陜西一養(yǎng)豬場(chǎng)4種細(xì)菌的流行狀況及分型研究

柳江山,黎 娜,張金蕾,張 倩,楊 俊,彭子欣,李鳳琴,葛武鵬,楊保偉

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，北京 100022)

21世紀(jì)以來，細(xì)菌污染食品所導(dǎo)致的食源性疾病爆發(fā)已成為全球性公共衛(wèi)生問題[1]。沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、部分致病性大腸桿菌和腸球菌都是常見的人畜共患病病原菌，能夠以食品為載體進(jìn)入人體，嚴(yán)重威脅食品安全，給人類健康帶來隱患。

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對(duì)各種畜禽產(chǎn)品的需求量日益增加，這也直接促進(jìn)了我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。就養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)而言，各種大規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)不斷建成，豬場(chǎng)規(guī)模越來越大，存欄數(shù)越來越多。流行于豬場(chǎng)的沙門氏菌等致病菌不僅會(huì)對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成很大的危害，而且也會(huì)對(duì)食品安全產(chǎn)生一定的影響[1, 2]。近年來，由于養(yǎng)豬場(chǎng)規(guī)模的擴(kuò)張，豬場(chǎng)環(huán)境中的細(xì)菌分布發(fā)生了很大變化，空氣、水、土壤、糞便等環(huán)境中的細(xì)菌種類變多，數(shù)量增大，部分致病性細(xì)菌已經(jīng)擴(kuò)散[3]。其中，由糞便污染引起的人畜共患病的傳播與感染已經(jīng)引起人們廣泛關(guān)注。有研究表明，畜禽糞便中大約有150種人畜共患病致病源；畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的污水中，大約每毫升含有超過30萬大腸桿菌和65萬腸球菌[4]。生豬作為大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和腸球菌的宿主，一方面可以通過人畜接觸將這些細(xì)菌直接傳遞給人類；另一方面，這些細(xì)菌也可隨動(dòng)物排泄物、養(yǎng)殖污水、氣溶膠等介質(zhì)污染環(huán)境，進(jìn)而通過食物鏈傳播給社區(qū)人群。因此，筆者研究旨在對(duì)豬源大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和腸球菌等病原菌進(jìn)行調(diào)查研究，為豬場(chǎng)合理防治病原菌提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 按照國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心“動(dòng)物源食物鏈中耐藥性細(xì)菌污染和傳遞機(jī)制研究工作方案”規(guī)定，2015年12月和2016年4月，分別于生豬育肥前期(50～90日齡)和育肥后期(120～130日齡)從陜西省扶風(fēng)縣某豬場(chǎng)4個(gè)豬舍采集豬糞樣品20份、豬鼻拭子20份、豬舍地面涂抹樣品12份、豬舍墻壁涂抹樣品12份、土壤樣品4份、水體樣品3份、養(yǎng)殖人員糞便樣品4份等共150份樣品。該豬場(chǎng)母豬存欄數(shù)為20頭，豬舍30個(gè)，養(yǎng)殖在欄仔豬和育肥豬約300頭。

1.1.2 培養(yǎng)基 緩沖蛋白胨水(Buffered Peptone Water, BPW)、四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基基礎(chǔ)(Tetrathionate Broth，TTB)及添加劑、EC肉湯、mEI培養(yǎng)基、Luria—Bertani(LB)營(yíng)養(yǎng)瓊脂、Rappaport—Vassiliadis(RV)肉湯、Mueller Hinton(MH)瓊脂、麥康凱瓊脂、腦心浸液瓊脂和腦心浸液肉湯培養(yǎng)基均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；XLT4培養(yǎng)基基礎(chǔ)及添加劑購(gòu)自美國(guó)BD公司。PCR用Taq DNA 聚合酶、dNTP、PCR buffer、MgCl2均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司。細(xì)菌檢測(cè)和分型用引物由楊凌天潤(rùn)奧科生物科技有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理 將拭擦獲取墻壁和地面涂抹樣品的海綿頭裝入無菌采樣袋，向采樣袋中加入10 mL無菌BPW，用拍擊式均質(zhì)器快速拍打30 s。豬鼻拭子樣品從運(yùn)送培養(yǎng)基中取出后，用無菌剪刀剪下拭子頭，置于裝有10 mL無菌BPW的試管中渦旋振蕩30 s。取污水、人/豬糞便樣品各25 mL(g)加入裝有225 mL BPW的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器快速拍打1 min。土壤樣品混勻后，稱取25 g加入裝有225 mL BPW的均質(zhì)袋中用拍擊式均質(zhì)器快速拍打1 min。

