樹鼩長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激期營(yíng)養(yǎng)干預(yù)措施的探究

馮一唯，夏 巍，戢克銅，賴永靜，馮清源，陳泓霖，黃宗健，易 翔，唐安洲

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530000)

樹鼩(Tupaiabelanger，tree shrew)是一種形似松鼠的小型哺乳動(dòng)物，屬哺乳綱、攀鼩目[1]。作為靈長(zhǎng)類動(dòng)物的近親，樹鼩在遺傳特性、生理機(jī)能和生化代謝等方面與人類相似,作為人類疾病動(dòng)物模型具有良好的前景[2-3]，目前樹鼩在腫瘤、糖尿病、傳染性疾病、視覺(jué)障礙、心理應(yīng)激等研究領(lǐng)域都取得了一定的進(jìn)展[4-8]。在國(guó)內(nèi)樹鼩主要分布于云南、海南、廣西、廣東等熱帶、亞熱帶地區(qū)。本課題組長(zhǎng)期從事樹鼩相關(guān)研究[9-11]，在前期的實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，樹鼩生性膽小易驚，在經(jīng)過(guò)約10 h的長(zhǎng)途汽車運(yùn)輸后，路途中劇烈的顛簸、噪音、擁擠、饑渴、溫度變化、為了保存平衡而不斷運(yùn)動(dòng)，多樣的強(qiáng)烈應(yīng)激源造成了樹鼩生理性和心理性的刺激，由此引起長(zhǎng)途運(yùn)輸綜合應(yīng)激反應(yīng)。應(yīng)激反應(yīng)激活免疫系統(tǒng)，在呼吸、消化、泌尿系統(tǒng)引起炎性反應(yīng)，導(dǎo)致能量消耗增加，食量下降，嚴(yán)重威脅樹鼩的健康。而此時(shí)若僅喂食常規(guī)顆粒飼料，極易引起胃腸道積氣和炎性反應(yīng)，樹鼩進(jìn)食量少甚至拒食，兩周內(nèi)死亡率高達(dá)40%，珍貴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源的損失實(shí)為可惜。且應(yīng)激期動(dòng)物的代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能有較大波動(dòng)[16]，不適宜開展實(shí)驗(yàn)，耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。因此，如何通過(guò)有效的管理和營(yíng)養(yǎng)干預(yù)，使樹鼩安全消退運(yùn)輸應(yīng)激成為了急需解決的問(wèn)題。

目前對(duì)于猴、大小鼠等常見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有可參考的運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)和福利措施[12]，但是樹鼩尚無(wú)可供參考的標(biāo)準(zhǔn)。樹鼩屬雜食性小獸,喜食小昆蟲、樹膠質(zhì)、野果等[3]。根據(jù)這一特質(zhì)，我們選擇了顆粒飼料、新鮮果蔬和面包蟲干作為樹鼩的主要食物。本實(shí)驗(yàn)將分為探究樹鼩較為適合的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法和驗(yàn)證該方法是否能降低運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)樹鼩的影響兩個(gè)部分,以減小運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)樹鼩的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用中緬樹鼩滇西亞種購(gòu)自中科院昆明動(dòng)物研究所，實(shí)驗(yàn)過(guò)程處于樹鼩非繁殖期。在第一部分，從目前本課題組飼養(yǎng)時(shí)間超過(guò)6個(gè)月的普通級(jí)樹鼩中選擇40只成年雄性樹鼩，平均年齡1歲± 3個(gè)月，平均體重(104.7±8.3) g[SCXK (滇) K2017-0014]，既往僅投喂購(gòu)自中科院昆明動(dòng)物研究所角建林等[17]研制生產(chǎn)的樹鼩標(biāo)準(zhǔn)飼料。在第二部分，從中科院昆明動(dòng)物研究所購(gòu)買普通級(jí)成年雄性樹鼩30只，平均年齡1歲± 3個(gè)月，平均體重(97.4±11.7) g[SCXK (滇) K2019-0005]。所有樹鼩均飼養(yǎng)于廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK (桂) 2014-0003]，飼養(yǎng)溫度(24±1)℃，相對(duì)濕度40% ～ 50%，光暗周期12 h:12 h。樹鼩置于樹鼩飼養(yǎng)籠中(長(zhǎng)、寬、高分別為35 cm、25 cm、30 cm)單籠飼養(yǎng)，籠具配有食盒及飲水瓶。每籠內(nèi)設(shè)置一木盒供樹鼩睡眠(長(zhǎng)、寬、高分別為15 cm、12 cm、12 cm)，木盒側(cè)面有一直徑10 cm開口供樹鼩進(jìn)出活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用得到了廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)的批準(zhǔn)，批準(zhǔn)編號(hào)為201812030。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷。

