CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷抗血小板作用的關(guān)系研究

高楓 蘇偉 徐斌

[摘要] 目的 探討CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷抗血小板作用的關(guān)系。 方法 收集2017年12月25日～2018年10月9日我院治療的250例冠心病患者，通過(guò)基因芯片檢測(cè)試劑盒鑒定CYP2C19基因型，根據(jù)CYP2C19基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果將患者分為野生型組和突變型組。通過(guò)光比濁法測(cè)定兩組患者的血小板抑制率，并比較兩組患者的氯吡格雷抵抗情況。 結(jié)果 250例患者中，CYP2C19野生型145例（58.00%），突變型105例（42.00%）。野生型組的血小板抑制率（75.96±11.50）%顯著高于突變型組（47.13±7.97）%（P<0.05）。250例患者中共有59例（23.6%）發(fā)生氯吡格雷抵抗現(xiàn)象，其中野生型組13例（8.97%），突變型組46例（43.81%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 CYP2C19基因多態(tài)性、糖尿病、體質(zhì)指數(shù)是氯吡格雷抵抗的重要影響因素，檢測(cè)CYP2C19基因多態(tài)性、是否患有糖尿病、體質(zhì)指數(shù)有助于指導(dǎo)患者的抗血小板治療。

[關(guān)鍵詞] CYP2C19基因;基因多態(tài)性;氯吡格雷;抗血小板

[中圖分類(lèi)號(hào)] R541.4? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2019）21-0039-04

Relationship between CYP2C19 gene polymorphism and anti-platelet effect of clopidogrel

GAO Feng SU Wei XU Bin

Department of Cardiology， Wuxi Traditional Chinese Medicine Hospital in Jiangsu Province， Wuxi? ?214000， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between CYP2C19 gene polymorphism and anti-platelet effect of clopidogrel. Methods A total of 250 patients with coronary heart disease who were treated in our hospital from December 25， 2017 to October 9， 2018 were enrolled. The CYP2C19 genotype was identified by the gene chip detection kit. And the patients were divided into wild type group and mutant group according to the CYP2C19 gene polymorphism test results. The platelet inhibition rate of the two groups was determined by turbidimetry， and the clopidogrel resistance of the two groups was compared. Results Of the 250 patients， 145 cases（58.00%） had CYP2C19 wild type and 105 cases（42.00%） had mutant type. The platelet inhibition rate of the wild type group（75.96±11.50）% was significantly higher than that of the mutant group（47.13±7.97）% （P<0.05）. A total of 59 cases（23.6%） of the 250 patients developed clopidogrel resistance， including 13 cases in the wildtype group（8.97%） and 46 cases in the mutant group（43.81%）. The difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion CYP2C19 gene polymorphism， diabetes and body mass index are important factors influencing clopidogrel resistance. Detection of CYP2C19 gene polymorphism， diabetes， and body mass index can help guide patients with antiplatelet therapy.

[Key words] CYP2C19 gene; Gene polymorphism; Clopidogrel; Antiplatelet

冠心?。╟oronary atherosclerotic heart disease）是一類(lèi)因血管狹窄或阻塞造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病。近年來(lái)，冠心病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，已成為我國(guó)城鄉(xiāng)人口主要的死亡和傷殘?jiān)騕1-3]。目前冠心病的治療方法有限，療效不佳，因此如何有效防治冠心病是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。