1.2.2 細(xì)菌的分離、鑒定與分型 主要有:

(1)大腸桿菌的分離和鑒定。按照國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心“動(dòng)物源食物鏈中耐藥性細(xì)菌污染和傳遞機(jī)制研究工作方案”中規(guī)定的方法進(jìn)行。吸取1 mL 混勻的BPW樣品懸液，加入裝有9 mL EC肉湯的試管中，37 ℃增菌培養(yǎng)16～20 h后，觀察EC肉湯管中的倒置玻璃管是否有氣泡產(chǎn)生，有氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性，繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。無氣泡產(chǎn)生為陰性管，停止實(shí)驗(yàn)。

用接種環(huán)取陽(yáng)性管中菌液1環(huán)，劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h；挑取3～5個(gè)大腸桿菌疑似菌落，于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上再純化1次，37 ℃培養(yǎng)18～24 h；挑取2次純化后的疑似菌落接種在MHA平板上，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。

用無菌接種環(huán)挑取MHA平板上的培養(yǎng)物制作模板，進(jìn)行PCR鑒定。PCR鑒定中大腸桿菌ATCC25922用作陽(yáng)性對(duì)照。PCR反應(yīng)體系為：總體積25 μL，PreMix10 μL，正向引物(50 pM·mL-1)0.3 μL，反向引物(50 pM·mL-1)0.3 μL，ddH2O 12.4 μL，模板DNA 2 μL。大腸桿菌鑒定用引物如表1所示。

PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 預(yù)變性6 min；95 ℃ 0.5 min，55 ℃ 0.5 min，72 ℃ 0.5 min 30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7 min 。PCR產(chǎn)物電泳后，與標(biāo)準(zhǔn)菌株相比，若供試菌的擴(kuò)增結(jié)果同在450 bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶則為陽(yáng)性菌株。PCR陰性擴(kuò)增結(jié)果重復(fù)3次，如仍均為陰性，判斷結(jié)果為陰性。

(2)大腸桿菌分型。采用多重PCR檢測(cè)腸出血性大腸桿菌(EnterohemorrhagicEscherichiacoli; EHEC)、腸致病性大腸桿菌(EnteropathogenicEscherichiacoli; EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli; ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EnteroinvasiveEscherichiacoli; EIEC)和腸聚集性大腸桿菌(EnteroaggregativeEscherichiacoli; EAEC)在大腸桿菌分離株中的流行狀況。

使用12種基因用于5類大腸桿菌的分型和檢測(cè)，具體為：EPEC(escV、bfpB)、EHEC(stxlA、stx2A、escV )、ETEC(elt、estIa、estIb)、EIEC(invE)和EAEC(astA、aggR、pic)[5]。PCR反應(yīng)體系、條件和陽(yáng)性結(jié)果判定同(1)大腸桿菌PCR檢測(cè)，擴(kuò)增中退火溫度隨所用引物而定。

不同亞型大腸桿菌判定標(biāo)準(zhǔn)：bfpB和escV 2個(gè)基因同時(shí)擴(kuò)增陽(yáng)性可判定為典型EPEC，僅有escV基因?yàn)椴坏湫虴PEC；stx1、stx2或escV任一基因陽(yáng)性即判定為EHEC；elt和/或estla基因陽(yáng)性，estlb陽(yáng)性可判定為ETEC，僅estlb陽(yáng)性也可判定為ETEC；invE陽(yáng)性即可判定為EIEC；pic、aggR、astA中任一基因陽(yáng)性、兩兩組合或者全部陽(yáng)性均可判定為EAEC。

1.2.3 腸球菌分離、鑒定和分型 主要有:

(1)腸球菌的分離和鑒定。吸取1 mL BPW樣品懸液，加入裝有9 mL腸球菌增菌肉湯的試管，37 ℃培養(yǎng)20～24 h進(jìn)行選擇性增菌。取1環(huán)腸球菌增菌液，劃線接種于mEI平板，37 ℃培養(yǎng)40～48 h。每個(gè)平板挑取帶有藍(lán)黑色暈輪的疑似菌落3～5個(gè)，不足3個(gè)疑似菌落的平板，將疑似菌落全部挑取進(jìn)行驗(yàn)證。疑似菌落在MHA培養(yǎng)基上劃線純化，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后挑取MHA平板上的培養(yǎng)物制備模板，進(jìn)行PCR鑒定。PCR反應(yīng)體系和條件同1.2.1(1)大腸桿菌PCR檢測(cè)，退火溫度因引物序列而定。糞腸球菌ATCC29212用作腸球菌PCR鑒定的陽(yáng)性對(duì)照菌株，與標(biāo)準(zhǔn)條帶相比，若疑似菌的擴(kuò)增產(chǎn)物在112 bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶則為陽(yáng)性菌株。

