穿心蓮內(nèi)酯超聲提取工藝研究

趙詠梅,齊建紅,黃 童

(西安文理學(xué)院 生物與環(huán)境工程學(xué)院，陜西 西安 710065)

穿心蓮(Andrographispaniculata(Bumf.) Nees)為爵床科穿心蓮屬一年生草本植物[1]，又叫做穿心蓮乙素，味極苦，性寒，有清熱解毒，消炎止痛之功效[2]。穿心蓮原產(chǎn)于印度，在我國分布廣，產(chǎn)量大，主要分布于廣西、 福建、安徽、四川等地[3]。從穿心蓮屬植物中分離得到的化合物主要是二萜內(nèi)酯類和黃酮類[4]。實(shí)驗(yàn)通過正交試驗(yàn)設(shè)計采用超聲波提取法對穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯成分的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究，為穿心蓮的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器設(shè)備

1.1.1 植物材料 穿心蓮全草由西安鴻生生物技術(shù)有限公司提供，穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品含量為95%，購于西安市藥檢所。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 SPD-10Avp高效液相色譜儀(日本島津公司)、KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、FLB-500A型萬能高速粉碎機(jī)(上海菲力博食品機(jī)械有限公司)、SENCO R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生科技有限公司)、SHB-ⅢA循環(huán)水式真空泵(西安禾普生物科技有限公司)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計 選取乙醇濃度(A)、接料量(B)、超聲時間(C)三個因素按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)進(jìn)行正交試驗(yàn)，確定穿心蓮內(nèi)酯的最佳提取工藝(見表1)。

表1 因素與水平

1.2.2 穿心蓮內(nèi)酯的超聲提取 稱取一定量的穿心蓮藥材粉碎，于60目過篩。稱取穿心蓮粉末20g于燒杯中，按照正交實(shí)驗(yàn)條件加入相應(yīng)濃度的一定倍量的乙醇,用保鮮膜封口放入超聲清洗器中進(jìn)行超聲提取，趁熱將提取液真空抽濾，將濾液放入恒溫水浴鍋中微熱，然后秤取5 g活性炭粉末加入濾液中；用磁力攪拌器對濾液進(jìn)行攪拌1 h；攪拌結(jié)束后再過濾一次，留濾液。將濾液濃縮，濃縮后的粘稠液倒入稱好重量的塑料盤內(nèi)在恒溫水浴鍋上蒸發(fā)一定程度后，于50℃微波干燥儀中進(jìn)行微波干燥10 min左右，既得穿心蓮內(nèi)酯粗品。

1.2.3 穿心蓮內(nèi)酯含量檢測 主要有:

(1)色譜條件：檢測穿心蓮內(nèi)脂含量的色譜條件為Diamons.l C18色譜柱, 流動相：甲醇∶水=52∶48，流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：225 nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：20 μL。

(2)標(biāo)品溶液的配制：稱取穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)品7.9 mg于50 mL容量瓶中，加入色譜甲醇超聲溶3 min，待溶液冷卻后定容，再用移液管取2 mL溶液至10 mL容量瓶中，加入流動相(甲醇∶水=52∶45)稀釋定容，搖勻后備用。

(3)樣品含量的檢測： 稱取1.2.2項(xiàng)下的樣品10 mg于50 mL容量瓶中，并用適量色譜甲醇超聲溶解3 min左右，待溶液冷卻后定容。用移液管吸取1 mL溶液至10 mL容量瓶中，再用52%甲醇流動相稀釋定容。按上述色譜條件進(jìn)行測定。

樣品含量=(樣品峰面積×標(biāo)品濃度)/(標(biāo)品峰面積×樣品濃度)×標(biāo)品含量×100%

收率= 提取物質(zhì)量/藥材質(zhì)量

回收率=(提取得到的樣品量×樣品含量)/(藥材用量×藥材含量)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC檢測結(jié)果

以濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線，色譜圖見圖1，圖2。

圖1 穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)品色譜

圖2 穿心蓮標(biāo)品色譜

圖1顯示，穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)品在前十分鐘內(nèi)出現(xiàn)的雜質(zhì)峰很少，峰也較低，在11 min左右時出現(xiàn)主峰，峰高為34 676.54，峰面積為1 027 406.375。

圖2顯示，穿心蓮樣品雜質(zhì)峰較多但都比較小，并且在11 min左右出現(xiàn)了主峰，峰高6 694.750，峰面積為2 028 480 297。樣品中主峰相對于標(biāo)品中的主峰比較低。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選穿心蓮內(nèi)酯提取工藝

表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計結(jié)果

從表2正交數(shù)據(jù)分析可知，影響穿心蓮內(nèi)酯提取效果因素的主次順序?yàn)椋阂掖紳舛?超聲時間>接料量。實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)組合水平組合為A3B1C1，即乙醇濃度為90%，溶劑體積為藥材的8倍量，超聲提取時間為10 min，穿心蓮內(nèi)酯的含量為23.7%。得出乙醇濃度的影響最為顯著，依次超聲時間和接料量。

3 討論

穿心蓮內(nèi)酯是存在于中草藥植物穿心蓮中的一種應(yīng)用非常廣泛的酯類化合物?，F(xiàn)有的藥理學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)穿心蓮內(nèi)酯具有抗病毒、抗菌、抗腫瘤作用和免疫作用等作用。在我國，穿心蓮內(nèi)酯在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用十分廣泛，在動物醫(yī)學(xué)方面的臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其在動物體內(nèi)吸收快、藥效長且生物利用度非常高[5,6]。更重要的是，目前并未發(fā)現(xiàn)其在動物體內(nèi)有明顯的毒副作用，這些優(yōu)點(diǎn)與其他藥物相比有更好的治療效果。 實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法對穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行了提取工藝優(yōu)化研究，結(jié)果表明，影響穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯的最佳提取工藝因素為乙醇濃度>超聲時間>接料量。實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)組合水平組合為A3B1C1，即乙醇濃度為90%，溶劑體積為藥材的8倍量，超聲提取時間為10 min，穿心蓮內(nèi)酯的含量為23.7%。通過優(yōu)化提取工藝研究，為穿心蓮的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了科學(xué)的理論依據(jù)。