有研究顯示，氯吡格雷能夠有效降低動(dòng)脈粥樣硬化性血管疾病患者血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)，是冠心病預(yù)防的推薦藥物[4-5]。氯吡格雷是種噻吩并吡啶類(lèi)衍生物，需經(jīng)體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為活性物質(zhì)才能發(fā)揮抗血小板的作用。而細(xì)胞色素P450酶系的CYP2C19參與氯吡格雷的兩步代謝，是氯吡格雷代謝的關(guān)鍵酶[6-7]。盡管氯吡格雷能夠有效抗血小板，但是仍有部分患者使用氯吡格雷后發(fā)生臨床血栓栓塞事件[8-9]。本研究旨在通過(guò)對(duì)250例來(lái)我院進(jìn)行治療的冠心病患者行CYP2C19基因多態(tài)性檢測(cè)，研究其對(duì)血小板抑制率及氯吡格雷抵抗現(xiàn)象的影響，以明確其是否對(duì)冠心病患者的抗血小板治療有指導(dǎo)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年12月25日～2018年10月9日我院治療的250例冠心病患者為研究對(duì)象，診斷符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT或核磁共振證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）對(duì)氯吡格雷過(guò)敏、不耐受或者近期使用過(guò)氯吡格雷者;（2）血小板計(jì)數(shù)<1.0×1011個(gè)/L;（3）凝血功能異常者;（4）近期有腦出血等出血性疾病者。本研究均獲得患者的許可，且所有患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 CYP2C19基因型檢測(cè)? 利用基因芯片檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理，根據(jù)說(shuō)明書(shū)提取2 mL靜脈血中的脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA），通過(guò)Primer5軟件對(duì)CYP2C19基因引物進(jìn)行設(shè)計(jì)。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸60 s，30個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min，4℃保溫。程序結(jié)束后將PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。收集電泳產(chǎn)物進(jìn)行純化測(cè)序以鑒定CYP2C19的基因型。根據(jù)CYP2C19的基因型，將患者分為野生型組和突變型組。

1.2.2 兩組患者臨床資料比較? 制作病歷表格，并詳細(xì)記錄患者的年齡、性別、身高、體重、糖尿病史以及入院時(shí)的血小板計(jì)數(shù)、高低密度脂蛋白等一般臨床資料。待CYP2C19基因型鑒定分組后，比較兩組患者的臨床資料。

1.2.3血小板凝集功能檢測(cè)? 所有患者入院后均口服氯吡格雷[生產(chǎn)企業(yè)：賽諾菲（杭州）制藥有限公司，批號(hào)：J20171029]，用藥前空腹采集靜脈血，置于抗凝管中，以5 μmol/L ADP作為血小板凝集誘導(dǎo)劑，并通過(guò)光比濁法測(cè)定血小板抑制率，以百分比表示。用藥7 d后再次測(cè)定血小板抑制率。所有血樣均在2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件分析。其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。篩選出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量后，進(jìn)一步采用多自變量Logistic回歸分析分析影響氯吡格雷抗血小板的危險(xiǎn)因素;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CYP2C19基因型檢測(cè)結(jié)果

250例患者中，CYP2C19的3種基因型GG、GA、AA分別為145例（58.00%）、94例（37.60%）、11例（4.40%），其中GG為野生型（CYP2C19*1/*1），GA和AA為突變基因型（CYP2C19*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3）。根據(jù)基因型檢測(cè)結(jié)果，將250例患者分為野生型組（n=145）和突變型組（n=105）。

2.2 兩組患者臨床資料比較

比較兩組患者的年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)、吸煙史、高血壓、糖尿病、甘油三酯、總膽固醇、HDL-C、LDL-C、血肌酐以及血小板計(jì)數(shù)等臨床資料，結(jié)果顯示兩組患者以上臨床數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明兩組患者具有可比性。見(jiàn)表1。

2.3 血小板凝集功能檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)光比濁法測(cè)定兩組患者的二磷酸腺苷誘導(dǎo)的血小板抑制率分別為野生型組（75.96±11.50）%和突變型組（47.13±7.97）%，且野生型組的血小板抑制率顯著高于突變型組（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.4兩組患者發(fā)生氯吡格雷抵抗比較

250例入選的患者中共有59例（23.6%）發(fā)生氯吡格雷抵抗現(xiàn)象，其中野生型組13例（8.97%），突變型組46例（43.81%）。見(jiàn)表3。