(2)腸球菌分型。采用PCR對(duì)腸球菌分型(表2)[6]。PCR反應(yīng)體系和條件同1.2.2(1)大腸桿菌PCR檢測(cè)，退火溫度如表2所示。

表1 大腸桿菌鑒定和分型用引物及相應(yīng)擴(kuò)增片段大小

表2 腸球菌鑒定和分型用引物及相應(yīng)擴(kuò)增片段大小

1.2.4 沙門氏菌分離、檢測(cè)和分型 主要有:

(1)沙門氏菌分離和檢測(cè)。分別吸取1 mL BPW樣品懸液，加入裝有9 mL RV和SC增菌液的離心管中，振蕩均勻后RV肉湯于42 ℃培養(yǎng)18～24 h，SC肉湯于37 ℃培養(yǎng)18～24 h。分別取1環(huán)RV和SC增菌液，劃線接種XLT4平板，37 ℃培養(yǎng)24～48 h，挑取疑似菌落。疑似菌落在XLT4培養(yǎng)基上再次純化后，劃線LB平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。挑取LB平板培養(yǎng)物制作模板進(jìn)行PCR鑒定。鑒定中Salmonella typhimurium LT2用作陽(yáng)性對(duì)照，PCR反應(yīng)體系和條件同1.2.2(1)大腸桿菌PCR檢測(cè)。引物分別為invA-F：5’-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3’和invA-R：5’-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3’。

(2)沙門氏菌血清分型。采用玻片凝集法對(duì)沙門氏菌進(jìn)行血清分型。使用泰國(guó)S&A公司生產(chǎn)的沙門氏菌診斷血清，按照沙門氏菌血清診斷操作步驟進(jìn)行，查閱S&A公司沙門氏菌抗血清診斷附錄和沙門氏菌檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T4789.4-2016)，根據(jù)測(cè)定得到的抗原確定沙門氏菌的血清型。

1.2.5 金黃色葡萄球菌的分離、檢測(cè)和分型 主要有:

(1)金黃色葡萄球菌的分離和檢測(cè)。吸取1 mL BPW樣品懸液，加入9 mL 7.5% NaCl肉湯，37 ℃培養(yǎng)16～20 h。取1環(huán)增菌液劃線接種于Baird-Parker平板，37 ℃培養(yǎng)36～48 h。挑取Baird-Parker平板上的可疑菌落，劃線于血平板上，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落是否產(chǎn)生溶血圈。如菌落周圍可見完全透明溶血圈，則判定為陽(yáng)性結(jié)果。同時(shí)進(jìn)行PCR鑒定，鑒定時(shí)使用nuc1和nuc2作為引物、ATCC29213作為陽(yáng)性對(duì)照。PCR反應(yīng)體系和條件同1.2.2(1)大腸桿菌PCR檢測(cè)條件。與陽(yáng)性對(duì)照菌目標(biāo)基因擴(kuò)增條帶相比，若疑似菌在694 bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶則為陽(yáng)性菌株(表3)。

(2)金黃色葡萄球菌SPA和MRSA分型。采用PCR結(jié)合DNA序列測(cè)定對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行SPA和MRSA分型。PCR所用引物如表3所示，PCR反應(yīng)體系和條件如1.2.2(1)。

表3 金黃色葡萄球菌鑒定、SPA分型和MRSA分型用引物及相應(yīng)擴(kuò)增片段大小

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 用Minitab進(jìn)行數(shù)據(jù)處理, 通過χ2檢驗(yàn)比較檢出陽(yáng)性率,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 種細(xì)菌在豬育肥前期和后期的檢出狀況

在采集的150份樣品中，4種細(xì)菌均有不同程度檢出。其中，腸球菌陽(yáng)性樣品檢出率最高(81.3%)，其次分別為大腸桿菌(66.7%)、沙門氏菌(22.7 %)和金黃色葡萄球菌(6.67 %)陽(yáng)性樣品。

