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    基于太赫茲—衰減全反射光譜的甘氨酸溶液定量研究

    2019-09-23 12:40:24小川雄一
    食品與機(jī)械 2019年8期
    關(guān)鍵詞:甘氨酸消逝水溶液

    程 麗 馬 微 劉 祺 小川雄一

    (1. 黑龍江大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)教育部工程研究中心,黑龍江 哈爾濱 150500;2. 中華人民共和國(guó)東寧海關(guān)技術(shù)中心,黑龍江 東寧 157299;3. 京都大學(xué)農(nóng)學(xué)研究科,日本 京都 6068502)

    太赫茲(Terahertz,THz)頻段是指頻率從0.1~10.0 THz,波長(zhǎng)0.03~3.00 mm,波數(shù)3.3~330.0 cm-1,介于微波與紅外之間的電磁輻射區(qū)域,被稱(chēng)之為T(mén)射線[1]。研究表明,食品的主要成分如碳水化合物[2]、脂肪[3]、蛋白質(zhì)[4]、氨基酸[5]、肽[6]、維生素[7]等在THz波段存在特征吸收峰。THz波具有非破壞性、穿透性、低能性,作為食品檢測(cè)的理想光源,在食品安全檢測(cè)[8]、儲(chǔ)糧品質(zhì)檢測(cè)[9]、食品添加劑[10]、食品無(wú)損檢測(cè)[11]等方面具有巨大的應(yīng)用潛能。但檢測(cè)樣品均為固體,主要是水分在THz波段的吸收極強(qiáng)(水在1 THz處的吸收系數(shù)為230 cm-1)[12],使得THz波無(wú)法穿透水溶液,嚴(yán)重限制了THz光譜技術(shù)的應(yīng)用,而多數(shù)食品均為含水液態(tài)樣品。研究發(fā)現(xiàn),將樣品進(jìn)行預(yù)處理(如冷凍切片[13]、反膠束制備[14])或使用特殊的檢測(cè)單元(如可調(diào)光程液體池[15]、微流控芯片[16]等)可實(shí)現(xiàn)高含水量樣品的檢測(cè),但難以實(shí)現(xiàn)液體樣品的檢測(cè)。

    衰減全反射(Attenuated Total Reflectance,ATR)光譜,利用光波的一次或多次全反射形成消逝波,當(dāng)消逝波接觸待測(cè)樣品時(shí),樣品中的某些成分會(huì)吸收消逝波,造成全反射光能量的損失,從而得到待測(cè)樣品的ATR光譜。ATR光譜被廣泛用于紅外、可見(jiàn)、紫外區(qū)域。由于THz波段波長(zhǎng)較長(zhǎng),消逝波滲透樣品深度大,得到的被測(cè)物光譜信息較多,故THz-ATR光譜更適用于THz波段液體樣品的檢測(cè)[17-18]。

    甘氨酸是結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的氨基酸,常用作食品添加劑和防腐劑。結(jié)晶是甘氨酸生產(chǎn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),其影響因素眾多,實(shí)時(shí)濃度測(cè)定為其影響因素之一,因此準(zhǔn)確、快速、無(wú)損獲得實(shí)時(shí)濃度對(duì)甘氨酸的生產(chǎn)至關(guān)重要[19]。目前,常用的檢測(cè)甘氨酸方法有激光拉曼光譜法[20]、原子吸收分光光度法[21]、熒光分光光度法[22]、柱前衍生HPLC法[23]等,但其預(yù)處理較繁鎖。試驗(yàn)擬利用太赫茲—衰減全反射(THz-ATR)系統(tǒng),以不同濃度甘氨酸水溶液為研究對(duì)象,以獲得其THz-ATR光譜信息。并將其原始光譜進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理,借助多元線性回歸(MLR)進(jìn)行定量分析,為T(mén)Hz-ATR光譜應(yīng)用于水溶液定性定量分析提供有效方法。

    1 材料與方法

    1.1 樣品制備

    甘氨酸:純度≥99.9%,美國(guó)Sigma公司。將樣品溶于蒸餾水中配制成28個(gè)不同濃度(0%~20%)水溶液,隨機(jī)選取20個(gè)樣品作為建模樣品集,其余8個(gè)樣品為檢驗(yàn)樣品集。

