竭紅跌打巴布劑中血竭素的含量測(cè)定

葉星辰 班俊峰 呂竹芬 陳燕忠 黃思玉

（廣東藥科大學(xué) 廣東省藥物新劑型重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006）

“竭紅跌打酊”是由龍血竭、紅花、當(dāng)歸等10種中藥材組成的復(fù)方制劑，具有顯著的消腫鎮(zhèn)痛，活血化瘀作用，對(duì)機(jī)體軟組織損傷有獨(dú)特療效[1-2]。根據(jù)前期研究制備的竭紅凝膠膏劑改善了原制劑因酒精含量高對(duì)皮膚產(chǎn)生的不良反應(yīng)，具有重要意義。方中血竭由棕櫚科植物麒麟竭果實(shí)滲出的樹脂經(jīng)加工制成[3]，具有止血與活血、抗微生物和抗病毒活性、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗炎、傷口愈合等廣泛的藥理作用[4]。本文采用HPLC法對(duì)制劑中的血竭素進(jìn)行含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)便可行。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Dionex Ultimate 3000 Pump，Ultimate 3000 Photodiode Array Detector，德國(guó)Dionex corp），CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），血竭素高氯酸鹽對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：10811-200704），竭紅跌打巴布劑（自制），乙腈（色譜純），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱Kromasil C18柱（5 μm，4.6×250 mm）；以乙腈-0.05m ol/L磷酸二氫鈉溶液（50∶50）為流動(dòng)相；流速1.0 mL/min，進(jìn)樣10 μL，等度洗脫22 min，采用檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm；柱溫40 ℃。理論板數(shù)按血竭素峰計(jì)算3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：將血竭素對(duì)照品置于干燥器中36 h，充分干燥后精密稱取對(duì)照品適量，置于10 mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液溶解、定容。精密量取所得溶液1 mL，于25 mL棕色量瓶中，以甲醇定容。

2.2.2 供試品溶液的制備：精密稱定竭紅巴布劑膏體適量置燒杯中，加3%的磷酸甲醇溶液研勻，超聲10 min，放至室溫后轉(zhuǎn)移置50 mL棕色量瓶中，用3%的磷酸甲醇溶液定容；精密量取溶液2 mL置5 mL棕色量瓶中，用甲醇定容，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 空白對(duì)照液的制備：取缺血竭的膏體，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，作為陰性對(duì)照樣品。

2.3 專屬性考察：按2.1項(xiàng)下方法，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1?？芍┰嚻啡芤褐醒咚胤宓谋Ａ魰r(shí)間與血竭素對(duì)照品的一致，而陰性對(duì)照液在出峰范圍內(nèi)沒(méi)有干擾，說(shuō)明測(cè)定的專屬好。

圖1 對(duì)照品、樣品、陰性樣品HPLC色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 μL，注入色譜儀中，以峰面積值和進(jìn)樣體積作線性回歸，得到回歸方程為：Y=0.0271+0.1414x（r=0.9999），說(shuō)明血竭素對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0452～0.2260 μg/mL范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。

2.5 精密度考察：依2.1項(xiàng)下方法，精密吸取同一濃度的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定血竭素的峰面積。計(jì)算得RDS為0.87%。

2.6 穩(wěn)定性考察：根據(jù)2.1項(xiàng)下方法精密吸取供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、12 h重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得血竭素峰面積RSD=4.34%?？芍?2 h內(nèi)溶液的穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：按2.2.2項(xiàng)下方法以同一批樣品制備供試品溶液6份，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定峰面積，計(jì)算得RDS值為4.7%，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率：精密稱取已知血竭素含量的樣品6份，根據(jù)2.2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，分別精密加入適量血竭素對(duì)照品溶液。按2.1項(xiàng)下方法進(jìn)樣，測(cè)定樣品中血竭素含量。結(jié)果得平均回收率為99.08%，RSD=3.13%。

2.9 樣品含量的測(cè)定：按2.2.2項(xiàng)下方法，取3個(gè)不同批次的巴布劑樣品制備樣品溶液，按2.1項(xiàng)下方法進(jìn)樣。見(jiàn)表1。

3 討 論

竭紅巴布劑處方藥味多，成分復(fù)雜多樣。龍血竭具有散瘀止痛，收斂止血，生肌斂瘡之功效，用于跌打損傷、閉經(jīng)痛經(jīng)、外傷出血等多種疾病的治療。

本研究建立了竭紅跌打巴布劑中血竭素含量的HPLC測(cè)定方法，該法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，具有較好的穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性，陰性無(wú)干擾[5-7]?？捎糜诮呒t巴布劑的質(zhì)量控制，也為龍血竭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升進(jìn)行了有益的探索。

表1 樣品中血竭素的含量測(cè)定結(jié)果