參考既往研究[14]，根據(jù)總含糖量(g/100 g食部)將新鮮果蔬劃分為高含糖量(> 10 g/100 g食部，如富士蘋果、雪梨)、中等含糖量(5 ～ 10 g/100 g食部，如溫州柑、桃)和低含糖量(< 5 g/100 g食部，如大白菜葉、黃瓜)三個(gè)等級(jí)。投喂食物及更換飲用水瓶的頻率為每天一次，時(shí)間為8:00 ～ 10:00。面包蟲及標(biāo)準(zhǔn)飼料投喂在食盒中，新鮮果蔬洗凈去皮后，切取食部投至籠中，避免投至食盒或木盒中。

1.2 主要試劑與儀器

4%組織細(xì)胞固定液(批號(hào)：20181120)，HE染色試劑盒(批號(hào)：20181102)均購(gòu)自索萊寶科技有限公司。樹鼩保定袋[16]由本課題組自行設(shè)計(jì)制作。Olympus正置光學(xué)顯微鏡BX53F購(gòu)自日本。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樹鼩的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法探究

為了探究樹鼩偏好的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法，實(shí)驗(yàn)的第一部分將分為兩階段。將40只成年雄性樹鼩分為A、B兩組，在第一階段，給予A組三種不同含糖量的足量果蔬：富士蘋果+溫州柑+大白菜葉各100 g/d，給予B組雪梨+桃+黃瓜各100 g/d。同時(shí)，給予兩組20 g/d面包蟲干+50 g/d標(biāo)準(zhǔn)飼料作為輔食。在次日投喂之前，先打掃籠具并取出前日未吃完的食物分別稱量并記錄。同時(shí)記錄樹鼩狀態(tài)，狀態(tài)描述包括樹鼩的活動(dòng)度、是否因大小便失禁而出現(xiàn)“濕尾”、毛發(fā)的潤(rùn)澤和濃密程度等。每3 d對(duì)所有樹鼩稱重1次。稱重時(shí)，將樹鼩置于保定袋中進(jìn)行稱重，該保定袋可固定樹鼩頭尾及四肢，便于精確測(cè)量。測(cè)量完成后將樹鼩放回籠中并測(cè)量保定袋的重量，二者相減即可得到樹鼩的體重。所有重量精確到0.1 g。該部分持續(xù)15 d，結(jié)束后統(tǒng)計(jì)出每種新鮮水果、面包蟲干和標(biāo)準(zhǔn)飼料的日平均消耗量和體重變化趨勢(shì)。

在第二階段，給予A、B兩組消耗量最多的三種新鮮果蔬各100 g/d，同時(shí)A組每只給予面包蟲干20 g/d +標(biāo)準(zhǔn)飼料50 g/d作為輔食，B組僅給予標(biāo)準(zhǔn)飼料70 g/d。如同前一部分記錄各種食物消耗量，并對(duì)樹鼩狀態(tài)進(jìn)行描述，每3 d稱量體重1次。該部分持續(xù)15 d，結(jié)束后統(tǒng)計(jì)出每種新鮮水果、面包蟲干和標(biāo)準(zhǔn)飼料的日平均消耗量，以及兩組的體重變化趨勢(shì)。

1.3.2 長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激樹鼩的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)及管理方法