育肥前期采集的75份樣品中，腸球菌陽(yáng)性樣品檢出率為89.3%，顯著(P<0.05)高于育肥后期樣品中該菌陽(yáng)性樣品的檢出率(73.3%)。育肥前期沙門氏菌陽(yáng)性樣品檢出率(38.7%)顯著(P<0.05)高于育肥后期(6.67%)，育肥前期金黃色葡萄球菌檢出率(12.0%)也顯著(P<0.05)高于育肥后期(1.33%)。育肥前期大腸桿菌陽(yáng)性樣品的檢出率(69.3 %)與育肥后期(64.0 %)無顯著性差異。

總體來看，4種細(xì)菌在生豬育肥前期所采樣品中的檢出率均高于后期，除大腸桿菌外，其余3種細(xì)菌在豬育肥前、后期的檢出率間均存在顯著性差異。

2.2 種菌在不同類型樣品中的檢出狀況

育肥前期采集的樣品中，污水中大腸桿菌陽(yáng)性樣品的檢出率為100 %，其它依次為豬鼻(90.0%)、豬糞(80.0%)、墻壁(66.6%)、地面(41.6%)、人糞和土壤(25.0%)。育肥后期大腸桿菌在污水中的檢出率仍然最高(100%)，其它分別為豬糞(90.0%)、地面(83.3%)、人糞(75.0%)、豬鼻(60.0%)和墻壁(16.6%)，未在土壤中檢出大腸桿菌。除污水外，大腸桿菌陽(yáng)性樣品在豬育肥前期和后期采集樣品中的檢出率均存在顯著性(P<0.05)差異。

育肥前期，腸球菌陽(yáng)性樣品在地面、土壤和污水中的檢出率均為100%，在其它樣品中的檢出狀況分別為墻壁(91.6%)、豬糞(90.0%)、豬鼻(65.0%)和人糞(50.0%)。育肥后期，人糞和污水中檢出率為100%，其它依次為豬糞(90.0%)、地面(83.3%)、墻壁(66.6%)和豬鼻(55.0%)，土壤中檢出率最低(25.0%)。除污水和豬糞以外，腸球菌在育肥前、后期采集的其它樣品中的檢出率間均存在顯著性差異。

圖1 4種細(xì)菌在生豬育肥前期和后期不同樣品中的檢出率

育肥前期沙門氏菌陽(yáng)性樣品在污水中的檢出率最高(66.6 %)，其次是豬糞(30.0%)、地面(33.3%)和豬鼻(30.0%)，在墻壁、人糞和土壤樣品中的檢出率均為25.0%。育肥后期豬糞中沙門氏菌陽(yáng)性樣品檢出率最高(15.0%)，其次為墻壁(8.30%)和豬鼻(5.00%)，未在其它樣品中檢出沙門氏菌。沙門氏菌陽(yáng)性樣品檢出率在育肥前期和后期采集樣品中均存在顯著性(P<0.05)差異。

金黃色葡萄球菌陽(yáng)性樣品在育肥前期采集的墻壁涂抹樣品中檢出率最高(16.6%)，其次分別為豬糞(15.0%)和地面樣品(8.3%)。只在育肥后期采集的地面樣品中檢出金黃色葡萄球菌(8.3%)。

2.3 大腸桿菌、腸球菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌分型

85株大腸桿菌中，43株大腸桿菌使用PCR和本研究所用引物未能分出型別，在可分型菌株中EAEC的檢出率最高(40.0%)，其次分別為ETEC(7.06%)、EPEC(1.17%)和EIEC(1.17%)，未檢出EHEC。

87株腸球菌可分為4個(gè)亞型，其中糞腸球菌50株(58.62%)，屎腸球菌9株(9.2%)，雞腸球菌4株(4.6%)，其它類型腸球菌24株(27.58%)。

血清分型結(jié)果表明33株沙門氏菌均為鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhimurium)。

7株金黃色葡萄球菌中，檢出1株(14.3%)MRSA，該菌分離自豬糞，SPA型為T441。其余6株金黃色葡萄球菌中有2株T701型，T189型和T899型各1株，2株無法分型。

3 討 論

研究表明，該豬場(chǎng)的環(huán)境、豬體和飼養(yǎng)員糞便樣品中均有4種細(xì)菌檢出，而且檢出率較高。在生豬育肥前、后期采集的150份樣品中，腸球菌陽(yáng)性樣品檢出率為81.3%，大腸桿菌為66.7%，沙門氏菌為22.7 %。雖然金黃色葡萄球菌陽(yáng)性樣品檢出率較低，但仍達(dá)6.67 %。

