè)指標(biāo)，通過(guò)多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，提高診斷率。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料? 選擇SD大鼠60只作為對(duì)象，60只SD大鼠，體重180～220 g，平均體重（205.11±8.32）g。按照隨機(jī)數(shù)字法分為對(duì)照組和觀察組，各30只。所選動(dòng)物均由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)時(shí)保持恒溫（20±2）℃，恒濕50%～60%，SD大鼠試驗(yàn)過(guò)程中均進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，光照12 h，建模前12 h禁食，本次試驗(yàn)均通過(guò)醫(yī)院動(dòng)物委員會(huì)批準(zhǔn)同意。主要儀器與試劑：STZ及枸櫞酸緩沖鹽（北京泰格美科技有限公司）、大鼠胰島素試劑盒（伊普瑞斯科技有限公司）、速眠新Ⅱ注射液（醫(yī)院提供）、臺(tái)式低速離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）等。

1.2方法? 建模方法：對(duì)照組大鼠腹腔注射檸檬酸緩沖液（25 mg/kg），觀察組同對(duì)照組，進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)[5]。觀察組采用高糖高脂飼料聯(lián)合5%葡萄糖飲水喂養(yǎng)，誘導(dǎo)胰島素抵抗，2周后根據(jù)30 mg/kg劑量腹腔注射STZ，連續(xù)注射3 d，誘發(fā)持續(xù)高糖血癥，連續(xù)觀察6周。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定2組大鼠TNF-α水平，分析糖尿病動(dòng)物模型建立及TNF-α干預(yù)機(jī)制。同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附法建模前、建模2周、建模4周分別檢測(cè)血糖、尿白蛋白、肌酐水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析? 本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，行？字2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（x±s）表示，行t檢驗(yàn)， P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組大鼠一般情況比較? 對(duì)照組大鼠由于未參加建模，大鼠全身狀態(tài)良好，體質(zhì)量增加，皮毛光滑亮澤;但是觀察組大鼠建模成功后出現(xiàn)多食、多飲、多尿及生長(zhǎng)遲緩現(xiàn)象。成模4周后觀察組大鼠體重值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖1。

2.2兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)血糖水平比較? 建模前觀察組與對(duì)照組血糖水平對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;建模2周、4周后觀察組血糖水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.3兩組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α水平比較? 建模前觀察組與對(duì)照組TNF-α水平對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;建模2周、4周后觀察組TNF-α水平水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

3討論

糖尿病腎病是糖尿病患者中常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一，也是糖尿病患者殘疾與死亡的重要原因。為了盡早明確DN診斷，早期確診并制定有效的措施干預(yù)對(duì)降低糖尿病的殘疾率具有重要意義。

臨床對(duì)糖尿病腎臟疾病患者檢測(cè)INF-α水平變化，可以觀察腎小球初期的損害情況，并可明確腎小球屏障、過(guò)濾等功能情況。本文研究結(jié)果顯示，建模2周、4周后觀察組血糖水平均高于對(duì)照組（P<0.05）;建模2周、4周后觀察組TNF-α水平均高于對(duì)照組（P<0.05）。由此可見(jiàn)，大鼠建模成功后TNF-α水平升高，TNF-α可能直接參與大鼠糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展，加強(qiáng)TNF-α水平測(cè)定能評(píng)估大鼠疾病嚴(yán)重程度，有助于指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，高糖高脂飼料聯(lián)合濃度為5%葡萄糖飲水配合小劑量STZ能建立理想的糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型，且可驗(yàn)證糖尿病腎病發(fā)展過(guò)程中伴有TNF-α炎癥因子水平升高，能用于糖尿病腎病早期動(dòng)物模型的研究，且可作為臨床診斷指標(biāo)。

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收稿日期：2018-12-22;修回日期：2018-1-9

編輯/成森