6種紅菇的形態(tài)學(xué)及rDNA-ITS測序鑒定

田慧敏 劉鐵志

（赤峰學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

紅菇屬（Russula Pers.）隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycotina），傘菌綱（Agaricomycetes），紅菇目（Russulales），紅菇科（Russulaceae）是高等擔(dān)子菌的重要類群之一[1]，主要形態(tài)特征為菌蓋顏色多樣:紅色、黃色、橙色、白色、綠色、褐色、黑色和藍(lán)色等，子實體菌絲組織中有較多膨大的球狀細(xì)胞，菌絲無鎖狀聯(lián)合，菌柄和菌肉較脆，菌柄常中空，孢子印白色至深黃色，孢子表面淀粉質(zhì)，有疣刺狀紋飾[2-3]。紅菇屬真菌是一類世界廣泛分布且種類眾多的真菌，本屬的絕大多數(shù)種通常與松屬、落葉松屬、冷杉屬、鐵杉屬、云杉屬等裸子植物，以及殼斗目、楊柳目、豆科、蓼科等種子植物形成外生菌根，在大型傘菌的系統(tǒng)學(xué)和菌根學(xué)的研究中占有重要的地位[4]。據(jù)統(tǒng)計，我國現(xiàn)有紅菇屬包含158個分類單元，包括152種，1亞種，5變種[5]。紅菇是一種食藥兼用的大型真菌，具有很高的營養(yǎng)價值，含有豐富的氨基酸，多數(shù)為人體必需氨基酸和各類維生素。紅菇外形美觀，口感鮮美，風(fēng)味獨特，享有“菇中之王”的美稱，紅菇中含有的多糖具有抗癌作用，對其進(jìn)行研究具有深遠(yuǎn)的意義和廣闊的前景[6-7]。但是紅菇屬真菌的擔(dān)子果形態(tài)、顏色、孢子、擔(dān)子等結(jié)構(gòu)容易隨著溫度、濕度等環(huán)境條件的變化而變化，在鑒定過程中僅用形態(tài)來進(jìn)行特征分類法鑒定區(qū)分容易產(chǎn)生較大的錯誤和爭議。因此筆者輔以分子手段對標(biāo)本進(jìn)行鑒定使結(jié)果更加具有說服力、更加準(zhǔn)確。內(nèi)蒙古賽罕烏拉國家級自然保護(hù)區(qū)、松山區(qū)神仙溝和盔甲山自然風(fēng)景區(qū)等地區(qū)主要植被為油松、落葉松、白樺、楊、柳、榛子等，氣候涼爽濕潤，適合紅菇屬真菌的生長，對該地紅菇屬真菌的準(zhǔn)確鑒定具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 供試標(biāo)本來源

供試標(biāo)本CFSZ 10356、CFSZ 10391、CFSZ 11336、CFSZ 13005、CFSZ 13010和CFSZ 13020于2013年8月和2016年8月、9月采集于賽罕烏拉國家級自然保護(hù)區(qū)、松山區(qū)神仙溝自然風(fēng)景區(qū)、盔甲山自然風(fēng)景區(qū)，在拍攝生境照片后，觀察形態(tài)、測量數(shù)據(jù)，晾干、編號，超低溫冷凍處理后存放于赤峰學(xué)院菌物標(biāo)本室（CFSZ）。