該部分實(shí)驗(yàn)的30只成年雄性樹鼩從中科院昆明動(dòng)物研究所出發(fā)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)輸車運(yùn)送。運(yùn)抵本課題組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心后，立即稱量體重并放入籠內(nèi)，并隨機(jī)分為E、F、G三組。E組每只僅給予樹鼩最喜歡食用的新鮮果蔬100 g/d，F(xiàn)組給予由前一部分實(shí)驗(yàn)得出的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法，G組每只僅給予標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料100 g/d。記錄各組各種食物的日消耗量，并對(duì)樹鼩狀態(tài)進(jìn)行描述，每3 d稱量體重1次。該部分實(shí)驗(yàn)持續(xù)30 d，結(jié)束后計(jì)算各組生存率(s)和體重變化趨勢(shì)并進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)樹鼩死亡，及時(shí)對(duì)其進(jìn)行解剖，觀察是否有胃腸道積氣積液、腸梗阻等情況，并拍照留存。隨后切取樹鼩胃部、小腸、闌尾、大腸等組織并放置于4%組織細(xì)胞固定液中，對(duì)固定好的組織進(jìn)行包埋及切片，并使用HE染色試劑盒對(duì)組織切片進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察是否有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 穩(wěn)定期樹鼩的進(jìn)食偏好，進(jìn)食量和體重變化

圖1顯示了A、B兩組樹鼩新鮮果蔬的日均食用量。A組平均每只樹鼩食用富士蘋果(39.9±3.1) g/d、溫州柑(9.4±1.6) g/d、大白菜葉(3.9±0.7) g/d、面包蟲干(9.6±1.2) g/d、標(biāo)準(zhǔn)飼料(13.8±1.5) g/d，進(jìn)食水果總量為(53.2±5.5) g/d。B組平均每只樹鼩食用雪梨(27.7±2.8) g/d、桃(20.5±2.6) g/d、黃瓜(3.6±0.4) g/d、面包蟲干(9.3±1.5) g/d、標(biāo)準(zhǔn)飼料(13.9±1.2) g/d，進(jìn)食果蔬總量為(51.8±5.1) g/d。所有樹鼩均狀態(tài)良好，活動(dòng)度佳，未見“濕尾”，毛發(fā)濃密，較潤(rùn)澤，無(wú)明顯掉毛。

方差分析顯示樹鼩更傾向于選擇蘋果、雪梨、桃等含水量和含糖量較高的新鮮水果，而不傾向于選擇含糖量較低的果蔬。另外，所有樹鼩對(duì)面包蟲干接受程度較高(食用量達(dá)48%以上)。在第一階段，所有樹鼩的體重均有不同程度的提高(見表1)，兩因素重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，AB兩組樹鼩平均體重的提高程度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.098)，而飼養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)對(duì)兩組樹鼩平均體重增加有影響，在觀測(cè)時(shí)間范圍內(nèi)均增長(zhǎng)；不同組別和飼養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)之間存在交互效應(yīng)。

根據(jù)前一階段的結(jié)果，在實(shí)驗(yàn)的第二階段給予A、B組富士蘋果、雪梨和桃各100 g，同時(shí)給予A組每只20 g/d面包蟲干+50 g/d標(biāo)準(zhǔn)飼料作為輔食，B組每只僅給予70 g/d標(biāo)準(zhǔn)飼料作為輔食。結(jié)果顯示，A組平均每只樹鼩食用富士蘋果(27.4±2.2) g/d、雪梨(18.8±1.8) g/d、桃(10.1±0.9) g/d、面包蟲干(12.8±1.1) g/d、標(biāo)準(zhǔn)飼料(15.1±0.7) g/d，進(jìn)食水果總量為(56.3±3.3) g/d。B組平均每只樹鼩食用富士蘋果(31.0±2.4) g/d、雪梨(23.1±2.4) g/d、桃(11.7±1.4) g/d、標(biāo)準(zhǔn)飼料(14.2±1.5) g/d，進(jìn)食水果總量為(65.8±5.3) g/d。所有樹鼩均狀態(tài)良好，活動(dòng)度佳，未見“濕尾”，毛發(fā)濃密，潤(rùn)澤，無(wú)明顯掉毛。

圖1 第一階段A、B兩組樹鼩每只每日食用新鮮果蔬量Figure 1 The amount of fresh fruit and vegetalde consumed each day by tree shrews in the groups A and B at the first stage

