腦膠質(zhì)瘤患者血清microRNA-375的表達水平及臨床意義

白曉斌，霍龍偉，謝萬福，徐高峰，王茂德

（1.西安交通大學第一附屬醫(yī)院 神經(jīng)外科，陜西 西安 710061；2.榆林市第一醫(yī)院 神經(jīng)外科，陜西 榆林 719000）

腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制復雜，主要為抑癌基因失活和原癌基因激活產(chǎn)生的一系列動態(tài)演變和基因異常的結(jié)果[1]。MicroRNA（miRNA）為一種新的非編碼RNA，miRNA 參與多種病理生理過程，為惡性腫瘤的診斷和治療提供了新思路[2]。血清miRNA 水平比較穩(wěn)定，檢測血清miRNA 水平在惡性腫瘤的診治及預后評估中具有重要價值[3]。miRNA-375 在多種惡性腫瘤中異常表達，其表達水平在多種惡性腫瘤診治中具有重要意義[4-7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月—2013年12月西安交通大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科收治的腦膠質(zhì)瘤患者120 例作為腦膠質(zhì)瘤組，選取同期本院健康體檢群眾120 例作為對照組。腦膠質(zhì)瘤組患者中男性64 例，女性56 例；年齡（53.46±6.14）歲；腦葉部53 例，腦干和小腦部67 例；腫瘤直徑（3.14±0.61）cm，術(shù)前KPS 評分（86.37±11.25）分；世界衛(wèi)生組織病理分級Ⅰ級 28 例，Ⅱ級34 例，Ⅲ級45 例，Ⅳ級13 例。對照組男性62 例，女性58 例；年齡（54.13±5.78）歲。納入標準：腦膠質(zhì)瘤患者病理確診為腦膠質(zhì)瘤，術(shù)前卡氏評分（Kanofsky performance score,KPS）＞50 分，術(shù)前未接受放化療及生物免疫治療等相關(guān)治療，進行腦膠質(zhì)瘤手術(shù)治療。排除標準：精神意識障礙無法溝通，自身免疫性疾病，其他惡性腫瘤，嚴重心、肺、肝及腎等重要臟器疾病，未正規(guī)隨訪或失訪者。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）測定血清miRNA-375 水平。取患者外周靜脈血，分離血清，加入RNA 酶混勻，采用酚-氯仿法進行裂解，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT-PCR 測定血清miRNA-375 水平，PCR 反應(yīng)條件：95℃預變性20 s，95℃變性10 s，60℃退火20 s，70℃延伸10 s，共42個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計算血清miRNA-375 水平。RT-PCR 儀器和相應(yīng)試劑盒均購自美國Sigma 公司。

1.3 隨訪

術(shù)后電話或門診隨訪，手術(shù)結(jié)束時間為隨訪開始時間，術(shù)后死亡時間或隨訪截止時間為隨訪結(jié)束時間，隨訪截止時間為2018年12月31日。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；Kaplan- Meier 法繪制ROC 曲線，比較用Log-rank χ2檢驗；影響因素的分析用多因素Logistic 回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清miRNA-375 相對表達量比較

腦膠質(zhì)瘤組miRNA-375 相對表達量為（0.48± 0.09），對照組為（1.00±0.05），經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=55.327，P=0.000），腦膠質(zhì)瘤組低于對照組。見圖1。

圖1 兩組患者血清miRNA-375 相對表達量比較 （n =120，±s）

2.2 不同因素患者血清miRNA-375 水平比較

不同術(shù)前KPS 評分、病理分級患者血清miRNA-375水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），術(shù)前KPS 評 分≥80 分、病理分級Ⅲ和Ⅳ級患者血清miRNA-375 水平低于術(shù)前KPS 評分＜80 分、病理分級Ⅰ和Ⅱ級患者。不同性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑患者的miRNA- 375 水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 不同因素患者血清miRNA-375 水平比較 （±s）

表1 不同因素患者血清miRNA-375 水平比較 （±s）

因素 n miRNA-375 t 值 P 值性別 男 64 0.49±0.11 1.555 0.123 女 56 0.46±0.10年齡 ≥55 歲 49 0.50±0.12 1.415 0.160 ＜55 歲 71 0.47±0.11腫瘤部位 腦葉 53 0.50±0.15 1.506 0.135 腦干和小腦 67 0.46±0.14腫瘤直徑 ≥3 cm 66 0.46±0.14 1.825 0.071 ＜3 cm 54 0.51±0.16術(shù)前KPS 評分 ≥80 分 45 0.41±0.08 10.259 0.000 ＜80 分 75 0.59±0.10病理分級 Ⅰ、Ⅱ級 62 0.61±0.11 12.457 0.000 Ⅲ、Ⅳ級 58 0.39±0.08

2.3 血清miRNA-375 水平與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的Logistics 回歸分析