1.2 形態(tài)鑒定

采用宏觀特征、顯微結(jié)構(gòu)與化學(xué)試劑反應(yīng)相結(jié)合的方法，觀察新鮮子實體大小、形狀、顏色、附屬物、菌褶著生方式、菌柄等宏觀特征，用游標(biāo)卡尺測量菌蓋和菌柄大小，顏色的判斷主要依據(jù)采集時拍攝的彩色照片。宏觀特征使用體式顯微鏡（江南JSZ6）來觀察測量，數(shù)量特征以測定2～5個子實體為依據(jù)；顯微結(jié)構(gòu)觀察測量孢子、擔(dān)子、褶側(cè)囊體、褶緣囊體、菌蓋和菌柄表皮囊狀體、菌絲等結(jié)構(gòu)。孢子大小以30個不同孢子的長寬范圍為依據(jù)，擔(dān)子等其他特征以10～20個測量數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。將標(biāo)本的組織材料做成徒手切片，通常以4%～5%的KOH溶液作為浮載劑。擔(dān)子的測量數(shù)據(jù)包括小梗，菌絲和菌髓等的淀粉質(zhì)反應(yīng)或類糊精反應(yīng)是將材料置于Melzer氏試劑（碘0.5 g，碘化鉀1.5 g，水合氯醛22 g，蒸餾水20 mL）中來判斷。然后根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行鑒定和分類，用顯微照相系統(tǒng)（Olympus BX53）拍攝顯微結(jié)構(gòu)相片。孢子測量Q1（長寬比范圍）和Q2（長寬比平均值），Q2=Q（平均值）±Qsd（標(biāo)準(zhǔn)誤）。

1.3 ITS測序鑒定

1.3.1 基因組DNA的提取

干品子實體菌蓋部分經(jīng)過研磨稱量后，使用北京鼎國公司生產(chǎn)的DNA純化試劑盒提取其基因組DNA。

1.3.2 rDNA-ITS區(qū)PCR擴增及測序

擴增反應(yīng)在德國eppendorf公司的5331型擴增儀上進(jìn)行。PCR體系反應(yīng)總體積為50 μL PCRcolorless mix25 μL；20 μmol∕L ITS1∕ITS4 引物各 1 μL;模板DNA 2 μL；ddH2O22 μL。

PCR條件94℃預(yù)變性3 min，95℃變性40 s，58℃退火40 s，72℃延伸 1 min，共34個循環(huán)，最后于72℃補平5 min，終止溫度為4℃。

1.3.3 rDNA-ITS的鑒定

6個供試標(biāo)本的PCR擴增產(chǎn)物，經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，PCR產(chǎn)物膠回收純化后委托上海生工生物科技有限公司完成。將已測得的ITS序列，通過Chromas軟件進(jìn)行處理，整理出清晰的ITS序列，將得到的ITS序列在GenBank和UNITE數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast檢索，從結(jié)果中挑選出同源性較高的ITS序列，然后使用軟件MEGA5.1構(gòu)建發(fā)育樹，比較親緣關(guān)系，鑒定到種。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

根據(jù)擔(dān)子果宏觀形態(tài)、微觀結(jié)構(gòu)等特征鑒定結(jié)果:標(biāo)本CFSZ13020鑒定為褪綠紅菇R.atroglauca Einhell.，CFSZ 10356鑒定為佩拉妮婭紅菇R.pelargonia Niolle.，CFSZ 10391鑒定為非白紅菇R.exalbicans Melzer&Zvára.，莧菜紅菇 R.depallens Fr.，CFSZ 13005鑒定為菱紅菇R.vesca Fr.，香紅菇R.odorata Romagn。

2.1.1 褪綠紅菇Russula atroglauca Einhell.

子實體中等大。菌蓋直徑2.7～5.6 cm，初半球形，后漸平展，中央稍下凹，邊緣有時上翹，具短條紋，菌蓋灰綠色，中央色深，干后灰黑色，光滑，濕時稍粘，表皮下白色，菌肉白色、薄，約1～2 mm，無明顯氣味，傷不變色。菌褶米白色，干后變土黃色，直生，不等長、稀。菌柄長3.6～4.9 cm，粗1.1～1.5 cm，圓柱形向下漸細(xì)，白色中實（圖1，A、B）。

圖1 褪綠紅菇R.atroglauca Einhell.采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

