乳腺癌患者新輔助化療前后Ki-67、Tau表達水平與化療效果的關(guān)系分析

張凱　陳然　羅智輝

【摘要】 目的：研究新輔助化療前后乳腺癌患者Ki-67、Tau表達水平與化療效果的關(guān)系。方法：回顧性分析本院2015年5月-2018年5月收治的乳腺癌患者67例，均接受紫衫類藥物新輔助化療后實施手術(shù)治療，并取手術(shù)前后標本進行病理檢測。觀察化療前后乳腺標本中Ki-67、Tau表達水平，統(tǒng)計新輔助化療后療效情況及其與Ki-67、Tau表達水平間關(guān)系。結(jié)果：新輔助化療后乳腺標本中Ki-67蛋白陽性表達低于新輔助化療前（P<0.05），新輔助化療后乳腺標本中Tau蛋白陽性表達高于新輔助化療前（P<0.05）。67例乳腺癌患者中完全緩解（complete response，CR）患者4例（5.97%）、部分緩解（partial response，PR）患者42例（62.69%）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）患者21例（31.34%）、疾病進展（progressive disease，PD）患者無。新輔助化療后CR+PR及SD患者乳腺組織中Ki-67表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），新輔助化療后CR+PR患者乳腺組織中Tau陽性表達高于SD患者（P<0.05）。結(jié)論：紫衫類藥物新輔助化療方案對乳腺癌治療效果較好，其近期治療效果可能與乳腺癌組織中Ki-67、Tau蛋白表達水平有關(guān)，臨床治療應(yīng)予以重視。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌; 新輔助化療; 紫杉類藥物; Ki-67蛋白; Tau蛋白

Relationship Between Ki-67，Tau Protein Expression Levels and Chemotherapy Effect in Breast Cancer Patients Before and After Neoadjuvant Chemotherapy/ZHANG Kai，CHEN Ran，LUO Zhihui.//Medical Innovation of China，2019，16（22）：0-066

【Abstract】 Objective：To study the relationship between Ki-67，Tau proteinexpression levels and chemotherapy effect in breast cancer patients before and after neoadjuvant chemotherapy.Method：A retrospective analysis was performed on 67 patients with breast cancer admitted to the hospital from May 2015 to May 2018.All patients were given surgery treatment after neoadjuvant chemotherapy with Taxane drugs.The preoperative and postoperative specimens were collected to conduct pathological examination.The expression levels of Ki-67 and Tauprotein in breast specimens before and after chemotherapy were observed.The curative effect after neoadjuvant chemotherapy and its relationship with expression levels of Ki-67 and Tauprotein were statistically analyzed.

Result：After neoadjuvant chemotherapy，positive expression of Ki-67 protein in breast specimens was lower than that before neoadjuvant chemotherapy（P<0.05）.While positive expression of Tau protein in breast specimens after neoadjuvant chemotherapy was higher than that before neoadjuvant chemotherapy（P<0.05）.Of the 67 breast cancer patients，there were 4 cases（5.97%）with complete response（CR），42 cases（62.69%）with partial response（PR），21 cases（31.34%）with stable disease（SD）.There was no one with progressive disease（PD）.After neoadjuvant chemotherapy，there was no statistically significant difference in the expression of of Ki-67 in breast tissue of CR+PR and SD patients（P>0.05）.After neoadjuvant chemotherapy，positive expression of Tauproteinin breast tissue of CR+PR patients was higher than that of SD patients（P<0.05）.Conclusion：The curative effect of neoadjuvant chemotherapy with Taxane drugs is relatively better on breast cancer.The short-term curative effect may be related to expression levels of Ki-67 and Tau protein in breast cancer tissues，the clinical treatment should pay attention.

