微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用于臨床輸血檢驗中的效果及優(yōu)勢

林曉霞，龐文英，陸慧

（廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 檢驗科，廣東 湛江 524001）

0 引言

輸血檢驗就是指將健康的血液輸入到病人體內(nèi)，用以增加血量，改善病人體內(nèi)血液循環(huán)的一種方式，但在輸血之前，一定要將供血者與受血者各自的血液進行血型鑒定，經(jīng)過交叉試驗，無凝血現(xiàn)象，才可以進行輸血[1-2]。本文將結(jié)合對微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用于臨床輸血檢驗所產(chǎn)生的效果以及所具有的優(yōu)勢進行研究與分析，詳情見于下文。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至12 月于我院申請懸浮紅細胞治療的患者320 例作為研究對象，其中男性178 例，女性142 例，年齡為17～79 歲，平均（49.52±5.17）歲。用兩種方法做交叉配血，同時做不規(guī)則抗體測定。卡氏微柱凝膠法進行交叉配血試驗為觀察組，用凝聚胺法交叉配血作為對照組，所有患者均自愿參與本研究。

1.2 方法

對照組采用凝聚胺配血，將供血者與受血者的紅細胞放于生理鹽水當(dāng)中，制備細胞懸液；取試管2根，分別做主側(cè)、次側(cè)的標記，在主側(cè)孔內(nèi)加入受檢者血清25 μL 以及供血者的2 %細胞懸液50 μL；在次側(cè)孔內(nèi)加入受檢者血清25 μL 以及受血者的3 %細胞懸液50 μL；加0.6 mL 低離子介質(zhì)溶液于管中，混勻靜置1 min，加兩滴凝聚胺于管中，混勻靜置，離心1 min，只保留管底的0.1 mL 液體。

觀察組患者采用卡氏微柱凝膠法交叉配血，將供血者與受血者的紅細胞放于生理鹽水當(dāng)中，制備細胞懸液；取一個凝膠卡，記錄患者姓名，并在凝膠卡寫上主側(cè)、次側(cè)以及自身，填完資料之后撕開凝膠卡封條；在主側(cè)孔內(nèi)加入供血者的1 %細胞懸液50 μL，受檢者血清25 μL；在次側(cè)孔內(nèi)加入受血者的1%細胞懸液50 μL，受檢者血清25 μL；在自身對照孔內(nèi)加入1 %細胞懸液50 μL，受檢者血清25 μL，將相應(yīng)物質(zhì)放置于37 ℃的環(huán)境內(nèi)孵育15 min；采用臨床專用離心機離心9 min。

1.3 觀察標準

凝聚胺配血觀察有無紅細胞凝塊，其中1 min 內(nèi)散開為凝聚胺引起的非免疫性凝集結(jié)果，實驗結(jié)果匹配；1 min 內(nèi)未散開的為異體抗體引起的免疫性凝集結(jié)果，實驗結(jié)果不匹配。

卡氏微柱凝膠法其中陰性顯示:100 %的紅細胞在凝膠卡的底部；+/-顯示:100 %的紅細胞在凝膠卡的下1/3；+顯示:80 %紅細胞在凝膠卡的下2/3；++顯示:80 %紅細胞在凝膠卡的上2/3；+++顯示:80 %紅細胞在凝膠卡的上1/3；++++顯示:全部紅細胞都在凝膠卡的頂部。

DP:凝膠管頂部有部分紅細胞，底部有部分沉淀；PH:凝膠管內(nèi)液體透明，以及少量紅細胞殘留；H:凝膠管內(nèi)液體透明，無紅細胞殘留。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

將數(shù)據(jù)納入SPSS 17.0 軟件中分析。計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，計數(shù)資料用率（%）表示，采用t和χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩種不同交叉配血方法結(jié)果，卡氏微柱凝膠法交叉配血患者出現(xiàn)主側(cè)凝集12 例，次側(cè)凝集3 例；凝聚胺法交叉配血患者出現(xiàn)主側(cè)凝集8 例，次側(cè)凝集3 例。凝聚胺法交叉配血不合的11 例患者用卡氏微柱凝膠法交叉配血也不合。做不規(guī)則抗體測定，12 例患者及3 例獻血者有不規(guī)則抗體的存在，與卡氏微柱凝膠法交叉配血結(jié)果相符，結(jié)果如下表1所示。