孢子（6～8.5）μm×（5～7）μm[（Q1=（1～1.64），Q2=1.25±0.19]，孢子寬橢圓形或近球形，淺黃色，有獨立的小疣，淀粉質(zhì)（圖1，C）。擔(dān)子（26～45.5）μm×（5～12）μm，棒狀，上部膨大，無色，有四個小梗（圖1，D）。褶側(cè)囊狀體（67.5～98）μm×（7～12）μm，梭形，無色，頂端較細(xì)（圖1，E）。菌褶泡囊細(xì)胞無色，近球形，直徑（24～43）μm（圖1，F(xiàn)）。菌蓋表皮菌絲直立，淡黃色，頂端鈍圓，稍膨大，細(xì)長，棒狀，（41～80）μm×（5～7）μm（圖1，G、H）。菌柄表皮菌絲排列雜亂，無色，分枝，有隔膜，直徑（3～5）μm。

研究標(biāo)本:2016年8月20日，由田慧敏、田博宇、宋文鵬采集于內(nèi)蒙古赤峰市松山區(qū)盔甲山自然風(fēng)景區(qū)雜木林地上，CFSZ 13020。

該標(biāo)本與銅綠紅菇R.aeruginea，灰綠紅菇R.grisea外形相似，但是該標(biāo)本濕時灰綠色，表面稍粗糙，干后變?yōu)榛液谏?，孢子大小為?～7.7）μm×（4.8～6.7）μm，而銅綠紅菇R.aeruginea菌蓋銅綠色或黃綠色不變色，孢子偏大（6～10）μm×（5.5～9.5）μm[8-10]；而灰綠紅菇菌蓋青灰色或紫灰色，中部常褪為淡粉灰色，側(cè)囊體偏小（64～80）μm×（7～14）μm[9]，CFSZ 13020菌蓋全綠色，中央稍具紫色色調(diào)，干后色深，且囊狀體較大（67.8～98.4）μm×（7.2～12）μm；標(biāo)本CFSZ13020與R.atroglauca描述吻合，屬異褶亞屬subgen.Heterophyllidia Romagn，異褶組 sect.Heterophyllinae，灰色亞組subsect.Grisinae，該種分布于歐洲[10-11]，我國沒有分布，為中國新記錄種，經(jīng)濟價值不明。

2.1.2 香紅菇Russula odorata Romagn

子實體中等大，菌蓋直徑2.7～5.6 cm，起初半球形，后漸平展，中央稍下凹，邊緣有時上翹，具短條夾紋，菌蓋灰綠色，中央色深，干后灰黑色，光滑，濕時稍粘，表皮下白色，菌肉白色、薄，約1～2 mm，無明顯氣味，傷不變色。菌褶米白色，干后變土黃色，直生，不等長、稀。菌柄圓柱形向下漸細(xì)，白色，長3.6～4.9 cm，粗1.1～1.5 cm，中實（圖2，A、B）。

圖2 香紅菇R.odorata Romagn采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

孢子（7.5～9.0）μm×（6.0～8）μm（Q1=1.25～1.44，Q2=1.28±0.21），寬橢圓形或近球形，淺黃色，有獨立的小疣，淀粉質(zhì)（圖2，C）。擔(dān)子（16.8～36）μm×（8.4～12）μm，棒狀上部膨大，無色，內(nèi)含有大油滴，有四個小梗（圖2，D）。褶側(cè)囊狀體（36～55.2）μm×（7.2～12）μm，梭形，無色，內(nèi)含黃色顆粒，（圖2，E）。菌蓋表皮囊狀體豐富，棒狀，頂端稍膨大，具隔膜，有的隔膜多，直徑3.8～7.8 μm（圖2，F(xiàn)、G）。菌柄表皮由無色菌絲和膠化菌絲組成，膠化菌絲有黃色內(nèi)含物，直徑為6～8 μm；無色菌絲排列雜亂，分枝，有隔膜，直徑3.6～4.8 μm，菌柄由無色菌絲組成，菌絲頂端稍膨大，直徑為3～4.8 μm。