第0天Day 0第3天Day 3第6天Day 6第9天Day 9第12天Day 12第15天Day 15第一階段Stage oneA組Group A102.9±8.7108.5±6.0112.6±7.2117.7±6.8124.3±5.9133.0±7.6B組Group B106.5±7.8109.1±6.4115.2±7.6121.6±8.1124.9±7.5132.3±7.2第二階段Stage twoA組Group A133.1±7.6137.6±7.7142.1±8.5141.5±8.0144.7±6.8146.2±7.7B組Group B132.3±7.2135.8±6.9137.2±7.4136.9±8.3138.3±7.7140.1±8.5

方差分析顯示A、B組間同種水果以及標(biāo)準(zhǔn)飼料的食用量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同組內(nèi)不同種水果的食用量，富士蘋果與雪梨間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.095),富士蘋果與桃、雪梨與桃的食用量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。可見，樹鼩偏好于食用富士蘋果和雪梨。表1顯示了A、B組樹鼩在該階段的平均體重變化，其中投喂面包蟲干的A組比未投喂面包蟲干的B組體重增長(zhǎng)趨勢(shì)更加明顯，兩因素重復(fù)測(cè)量方差分析顯示A、B兩組樹鼩平均體重增長(zhǎng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.019)，而飼養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)對(duì)兩組樹鼩平均體重增加有影響，在觀測(cè)時(shí)間范圍內(nèi)增長(zhǎng)；不同組別和飼養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)之間存在交互效應(yīng)。

由此，我們得出結(jié)論：一只健康成年雄性中緬樹鼩滇西亞種的食量約為富士蘋果60 g/d +面包蟲干10 g/d +標(biāo)準(zhǔn)飼料15 g/d。樹鼩在進(jìn)食過(guò)程中有部分食物會(huì)從籠底縫隙中掉落而造成損失，在實(shí)際飼養(yǎng)過(guò)程中可將各類食物加量10% ～ 20%以保證樹鼩的食物攝取量。

2.2 長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激樹鼩不同營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法對(duì)樹鼩存活率的影響

該部分實(shí)驗(yàn)共從中科院昆明動(dòng)物研究所訂購(gòu)32只樹鼩，抵達(dá)廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心時(shí)存活30只。對(duì)所有樹鼩進(jìn)行稱重、狀態(tài)描述后進(jìn)行了隨機(jī)分組，每組10只。其中，E組有7只活動(dòng)度欠佳，4只發(fā)生“濕尾”，6只毛發(fā)濕潤(rùn)、無(wú)光澤或有掉毛，平均體重(97.3±7.6) g；F組有6只活動(dòng)度欠佳，6只發(fā)生“濕尾”，5只毛發(fā)濕潤(rùn)、無(wú)光澤或有掉毛，平均體重(99.7±8.8) g；G組有8只活動(dòng)度欠佳，6只發(fā)生“濕尾”，7只毛發(fā)濕潤(rùn)、無(wú)光澤或有掉毛，平均體重(95.2±7.0) g。根據(jù)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和前一部分的結(jié)果，給予E組新鮮富士蘋果100 g/d，給予F組新鮮富士蘋果60 g/d +面包蟲干20 g/d +標(biāo)準(zhǔn)飼料30 g/d，給予G組標(biāo)準(zhǔn)飼料100 g/d。應(yīng)激期消退后，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)E組存活7只，存活率為70%，死亡的3只中有2只是在第1周死亡，1只在第2周死亡；F組存活9只，存活率為90%，1只在第3周死亡；G組存活3只，存活率為30%，第1周死亡5只，第2周和第3周分別死亡1只(如表2)?？ǚ綑z驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)法顯示E組與F組、E組與G組樹鼩的生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而F組與G組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.020)。

表2 各組長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激樹鼩死亡數(shù)量及存活率

注：G組與F組的存活率相比，*P<0.05。

Note. Comparison of survival rates between groups F and G,*P<0.05.