表1 兩種不同交叉配血方法對不規(guī)則抗體檢出率比較（n,%）

兩種不同交叉配血方法對不規(guī)則抗體檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

微柱凝膠技術(shù)，是由1990 年法國最先提出以及介紹的免疫學(xué)檢測技術(shù)，即將抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的微柱凝膠免疫試驗[3]。微柱凝膠的實質(zhì)為血凝試驗，即是紅細胞抗原抗體，在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生的免疫凝集反應(yīng)，是將液相技術(shù)與固相技術(shù)、凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細胞凝集試驗技術(shù)進行結(jié)合，并通過對凝膠種類的選擇以及濃度的調(diào)節(jié)來控制分子篩孔徑大小，使分子篩只能允許游離紅細胞通過，達到分辨凝集紅細胞和非凝集紅細胞的目的，同時也是目前最易大規(guī)模推廣、最適用于常規(guī)試驗的血型血清學(xué)試驗技術(shù)[4-6]。

聚凝技術(shù)是能夠用于交叉配血當(dāng)中，同時可對免疫抗體IgG 的能力進行檢測的技術(shù)，其應(yīng)用原理即首先利用地理中介質(zhì)降低溶液的例子強度，減少紅細胞周圍的陽離子，從而促進血清中抗體以及紅細胞相應(yīng)的抗原結(jié)合，再加入聚凝胺溶液，從而起到中和紅細胞表面負電荷的作用，形成可逆的而非特性聚集現(xiàn)象，并使得IgG 抗體直接凝集紅細胞。具有快速簡便、特異性強、重復(fù)性好以及靈敏度較強的特點，還會用于對一些不完全抗體的檢測，但結(jié)合臨床使用效果觀察，聚凝胺容易受到冷凝素以及肝素等的影響，且如果實驗中所用的試管、滴管吸頭以及玻片等未滿足清潔干燥要求，也容易出現(xiàn)融血現(xiàn)象。同時還容易受到人為因素的影響，對于一些Rh 血型存在漏檢的情況，同時不同廠家以及不同批次的聚凝胺之間也存在著較大的個體差異[7]。本研究結(jié)果顯示，用凝聚胺法交叉配血對不規(guī)則抗體檢出率只有73.3 %。容易漏檢，有一定的安全隱患。

微柱凝膠技術(shù)在臨床可用作對ABO 的血型檢驗，也能夠用于Rh 血型抗原檢測、HDN 檢測、血小板抗體篩檢與交叉配血，同時也可以用作于本次實驗當(dāng)中的不規(guī)則篩體檢查與交叉配血[8]。結(jié)合本次實驗結(jié)果，微柱凝膠技術(shù)在應(yīng)用于臨床檢驗時，具有簡單易操作、無需洗滌、無需對陰性結(jié)果進行確證實驗以及標本的用量少、結(jié)果留存時間長，敏感性和準確率高，不易受人為因素的干擾，結(jié)果更符合標準化要求易于判讀以及操作更加安全可靠等的優(yōu)點。本次實驗結(jié)果卡氏微柱凝膠法交叉配血對不規(guī)則抗體檢出率達100 %。但其不足之處就是對比傳統(tǒng)輸血檢驗方法，成本要更高一點，同時檢驗時間要稍長一點，因此當(dāng)有緊急輸血狀況時，微柱凝膠技術(shù)相對傳統(tǒng)方式而言不占優(yōu)勢[9]。

臨床在對微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用時，一定要求嚴格按照規(guī)范化進行操作，以排除人為因素對于實驗結(jié)果的影響，同時準備采集標本一定要嚴格按照采集標準，避免溶血以及纖維蛋白等對結(jié)果造成影響[10-11]。交叉配血則是將供血者與受血者的紅細胞抗原作為主側(cè)，供血者與受血者的紅細胞血清抗體作為次側(cè)。而其中的不完全抗體，則要依據(jù)間接試驗用以檢測和觀察其血凝結(jié)果，并且一定要采用標準化加樣。正確的交叉配血結(jié)果一般會取決于血液樣本的正確率,從而排除由于人為因素、操作失誤以及供血者血液不合格等對于交叉配血的影響[12]。

結(jié)合本次實驗研究結(jié)果，在微柱凝膠管內(nèi)，當(dāng)機體的紅細胞與相應(yīng)抗體相結(jié)合后，會形成紅細胞凝集團塊[13]。而在一定的離心力作用之下，紅細胞凝集團塊可位于凝膠的表面或者凝膠的上部或下部當(dāng)中。但如果紅細胞未能夠與相應(yīng)抗體相結(jié)合，仍舊是分散的紅細胞，此時經(jīng)歷離心力作用，紅細胞就會沉降至微膠管的底部[14]。

綜上所述，將微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用于臨床輸血檢驗中具有良好的檢查效果，也不易受到其他因素的影響，特異性較高，因此可以用作臨床進行輸血檢驗的首選[15]。