研究標(biāo)本:2016年9月10日，由田慧敏采集于赤峰市松山區(qū)神仙溝自然風(fēng)景區(qū)闊葉林白樺樹下，CFSZ 11336。

該標(biāo)本主要特點是菌蓋淺黃色，菌蓋表皮具隔膜的囊狀體，由于其顏色與我國報道的有較大差異，鑒定過程中較為困難，分子鑒定結(jié)果顯示，該種與多色紅菇R.versicolor、脆紅菇R.fragilis相似度較高。而R.versicolor菌蓋赤褐色至淺赤褐色，邊緣黃褐色、酒紅色至粉紫色，R.fragilis菌蓋主要為紫色色調(diào)，并夾雜有多種色調(diào)，且菌肉有苦味，二者菌蓋表皮均無囊狀體[2，10，12]，與研究標(biāo)本差別較大。而標(biāo)本有微弱的黃綠色調(diào)，可能是褪色后的特征，其他特征都與香紅菇R.odorata相符，故鑒定為R.odorata，屬于異褶亞屬subgen.Heterophyllidia Romagn，美麗組sect.Tenellula，subsect.Puellarinae，該種于2014年首次報道，分布于吉林和內(nèi)蒙古[2]，經(jīng)濟價值不明。

2.1.3 佩拉妮婭紅菇Russula pelargonia Niolle.

子實體中等，3.6～5.3 cm，扁半球形，中部稍下凹，邊緣具條紋，菌蓋暗紫灰色，中央色深。表皮整體易剝落，菌肉白色，表面光滑，濕時稍粘，表皮下淡紅色，無明顯氣味，傷不變色。菌褶白色，干后變土黃色或灰黃色，不等長，分叉，近直生。菌柄圓柱形向下漸粗，白色，長 2～4 cm，粗0.5～0.7 cm，中空（圖3，A、B）。

擔(dān)孢子（7.2～9.5）μm×（6.2～8.2）μm（Q1=1.0～1.5，Q2=1.21±0.11），寬橢圓形，無色，含油球，有1小尖，有獨立的長刺，淀粉質(zhì)（圖3，C、D）。擔(dān)子（26.0～43.0）μm×（9.5～12）μm，棒狀，上部膨大，無色，有四個小梗（圖 3，E）。褶側(cè)囊狀體（45.0～62.5）μm×（7.2～13.5）μm，梭形，無色。菌褶泡囊細(xì)胞無色，橢圓形、近方形或近球形，直徑（24～38.5）μm×（9.2～26.5）μm（圖3，F(xiàn)）。菌蓋表皮由雜亂的菌絲組成，表皮囊狀體多，（36～62.5）μm×（5.3～9.5）μm，棒狀，上部膨大，無色，菌絲無色，分枝，有隔，直徑2.5～5.0 μm（圖3，G），菌柄表皮囊狀體少，（38～67）μm×（5.3～9.5）μm，形狀同表皮囊狀體，菌絲無色，直徑2.4～5.0 μm。

研究標(biāo)本:2013年8月17日，由劉鐵志、田慧敏、萬威、吳晶采集于內(nèi)蒙古赤峰市巴林右旗（43°12′～44°28′N，118°11′～120°05′E），賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)，慶云山景區(qū)，雜樹林地上，散生，CFSZ10356。

該標(biāo)本與R.innocua、堇紫紅菇R.violacea、R.azurea和花蓋菇R.cyanoxantha相似，而R.innocua菌蓋淺灰綠色，孢子較大（8～11）μm×（6.4～8.5）μm，菌蓋表皮囊狀體和菌絲頂端很大都較該標(biāo)本大；R.violacea菌蓋堇紫色、丁香紫色，菌褶后期變?yōu)辄S色，R.azurea菌蓋葡萄紫色，顏色很暗，中間具顆粒狀物或粉狀物，菌蓋表皮許多菌絲附結(jié)晶[8-10]；R.cyanoxantha菌肉無味，孢子很大長達(dá)12 μm，褶側(cè)囊體很多，無表皮囊體[9]。標(biāo)本菌蓋暗灰紫色，孢子（7.2～9.6）μm×（6.2～8.2）μm，有長刺，往往有脊線相連，菌蓋表皮菌絲細(xì)長，不具附屬物，形態(tài)學(xué)特征與R.pelargonia相符[10-13]，因此鑒定為R.pelargonia，紅菇亞屬subgen.Russula Romagn，紅菇組sect.Russula，紫羅蘭亞組subsect.Violacinae。該種分布于歐洲、亞洲太平洋西南，俄羅斯[14]。在中國沒有分布，為首次描述記錄，為中國新記錄種。

圖3 佩拉妮婭紅菇R.pelargonia Niolle.采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

2.1.4 莧菜紅菇Russula depallens Fr.