2.5 影響氯吡格雷抗血小板的危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析

影響氯吡格雷抗血小板的危險(xiǎn)因素為體質(zhì)指數(shù)、糖尿病和CYP2C19突變基因。見(jiàn)表4。

3討論

氯吡格雷目前被廣泛應(yīng)用于抗血小板的治療中，是冠心病的預(yù)防藥物。但近年來(lái)有較多的研究表明，氯吡格雷的臨床療效存在個(gè)體差異，有些患者服用氯吡格雷后發(fā)生氯吡格雷抵抗現(xiàn)象，即氯吡格雷不發(fā)揮抗血小板作用，增加患者疾病復(fù)發(fā)的概率[10]。實(shí)際上氯吡格雷是一種前體藥物，本身不具有活性，需要經(jīng)過(guò)肝臟P450酶系進(jìn)行兩次氧化代謝轉(zhuǎn)化為有活性的代謝產(chǎn)物才能發(fā)揮抗血小板的作用，且是不可逆的作用[11]。因此，氯吡格雷抵抗發(fā)生在氯吡格雷代謝轉(zhuǎn)化過(guò)程中。有研究表明，CYP2C19的基因多態(tài)性與氯吡格雷的療效存在密切關(guān)系。CYP2C19是肝臟細(xì)胞P450酶系中的一種，參與氯吡格雷的兩步氧化代謝過(guò)程，是氯吡格雷活化的主要酶[12]。CYP2C19酶編碼的基因?yàn)镃YP2C19基因，位于人類(lèi)10號(hào)染色體上，含有42個(gè)等位基因，其中CYP2C19*1為野生型等位基因，其編碼的酶具有正常活性，其余為突變型等位基因[13-14]。目前研究較多的突變型等位基因主要是CYP2C19*2和*3，其編碼的酶活性降低。

本研究對(duì)250例冠心病患者進(jìn)行CYP2C19基因型檢測(cè)，結(jié)果野生型（CYP2C19*1/*1）145例（58.00%），突變型（CYP2C19*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3）105例（42.00%），表明冠心病可造成CYP2C19基因的突變，與許多學(xué)者的研究一致[15]。本研究對(duì)所有患者進(jìn)行了血小板抑制率檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)野生型組的血小板抑制率（75.96±11.50）%顯著高于突變型組的血小板抑制率（47.13±7.97）%（P<0.05），表明CYP2C19基因突變可導(dǎo)致氯吡格雷的抗血小板作用降低。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，突變型組氯吡格雷抵抗現(xiàn)象的發(fā)生比例（43.81%）明顯高于野生型組（8.97%）（P<0.05），結(jié)果表明CYP2C19基因突變是導(dǎo)致氯吡格雷抵抗現(xiàn)象的重要原因。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，合并糖尿病患者是出現(xiàn)抵抗氯吡格雷的危險(xiǎn)因素，這可能與糖尿病患者血小板聚集性和反應(yīng)性增強(qiáng)有關(guān)，與Nakaquwa等[16]研究結(jié)果一致。此外，體質(zhì)指數(shù)增高亦可能使抵抗氯吡格雷的風(fēng)險(xiǎn)增高，可能與肥胖者氯吡格雷藥量不足或是肥胖者體內(nèi)的凝血因子活性增高引起血小板聚集性和反應(yīng)性增強(qiáng)有關(guān)。

綜上所述，CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷的抗血小板作用密切相關(guān)，CYP2C19基因突變可降低氯吡格雷的抗血小板作用，加大氯吡格雷抵抗現(xiàn)象的發(fā)生。冠心病患者的氯吡格雷抵抗現(xiàn)象主要與CYP2C19基因突變、糖尿病、體質(zhì)指數(shù)有關(guān)。臨床上可通過(guò)檢測(cè)CYP2C19基因的多態(tài)性、是否患有糖尿病、體質(zhì)指數(shù)，合理選擇抗血小板作用藥物，提高治療療效。本研究?jī)H對(duì)正?；蚪M和變異基因組進(jìn)行研究，未對(duì)CYP2C19的單核苷酸位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行分類(lèi)研究，也尚未探討CYP2C19基因突變、氯吡格雷的抗血小板作用與長(zhǎng)期隨訪的不良心血管事件的關(guān)系，有待以后研究。

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