以血清miRNA-375 水平作為因變量，以性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、術(shù)前KPS 評分及病理分級作為自變量，采用二分類Logistics 回歸分析，結(jié)果顯示，血清miRNA-375 水平與腦膠質(zhì)瘤術(shù)前KPS評分和病理分級相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

2.4 血清miRNA-375 對腦膠質(zhì)瘤的診斷價值

血清miRNA-375 診斷腦膠質(zhì)瘤的ROC 曲線下面積為0.871，血清miRNA-375截斷值（臨界值）為0.547，敏感性為89.36%（95% CI：0.468，0.964），特異性為90.13%（95% CI：0.493，0.978）。見圖2。

2.5 血清miRNA-375與腦膠質(zhì)瘤預后的關(guān)系

以血清miRNA-3750.547 為界，分為低表達miRNA-375 和高表達miRNA-375 患者。低表達miRNA-375 患者總生存時間為（25.37±9.02）個月，無進展生存時間為（15.21±4.02）個月，高表達miRNA-375 患者總生存時間為（35.19±9.16）個月，無進展生存時間為（19.25±3.43）個月，經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.937 和7.318，P=0.011和0.009），低表達miRNA-375 患者均低于高表達miRNA-375 患者。見圖3、4。

表2 血清miRNA-375 水平與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的Logistics 回歸分析參數(shù)

圖2 血清miRNA-375 診斷腦膠質(zhì)瘤的ROC 曲線

圖3 兩組患者總生存時間的生存曲線

圖4 兩組患者無進展生存時間的生存曲線

3 討論

腦膠質(zhì)瘤在成年人中多見，中青年是腦膠質(zhì)瘤的高發(fā)年齡，腦膠質(zhì)瘤常用的治療方法為手術(shù)治療、放射治療和化學治療。以手術(shù)為主的綜合治療在個別早期膠質(zhì)瘤患者中取得了較好的療效，但大部分膠質(zhì)瘤、特別是高級別腦膠質(zhì)瘤的死亡率仍比較高[8]。除手術(shù)治療、放射治療和化學治療外，其他治療方法尚處在實驗階段，沒有在臨床上推廣。目前最準確的診斷腦膠質(zhì)瘤的方法為組織病理學檢測，但該方法需要外科手術(shù)獲得標本，為有創(chuàng)性操作，因此探索操作方便、敏感性和特異性較高的膠質(zhì)瘤治療方法具有重要 價值[9]。

miRNA 為含有19 ～25 個核苷酸的一種單鏈核糖核酸，在多種病理生理過程中發(fā)揮作用。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的調(diào)控作用，在惡性腫瘤細胞的增殖、凋亡及侵襲等過程中也發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用[10]。有研究發(fā)現(xiàn)多種miRNA 和腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系也比較密切，在腦膠質(zhì)瘤的增殖、侵襲遷移及腦膠質(zhì)瘤的診斷及預后判斷中具有重要價值[11]。

miRNA-375 的生物學功能比較強大，可調(diào)控一系列基因的轉(zhuǎn)錄，參與葡萄糖有關(guān)的胰島素分泌，參與細胞生長和增殖的調(diào)控；在多種惡性腫瘤中表達異常，與多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和預后關(guān)系密切，如miRNA 375 可調(diào)節(jié)非小細胞肺癌細胞的存活和凋亡[12]；miRNA 375 在食管癌組織中呈低表達，與食管癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期關(guān)系密切，參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展[13]；上調(diào)miRNA-375 可增加人胃癌細胞的順鉑敏感性[14]。ZHANG 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-375 在腦膠質(zhì)瘤中的表達也存在異常，腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤組織中miRNA-375 水平降低，過表達miRNA-375 可抑制腦膠質(zhì)瘤細胞的發(fā)展。

血漿和血清中miRNA 比較穩(wěn)定，在不同疾病中具有特異性，并且可以直接檢測出來。膠質(zhì)瘤血清中多種miRNA 存在異常，多種血清miRNA 可作為膠質(zhì)瘤診斷和預測進展的標志物[16-17]。在多種惡性腫瘤血清中miRNA-375 也存在異常，如前列腺癌、乳腺癌及原發(fā)性肝癌患者血清中miRNA-375 水平均存在異常，與患者則預后關(guān)系密切，可作為預后判斷的生物標志物[18-20]。本文對腦膠質(zhì)瘤患者血清miRNA-375水平進行研究，發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤患者血清miRNA-375水平降低，血清miRNA-375 水平與腦膠質(zhì)瘤的術(shù)前KPS 評分和病理分級關(guān)系密切，其診斷腦膠質(zhì)瘤的ROC 曲線下面積為0.871，敏感性為89.36%，特異性為90.13%；低表達miRNA-375 患者總生存時間和無進展生存時間均低于高表達miRNA-375 患者，表明血清miRNA-375 在腦膠質(zhì)瘤的診斷和預后預測中具有重要價值。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者血清miRNA-375 水平降低，血清miRNA-375 有望成為腦膠質(zhì)瘤診斷和預后判斷的潛在生物標志物。