子實體中等，3.5～7 cm，扁半球形，中部稍下凹，邊緣平滑，具明顯條紋，菌蓋淡粉色、紫紅色、中央色深，后期有的褪色，表面光滑，濕時粘，表皮1∕2易剝落，菌肉白色，表皮下淡紅色。無明顯氣味，傷不變色。菌褶白色，干后變土黃色，不等長，有短菌褶，近直生。菌柄圓柱形，等粗，白色，傷變赭色，有的上部有淡粉色，長6～8 cm，粗0.9～1.5 cm，中空（圖4，A、B）。

孢 子（7.2～12） μm ×（6.5～8.0） μm（Q1=1.03～1.40，Q2=1.21±0.11），寬橢圓形，無色，有一小尖，獨立的長刺，刺間無連線，淀粉質(zhì)（圖4，C）。擔(dān)子（33.5～44）μm×（9.5～13）μm，棒狀，上部膨大，無色，有四個小梗，梗長達(dá)6～7.2 μm（圖4，D）。褶側(cè)囊狀體（48～96）μm×（7～12）μm，披尖形，有黃色內(nèi)含物，頂部有長柄，長達(dá)5～9.5 μm（圖4，E）。菌蓋表皮菌絲直立，無色透明，寬1.5～4 μm，部分膨大，末端鈍圓，有黃色內(nèi)含物，有的具隔膜，膨大部分寬7～9.5 μm（圖 4，F(xiàn)）。菌柄表皮由菌絲和泡囊細(xì)胞組成，菌絲無色，分隔，直徑3～5 μm。菌褶泡囊細(xì)胞無色，橢圓形、近球形，（14.4～45.5）μm×（14.4～33.5）μm（圖4，G）。

研究標(biāo)本:2013年8月17日，由劉鐵志、田慧敏、萬威、吳晶采集于內(nèi)蒙古赤峰市巴林右旗（43°12′～44°28′N，118°11′～120°05′E），賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)，慶云山景區(qū)，白樺林地，散生，CFSZ 10391。

分子水平分析顯示該標(biāo)本與變紅紅菇R.renidens、非白紅菇R.exalbicans相似，但是非白紅菇菌蓋酒紅色，褶側(cè)囊體小，最大的可達(dá)70 μm，菌肉辣味，菌蓋表皮具有囊狀體[5，10]。而該標(biāo)本菌蓋多為莧菜紅色，后期會有褪色現(xiàn)象，褶側(cè)囊體很大（48～96）μm×（7.2～12）μm，菌蓋表皮無囊狀體，為紅菇亞屬subgen.Russula，sect.Russula，類全緣亞組subsect.Integroidinae。該種在國內(nèi)分布廣泛，但是內(nèi)蒙古地區(qū)未見報道，為內(nèi)蒙古新記錄種，可食用[8-9]。

2.1.5 非白紅菇Russula exalbicansMelzer&Zvára.

子實體中等大，菌蓋直徑2.7～5.6 cm，起初半球形，后漸平展，中央稍下凹，邊緣有時上翹，具短條紋，菌蓋灰綠色，中央色深，干后灰黑色，光滑，濕時稍粘。表皮下白色，菌肉白色，薄，約1～2 mm，無明顯氣味，傷不變色，有辣味。菌褶白色，干后變淺黃色，孢子印奶白色，直生，不等長，稀。菌柄圓柱形向下漸細(xì)，白色長 3.6～4.9 cm，粗 1.1～1.5 cm，中實（圖5，A、B）。