表3 E、F、G三組樹鼩在第二階段的體重

圖2顯示了各組樹鼩每日平均食量的變化。隨著長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激的消退和對(duì)新環(huán)境的逐漸適應(yīng)，各組進(jìn)食量均有不同程度的增加。其中，G組日均進(jìn)食量最少，平均(33.8±3.4) g/只。兩因素重復(fù)測(cè)量方差分析顯示E組與F組的食量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但E組與G組、F組與G組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表3顯示了E、F、G組樹鼩在應(yīng)激期的平均體重變化，可見F組上升趨勢(shì)最快，E組其次，G組在初期有較大幅度的下降并且始終未能恢復(fù)至最初體重。兩因素重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，E、F、G三組均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),說(shuō)明3種營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法對(duì)樹鼩的存活率有影響。在應(yīng)激期，E、F組極少出現(xiàn)“濕尾”，活動(dòng)度均可，常在籠具中跳動(dòng)，毛發(fā)干燥、潤(rùn)澤、無(wú)新掉毛現(xiàn)象，且隨著應(yīng)激的消退和對(duì)新環(huán)境的逐漸適應(yīng)而好轉(zhuǎn)。而G組仍常出現(xiàn)“濕尾”，活動(dòng)度差，常蜷縮在木盒中。毛發(fā)較濕潤(rùn)、潤(rùn)澤度差、有掉毛現(xiàn)象，無(wú)明顯好轉(zhuǎn)。

圖2 E、F、G三組的日均食量變化Figure 2 Changes in the daily average food intake of groups E, F and G

2.3 死亡樹鼩的解剖和組織切片HE染色結(jié)果

對(duì)所有死亡的樹鼩進(jìn)行解剖后發(fā)現(xiàn)，E組有1只出現(xiàn)胃腸道積氣，G組全部出現(xiàn)不同程度胃腸道積氣，主要表現(xiàn)為胃和十二指腸明顯擴(kuò)張，表面明顯紅腫、充血，內(nèi)有大量腸液及氣體，空腸和回腸稍有積氣(如圖3)。對(duì)死亡樹鼩進(jìn)行組織切片HE染色后發(fā)現(xiàn)，E組有2 只在胃、小腸出現(xiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；G組有6只發(fā)現(xiàn)胃、小腸、大腸、闌尾等組織均發(fā)生不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(如圖4)。

注：A：正常對(duì)照；B、C、D：胃腸道積氣(箭頭所指處)。圖3 樹鼩胃腸道積氣大體解剖圖Note. A, Normal control. B, C, and D, Gas in the gastrointestinal tract (pointed by the arrows).Figure 3 Gross anatomical view of gas accumulation in the gastrointestinal tract of the tree shrews

注：A：胃；B：小腸；C：大腸；D：闌尾。其中，A1、B1、C1、D1為正常對(duì)照，A2、B2、C2、D2為炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。圖4 樹鼩胃、小腸、大腸、闌尾組織HE染色對(duì)比(× 200)Note. A, Stomach. B, Small intestine. C, Colon. D, Appendix. Among them, A1, B1, C1, and D1 are normal controls, and A2, B2, C2, and D2 are inflammatory infiltration.Figure 4 Comparison of HE staining of the stomach, small intestine, large intestine and appendix of the tree shrews

3 討論

3.1 營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方法中食物的選擇

在饑餓和疲勞時(shí)，新鮮、成熟的水果中低級(jí)酯類(乙酸乙酯、甲酸甲酯等)散發(fā)出的芳香更能吸引樹鼩的注意力。在實(shí)驗(yàn)觀察中我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)同時(shí)投喂切開的不同種類新鮮水果、面包蟲干和顆粒飼料時(shí)，樹鼩會(huì)優(yōu)先啃食含糖量較高的新鮮水果，其次選擇捧食面包蟲干。這與其他相關(guān)研究結(jié)論相一致[17-18]。水果中含有易于吸收的蔗糖、葡萄糖和果糖等[19]，且含水量較高，對(duì)于天性喜食甜食，處于長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激期，尚不適應(yīng)新的籠具和飼養(yǎng)環(huán)境的樹鼩來(lái)說(shuō)，投喂富士蘋果等高含糖量的水果是更好的選擇。同時(shí)，從實(shí)驗(yàn)的第一部分可以看出，面包蟲干能為樹鼩提供大量?jī)?yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白，對(duì)樹鼩的營(yíng)養(yǎng)狀況起到了促進(jìn)作用，而標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料則能夠提供樹鼩所需的其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和微量元素[17-18, 21]，這些都有助于樹鼩平安消退應(yīng)激期，降低應(yīng)激期的死亡率。若僅以顆粒飼料飼養(yǎng)處于應(yīng)激期的樹鼩，容易造成胃腸道積氣積液、腸梗阻、胃炎、腸炎等消化道疾病。第二部分實(shí)驗(yàn)中E組與G組、F組與G組樹鼩的體重變化和F組與G組的生存率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明給運(yùn)輸應(yīng)激期樹鼩投喂新鮮水果有助于樹鼩平安度過(guò)應(yīng)激期。然而E組與G組之間生存率無(wú)差異，可能是由于樣本數(shù)量偏少所致，將在后續(xù)研究中增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量以探究投喂優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白對(duì)運(yùn)輸應(yīng)激期樹鼩生存率的影響。實(shí)驗(yàn)中所選擇的食物都是時(shí)令性不強(qiáng)、易于獲取、相對(duì)經(jīng)濟(jì)的，在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中具有很強(qiáng)的可操作性。