    1.2 試驗(yàn)裝置

    試驗(yàn)所采用的THz-ATR裝置如圖1所示。此THz-ATR 裝置為自行設(shè)計(jì)并由日本JASCO公司完成組裝。裝置由光源、干涉儀、樣品池及檢測(cè)池4部分組成。光源為高壓水銀燈,光譜范圍20~450 cm-1;分光鏡為高抗阻硅分光鏡,硅在太赫茲頻段具有高折光率、高機(jī)械強(qiáng)度、抗腐蝕及低色散,故內(nèi)部全反射裝置選用硅棱鏡,如圖2所示。接觸面光束直徑為5 mm,即樣品與消逝波接觸面直徑。檢測(cè)器采用熱電檢測(cè)器,高靈敏度的氘代L-丙氨酸硫酸三甘肽檢測(cè)器。為減少由于水蒸氣引起的太赫茲波衰減,采用真空度為102Pa。以水為參照測(cè)定樣品的THz-ATR光譜,光譜分辨率16 cm-1,掃描次數(shù)200次,重復(fù)測(cè)定3次取平均值。消逝波穿透深度按式(1) 進(jìn)行計(jì)算。

    1. 拋物面鏡 2. 水銀燈 3. 固定鏡 4. 分光鏡 5. 移動(dòng)鏡 6. 硅棱鏡 7. 輻射熱檢測(cè)器 8. 熱電檢測(cè)器 9. 轉(zhuǎn)換鏡 10. 反光鏡

    圖1 THz-ATR裝置圖

    Figure 1 Schematic of the THz-ATR

    1. ATR棱鏡 2. THz波 3. 樣品 4. 消逝波 5. 檢測(cè)器

    (1)

    式中:

    λ——入射波波長(zhǎng),mm;

    θ——入射角角度,(°);

    n1——ATR棱鏡折射率;

    n2——樣品折射率。

    1.3 THz-ATR圖譜處理方法

    將不同濃度的樣品溶液THz-ATR光譜疊加后平均,得出該濃度樣品的THz-ATR原始光譜圖,利用Origin 8.0軟件對(duì)原始光譜進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Origin 8.0軟件將二階導(dǎo)光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行多元線性回歸,建立最佳多波數(shù)組合回歸方程,并用檢驗(yàn)樣品集對(duì)回歸方程進(jìn)行評(píng)價(jià),預(yù)測(cè)均方根誤差按式(2)進(jìn)行計(jì)算。

    (2)

    式中:

    RMSEP——預(yù)測(cè)均方根誤差;

    ci——第i個(gè)樣品的預(yù)測(cè)值;

    n——待測(cè)樣品數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甘氨酸溶液的THz-ATR光譜圖

    圖3 不同濃度甘氨酸水溶液THz-ATR光譜圖Figure 3 THz-ATR spectra of the different concentration glycine solutions

    圖4 20%甘氨酸水溶液THz-ATR二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理光譜圖Figure 4 The 2nd derivative of the THz-ATR spectrum of 20% glycine solution

    2.2 甘氨酸溶液THz-ATR光譜的二階導(dǎo)數(shù)預(yù)處理

    由圖4可知,甘氨酸溶液的二階導(dǎo)數(shù)光譜圖有效地改善了原始THz-ATR光譜的基線漂移問(wèn)題。

    2.3 定量模型的建立

    y=-0.16-9 880.89x1-2 279.11x2-7 106.65x3,

    (3)

    式中:

    y——甘氨酸含量,%;

    x1~x3——分別為65.56,127.28,308.55 cm-1處甘氨酸溶液二階導(dǎo)數(shù)光譜圖吸光度值。

    模型的真實(shí)值與預(yù)測(cè)值間的關(guān)系如圖5所示,甘氨酸濃度為0%~20%。真實(shí)值與預(yù)測(cè)值間R2為0.928 8,線性關(guān)系較好。

    表1甘氨酸水溶液二階導(dǎo)數(shù)光譜及原始光譜多元線性回歸分析

    Table1Multiplelinearregressionanalysisresultsbasedon2ndderivativeoftheTHz-ATRspectraandoriginalspectraofglycinesolutions

    最佳波數(shù)/cm-1R2AdjRMSERMSEP173.560.983 00.007 52.254 665.56,308.580.989 00.006 02.200 165.56,127.28,308.580.990 30.005 71.658 965.56,127.28,173.56,308.580.989 90.005 81.987 8原始光譜0.832 10.013 63.371 6

    圖5 預(yù)測(cè)值與實(shí)際值關(guān)系圖Figure 5 Scatter plot between actual and predicted glycine concentration

    3 結(jié)論

    利用THz-ATR光譜結(jié)合多元線性回歸對(duì)甘氨酸水溶液進(jìn)行定性、定量分析。結(jié)果表明,THz-ATR光譜技術(shù)能用于THz波段液態(tài)樣品的檢測(cè),且與其他方法相比,該方法無(wú)復(fù)雜的樣品前處理過(guò)程,可直接上樣,檢測(cè)單元簡(jiǎn)單,為較理想的THz波段液態(tài)樣品檢測(cè)方法。為使定量檢測(cè)更準(zhǔn)確,后續(xù)應(yīng)對(duì)建模方法進(jìn)行研究。

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