孢 子（7.2～12）μm ×（5.0～10）μm（Q1=1.25～1.44，Q2=1.28±0.21），寬橢圓形或近球形，淺黃色，有小疣，小疣之間有脊線相連，淀粉質(zhì)（圖5，C）。擔(dān)子（21.5～47.5）μm×（9.5～12）μm，棒狀上部膨大，無色，內(nèi)含有大油滴，有四個小梗（圖5，D）。褶側(cè)囊狀體（38.4～70）μm×（7.2～12）μm，梭形，無色，內(nèi)含黃色顆粒（圖5，E）。菌蓋表皮囊狀體豐富，（41～80.4）μm×（8～12）μm，細(xì)長，棒狀，頂端膨大（圖5，F(xiàn)、G）。菌柄表皮菌絲皮排列雜亂，無色，分枝，有隔膜，直徑3～5 μm。

圖4 莧紅紅菇R.depallens Fr.采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

研究標(biāo)本:2016年8月30日，由田慧敏、田博宇、宋文鵬采集于內(nèi)蒙古赤峰市松山區(qū)城子鄉(xiāng)盔甲山自然風(fēng)景區(qū)雜木林林地上，CFSZ 13010。

該標(biāo)本與細(xì)弱紅菇R.gracillima相似，而細(xì)弱紅菇菌蓋紫褐色、暗紫色至褐紫羅蘭色，不褪色，菌蓋表皮膨大菌絲無色，沒有內(nèi)含物[7，12]。而標(biāo)本菌蓋酒紅色，有時褪色，菌蓋表皮具囊狀體。該標(biāo)本與非白紅菇 R.exalbicans相符[5，10-11]，為紅菇亞屬 subgen.Russula Romagn，紅菇組sect.Russula，辣味亞組subsect.Sardoninae，該種為內(nèi)蒙古新記錄種，可食用。

2.1.6 菱紅菇Russula vesca Fr.

子實體中等大，菌蓋直徑3.6～4.6 cm，起初半球形，后漸平展，邊緣內(nèi)卷，紅褐色、棕褐色，傷色變深，表面光滑，濕時稍粘，表皮下白色（圖6，A）。菌肉白色，薄，約1～2 mm，無明顯氣味，傷不變色。菌褶白色，干后變黃色，直生，不等長，密。菌柄圓柱形向下漸細(xì)，白色，傷變赭色，中實，長3.2～4.5 cm，粗1～1.4 cm。

孢 子（6～9）μm ×（5～6）μm（Q1=1.04～1.5，Q2=1.35±0.15）寬橢圓形或近球形，淺黃色，有獨立的小刺，中間有一大油滴，淀粉質(zhì)（圖6，B）。擔(dān)子（29～48）μm×（6～9.5）μm，棒狀上部膨大，無色，有淺黃色內(nèi)含物有四個小梗，梗長4～5 μm（圖6，C）。囊狀體少，梭形，內(nèi)含黃色內(nèi)含物，（50～77）μm×（9.5～11.5）μm（圖6，D）。菌褶泡囊細(xì)胞無色，近球形，直徑（20～33.5）μm×（14.4～22）μm，菌蓋表皮菌絲有的具2.4～4.3 μm，細(xì)長，棒狀，有的頂端變細(xì)，淡黃色（圖5E），菌柄表皮菌絲排列雜亂，無色，分枝，有隔膜，直徑2.4～5 μm。

研究標(biāo)本:2016年8月30日，牛夢枝采集于內(nèi)蒙古赤峰市松山區(qū)城子鄉(xiāng)盔甲山自然風(fēng)景區(qū)油松林地上，CFSZ 13005。

圖5 非白紅菇R.exalbicans Melzer&Zvára.采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

圖6 菱紅菇R.vesca Fr.采集樣品子實體形態(tài)及微觀結(jié)構(gòu)

該種主要特點是菌蓋顏色多變，標(biāo)本菌蓋顏色為紅褐色，菌蓋表皮菌絲直立，寬2.4～4.3 μm，也發(fā)現(xiàn)有的微黃色，頂端變細(xì)，屬異褶亞屬subgen.Heterophyllidia Romagn異褶組sect.Heterophyllinae Maire；subsect.Heterophyllinae異褶亞屬subgen.Heterophyllidia Romagn。該菌可食用，味道鮮美，含有多種營養(yǎng)成分[2，8-9，16]。