3.2 營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的過(guò)渡與結(jié)束

從圖2可得知，運(yùn)輸應(yīng)激樹鼩在第1周的死亡率最高，第2周逐漸下降，第3周時(shí)趨于平穩(wěn)，推測(cè)樹鼩綜合應(yīng)激期的消退約在2周內(nèi)。由此可見樹鼩在抵達(dá)實(shí)驗(yàn)環(huán)境后2周內(nèi)體內(nèi)內(nèi)環(huán)境波動(dòng)較大，建議至少穩(wěn)定2周后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。樹鼩應(yīng)激期消退后，消化道PH值逐漸恢復(fù)正常水平[22-24]，可以耐受標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料中的蛋白質(zhì)，所以營(yíng)養(yǎng)干預(yù)應(yīng)施加不低于2周，自第3周起可逐漸減少新鮮水果和面包蟲干的量，增加標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，直至恢復(fù)為由標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料進(jìn)行飼養(yǎng)。在進(jìn)行對(duì)血糖控制要求不高的實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以考慮給樹鼩間斷添加新鮮水果作為輔食，以加強(qiáng)樹鼩對(duì)不利環(huán)境因素的抵抗性。

3.3 其他應(yīng)當(dāng)注意的管理方法

樹鼩不群居，領(lǐng)地意識(shí)極強(qiáng)，會(huì)在自己的領(lǐng)地上留下氣味[25]。雄性兇暴好斗，對(duì)同類的氣味較敏感[14]，陌生的氣味會(huì)讓樹鼩感到緊張。故應(yīng)注意保持樹鼩的左右鄰居關(guān)系；在更換籠具、水瓶、食盒等用具時(shí)，應(yīng)盡量注意對(duì)應(yīng)關(guān)系，或先將用具洗凈晾干后再給樹鼩使用。

樹鼩生性膽小易驚，且行動(dòng)敏捷，在抓取樹鼩時(shí)容易使之受到驚嚇，甚至在逃跑過(guò)程中撞擊籠壁而受傷。經(jīng)常性抓取和長(zhǎng)時(shí)間剝奪身體自由中會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生獲得性無(wú)助抑郁和束縛應(yīng)激抑郁[26-27]，嚴(yán)重威脅樹鼩的生理代謝和心理健康。故抓取樹鼩不應(yīng)過(guò)于頻繁，抓取時(shí)動(dòng)作應(yīng)盡量輕柔，固定于保定袋內(nèi)的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，完成測(cè)量后應(yīng)盡快將樹鼩放回籠具中。

運(yùn)輸綜合應(yīng)激反應(yīng)不僅威脅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理和心理健康，而且干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，對(duì)于生性膽小的樹鼩，甚至?xí)?dǎo)致死亡；通過(guò)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)有助于樹鼩渡過(guò)應(yīng)激期，減少長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激期中樹鼩的死亡率，有利于樹鼩精神狀態(tài)的恢復(fù)。目前有關(guān)樹鼩的應(yīng)用研究要遠(yuǎn)多于樹鼩的基礎(chǔ)研究，這不利于樹鼩研究的長(zhǎng)久發(fā)展，未來(lái)期待能更多的關(guān)注到樹鼩的基礎(chǔ)研究，盡早實(shí)現(xiàn)樹鼩的實(shí)驗(yàn)化、標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化，以充分發(fā)揮樹鼩作為人類疾病動(dòng)物模型的優(yōu)勢(shì)。