【Key words】 Breast cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Taxane drug; Ki-67 protein; Tau protein

First-authors address：Northern Guangdong Peoples Hospital Affiliated to Shantou University，Shaoguan 512026，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.22.017

乳腺癌作為女性高發(fā)惡性腫瘤之一，高發(fā)群體為乳腺癌家族史者、未生育者或生育晚者，隨著人均生活水平變化總體發(fā)病率呈上升趨勢，且年輕化趨勢明顯，嚴重威脅女性身心健康及生活質(zhì)量[1]。近年早期乳腺癌發(fā)現(xiàn)和綜合治療水平不斷提高，癌癥死亡率逐步下降，其中早期患者多采用局部受損與治療并重的綜合治療模式，而中晚期患者則多采用新輔助化療、手術(shù)、術(shù)后放療等綜合治療模式[2]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者實施手術(shù)或放療前實施新輔助化療，且以紫杉醇類化療藥物為主，其能有效縮小腫瘤病灶、降低分期、減少遠處傳播及擴散等，進而改善預(yù)后[3-4]。Ki-67蛋白主要反映乳腺癌細胞增殖活性，是乳腺癌預(yù)后預(yù)測重要參考指標之一;Tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白，在正常及癌變?nèi)橄偕掀ぜ毎芯斜磉_，有研究發(fā)現(xiàn)Tau基因低表達能增加紫杉醇化療敏感性[5-6]?；诖?，本研究對其中以紫杉醇類化療藥物為主，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析本院2015年5月-2018年5月收治的乳腺癌患者67例，均接受新輔助化療，于本院病理科取其乳腺組織樣本進行研究。納入標準：（1）均經(jīng)空心針穿刺活檢，并參照《2008年NCCN乳腺癌臨床實踐指南（中國版）解讀》進行分期及確診[7];（2）腫瘤<3 cm且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤≥3 cm且伴或不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;（3）符合新輔助化療治療標準，且無治療禁忌證;該項研究。排除標準：（1）就診前已接受化療、內(nèi)分泌治療、局部放療等;（2）針斷為非乳腺癌或合并其他腫瘤;（3）化療前血常規(guī)、肝腎功能、心電圖等存在明顯異常;（4）經(jīng)影像學檢查（全胸X線、腹部B超、全身骨掃描等）發(fā)現(xiàn)存在遠處轉(zhuǎn)移。所有患者年齡30～65歲，平均（47.52±10.84）歲;患病部位：左側(cè)37例，右側(cè)29例，雙側(cè)1例;臨床分期（TNM）：Ⅱ期46例，Ⅲ期21例;絕經(jīng)前36例，絕經(jīng)后31例。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法 所有患者均接受新輔助化療，化療方案均采用EC-P雙周的劑量密度方案，即表柔比星

90 mg/m2，環(huán)磷酰胺600 mg/m2，兩周為1個周期，共4個周期;序貫紫杉醇175 mg/m2，兩周為1個周期，共4個周期，Her-2陽性者赫賽汀與紫杉醇聯(lián)用。取新輔助化療前后乳腺組織，4%甲醇固定，并使用石蠟包埋，做成4 μm連續(xù)切片。使用時拷片（1 h，65 ℃）、脫蠟（二甲苯）及梯度脫水，并進行如下處理：第1天使用檸檬酸緩沖液（pH=6.0）高壓修復(fù)（5 min）+磷酸緩沖鹽溶液沖洗（3次）;3%過氧化氫封閉（8 min）+磷酸緩沖鹽溶液沖洗（3次）;5%牛血清白蛋白封閉（20 min）;抗ACLT8兔源多克隆抗體（1︰100），并于4℃恒溫箱中孵育過夜。第2天使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗（3次）;鏈霉素標記過的山羊抗兔Ⅱ抗常溫孵育（30 min）+磷酸緩沖鹽溶液沖洗（3次）;二氨基聯(lián)苯胺試劑顯色（5 min）;蘇木素對細胞核進行復(fù)染，并脫水、封片

1.3 觀察指標與判定標準 新輔助化療前后Ki-67、Tau表達水平判斷是對切片圖像進行采集，并在顯微鏡下觀察陽性區(qū)域（10倍鏡）及陽性細胞計數(shù)（40倍鏡）。陽性區(qū)域標準：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性計數(shù)比例標準：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，50%以上為3分;總評分：0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～5分為中陽性（++），6分為強陽性（+++）。觀察兩組新輔助化療后療效情況及其與Ki-67、Tau表達水平的關(guān)系，其療效參照實體瘤療效評價標準擬定，完全緩解（complete response，CR）：腫瘤病灶完全消失;部分緩解（partial response，PR）：腫瘤面積減小≥50%;疾病穩(wěn)定（table disease，SD）：腫瘤面積減小<50%，或腫瘤新增面積≤25%;疾病進展（progressive disease，PD）：腫瘤新增面積>25%或出現(xiàn)新腫瘤灶[8]。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，等級資料的比較采用秩和檢驗，所有檢測均為雙側(cè)檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 化療前后乳腺組織中Ki-67、Tau表達變化比較 新輔助化療后乳腺組織中Ki-67蛋白陽性表達低于新輔助化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），新輔助化療后乳腺組織中Tau蛋白陽性表達高于新輔助化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 化療后乳腺組織中Ki-67、Tau表達與療效關(guān)系 67例乳腺癌患者中CR患者4例（5.97%）、PR患者42例（62.69%）、SD患者21例（31.34%）、PD患者無。新輔助化療后CR+PR及SD患者乳腺組織中Ki-67表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），新輔助化療后CR+PR患者乳腺組織中Tau陽性表達高于SD患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