2.2 rDNA-ITS測序鑒定結(jié)果

供試樣品子實體DNA序列PCR擴增產(chǎn)物測序結(jié)果為:CFSZ 13020序列長度為650 bp，NCBI登錄號為MG367260；CFSZ 10356序列長度為690 bp，NCBI登錄號為MG367265；CFSZ 10391序列長度為650 bp，NCBI登錄號為MG367264；CFSZ13010序列長度為648 bp，登錄號為MG367261；CFSZ13005序列長度為660 bp左右，NCBI登錄號為MG367262；CFSZ 11366序列長度為664 bp，NCBI登錄號為MG367263。

2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析

對供試樣品的ITS序列及相似序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明，六個種都聚集在紅菇屬（Russula）。6個樣品的ITS序列系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7）。分析結(jié)果表明，33個序列聚為兩大分支，第一分支包括紅菇亞屬Subgen.Russula.，包括紅菇組sect.Russula和嬌弱組sect.Tenellula，其中嬌弱組sect.Tenellula只有一個分支美麗亞組 subsect.Puellarinae（R.odorata，R.versicolor，R.nauseosa，R.innocua）。紅菇組 sect.Russula分為三個分支非白亞組subsect.Exalbicantinaes（R.exalbicans）、類全緣亞組 subsect.Integrinae（R.depal-lens，R.cavipes，R.subvinosa）、紫羅蘭亞組 subsect.Violacinae（R.pelargonia，R.lilacea，R.inocula，R.violacea）。

圖7 供試樣品及來自Genbank的最相似物種的ITS序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹

第二分支為異褶亞屬（subgen.Heterophyllidia Romagn），該亞屬又分為兩類:一類為灰色組sect.Griseinae包括 R.aeruginea，R.grisea和 R.atroglauca（CFSZ13020），另一類為異褶組sect.Heterophyllinae包括R.vesca（CFSZ13005），R.mustilina，R.heterophylla。

標(biāo)本CFSZ 13020和R.atroglauca聚在一起，標(biāo)本CFSZ 11336與R.odorata聚在一起，CFSZ 13010與R.exabican聚在一起，CFSZ 10391與R.depallens聚在一起，CFSZ 10356和R.pelargonia聚在一起，CFSZ 13005與R.vesca聚在一起，再結(jié)合宏觀特征和微觀結(jié)構(gòu)將CFSZ 13020鑒定為褪綠紅菇R.atroglauca，Bootstrap支持率為100%，CFSZ 11336鑒定為香紅菇R.odorata，CFSZ 13005鑒定為菱紅菇 R.vesca，Bootstrap支持率為99%，CFSZ 13010為非白紅菇R.exabican，CFSZ 10391 為 莧 菜 紅 菇 R.depallens，CFSZ 10356為佩拉妮婭紅菇R.pelargonia，Bootstrap支持率為99%。

3 小結(jié)

研究主要參照Sanar（i1998）的分類系統(tǒng)，紅菇屬分為緊致亞屬subgen.Compactae、全緣亞屬subgen.Ingratula、美麗紅菇亞屬 subgen.Amoenula，異褶紅菇亞屬subgen.Heterophyllidia，殼狀紅菇亞屬subgen.Incrustatula等6個亞屬。進(jìn)化樹顯示結(jié)果與參照的分類系統(tǒng)基本吻合，因此筆者認(rèn)為該分類系統(tǒng)較為科學(xué)。對6種紅菇進(jìn)行了詳細(xì)的描述，其中2個為中國新記錄種，2個為內(nèi)蒙古新記錄種，同時佩拉妮婭R.pelargonia在國內(nèi)沒有描述記錄，本文進(jìn)行了詳細(xì)描述并配以圖片，為該種的鑒定提供了相關(guān)借鑒資料，補充了內(nèi)蒙古甚至我國的菌物資源，為相關(guān)菌物資源開發(fā)利用提供一定依據(jù)。