乳腺癌是女性乳腺高發(fā)疾病之一，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，新輔助化療以成為局部晚期乳腺癌標準治療一部分，其主要是在術(shù)前進行全身性、周期性細胞毒性藥物治療，進而降低腫瘤分期、增加保乳率、提高手術(shù)切除率等[9]。紫衫類藥物是近年較常用的新輔助化療藥物之一，其作用靶點為微血管，通過與微血管特定位點結(jié)合，促進并穩(wěn)定微管蛋白聚合，導(dǎo)致染色體斷裂的同時抑制細胞復(fù)制和移行，使癌細胞無法進行有絲分裂，進而達到抗腫瘤效果[10]。近年有研究發(fā)現(xiàn)，紫杉醇類藥物耐藥機制可能與β微管蛋白、bcl-2、P-糖蛋白等有關(guān)，而化療會增加患者化療周期及毒副反應(yīng)。因此，尋找合適的藥物療效預(yù)測分子標志物顯得尤為重要[11]。

Ki-67抗原作為乳腺癌預(yù)后重要參考指標之一，主要是判斷癌組織細胞增殖活性，同時還可作為組織細胞生長良、惡性狀態(tài)判斷標記物，但其表達狀態(tài)是否對新輔助化療存在影響尚存有爭議[12]。Ki-67抗原在乳腺癌中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，且與較差組織分級、晚期臨床分期及預(yù)后較差等因素密切相關(guān)，且過表達患者總生存率及無病生存率均低于低表達患者[13-14]。本文研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者經(jīng)新輔助化療治療后Ki-67蛋白陽性表達降低（P<0.05），且CR+PR及SD患者乳腺組織表達情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），這與郭金培等[15]研究結(jié)果類似，提示新輔助化療藥物可在一定程度上抑制腫瘤細胞增殖。

Tau是一種具有極性、帶電荷、高可溶性的微血管相關(guān)蛋白，其主要功能是促進微管形成并保持微管穩(wěn)定，同時參與細胞形態(tài)維持、信息傳遞及分裂等生物學過程[16]。近年對Tau蛋白與乳腺癌患者研究日益增多，發(fā)現(xiàn)部分患者無法從紫衫類藥物化療中獲益，Tau蛋白可能是一種新型潛在耐藥因子，因Tau蛋白正常功能與紫杉醇相似，且兩者結(jié)合相同的結(jié)構(gòu)域，Tau蛋白表達下調(diào)可在一定程度上增加紫杉醇類藥物敏感性，其有望成為紫杉類化療反應(yīng)性標記物[17-18]。鄧文靜等[19]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者中雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽性患者Tau蛋白呈高表達，因癌變細胞中ER出現(xiàn)部分或全部缺失，且ER陽性患者預(yù)后優(yōu)于陰性患者，本文研究結(jié)果與此類似，新輔助化療后乳腺癌患者Tau蛋白陽性率較高（P<0.05），且化療后CR+PR患者Tau蛋白陽性率高于SD患者（P<0.05）。

綜上所述，乳腺癌患者使用紫杉類新輔助化療藥物治療效果可能與其調(diào)節(jié)體內(nèi)Ki-67及Tau蛋白有關(guān)，且Tau蛋白低表達可能增加紫杉醇化療敏感性，但本研究樣本量有限，對紫杉醇類藥物耐藥機制仍屬于探究階段，需尋找更多臨床證據(jù)研究Tau蛋白表達狀態(tài)與紫衫類藥物新輔助化療敏感性間關(guān)系。

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（收稿日期：2019-07-02） （本文編輯：田婧）