陳茹[7]研究表明，2014年10月至2015年4月，陜西省一規(guī)模化豬場(chǎng)中大腸埃希菌(100%)、葡萄球菌(9.3%)和沙門氏菌(2.33%)均有不同程度的流行。李楠等[8]于2010年從吉林省某豬場(chǎng)檢出的大腸桿菌陽(yáng)性樣品率為17.4%，雖然檢出率較低，但大腸桿菌仍是多種細(xì)菌陽(yáng)性樣品檢出率中最高者。這些研究結(jié)果均與筆者研究類似，表明大腸桿菌在豬場(chǎng)中普遍存在，且檢出率較其它菌株高。

4種細(xì)菌在豬育肥前、后期的檢出率有所不同。對(duì)于該豬場(chǎng)來講，育肥前期(冬季)檢出率總體上大于育肥后期(春季)，除大腸桿菌之外，其它3種細(xì)菌在育肥前期和后期的檢出率間均存在顯著性差異。根據(jù)我們的實(shí)地調(diào)研和飼養(yǎng)員分析，這可能是因?yàn)殛兾鞯靥庩P(guān)中地區(qū)，冬季天氣寒冷，為了保溫，豬舍窗戶開啟時(shí)間短，通風(fēng)效果不好，舍內(nèi)溫度、濕度升高后營(yíng)造出了適宜細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的環(huán)境條件。而春季豬舍內(nèi)通風(fēng)良好，環(huán)境相對(duì)干燥，不適宜大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)，因此育肥前期的檢出率較高。

研究表明，該豬場(chǎng)豬源大腸桿菌以EAEC為主，這與浙江工業(yè)大學(xué)2014年對(duì)杭州地區(qū)豬場(chǎng)中大腸桿菌的分型結(jié)果[9]類似，其結(jié)果顯示豬場(chǎng)中EAEC檢出率最高(22.1%)，其次為ETEC(1.47%)，未檢出EPEC。EAEC感染是發(fā)展中國(guó)家腹瀉的重要病因之一。巴西的研究數(shù)據(jù)表明，EAEC感染是小兒腹瀉最常見的病因，在<2歲的兒童中，EAEC與發(fā)病具有較高的相關(guān)性[10]。此外，EAEC還與旅行者腹瀉相關(guān)。在美國(guó)，EAEC是繼ETEC之后，導(dǎo)致成年旅行者腹瀉的第2大病原菌，在去墨西哥旅游的美國(guó)成年人中，雖然大多數(shù)人無腹瀉癥狀，但48%的人出現(xiàn)了抗集聚蛋白Dispersin抗體的升高[11]。墨西哥一項(xiàng)有關(guān)餐桌調(diào)味品的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，在44%的調(diào)味品中可檢測(cè)到EAEC[12]。伊朗的研究[13]發(fā)現(xiàn)，140例腹瀉兒童病例中，有15例(10.7%)由EAEC感染導(dǎo)致。EAEC所導(dǎo)致的腹瀉在孟加拉國(guó)和中非也有很高的發(fā)病率[14, 15]。我國(guó)是豬肉生產(chǎn)大國(guó)，豬肉也是我國(guó)消費(fèi)者最主要的食用肉品之一，在豬場(chǎng)中大量檢出的致病性大腸桿菌非常有可能隨著生豬屠宰、分割和銷售等環(huán)節(jié)進(jìn)入消費(fèi)者的餐桌，導(dǎo)致食品安全事件發(fā)生。

此外，筆者研究結(jié)果表明所調(diào)查豬場(chǎng)中糞腸球菌占比最高(58.62%)，屎腸球菌較少(9.62%)，其它類型的腸球菌占比27.58%。其它類型腸球菌中主要包含了不常見的腸球菌亞型，即：鳥腸球菌、酪黃腸球菌、堅(jiān)忍腸球菌、惡臭腸球菌、芒地腸球菌和希拉腸球菌等共6種。這與董鵬等[16]對(duì)河南省4個(gè)地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬肛門拭子樣品中糞腸球菌的研究結(jié)果(51.33%)比較類似。王送林[17]從湖南省部分豬場(chǎng)健康豬腸道內(nèi)共分離到腸球菌115株，其中糞腸球菌11株，屎腸球菌59株，其他腸球菌45株，表明湖南省豬源腸球菌以糞腸球菌和屎腸球菌為主，只是屎腸球菌更為普遍，與筆者研究分型結(jié)果略有不同。與趙麗青等[18]報(bào)道的省青島地區(qū)動(dòng)物源糞腸球菌檢出率(76.90%)，幸文定[19]報(bào)道的江西省7個(gè)地區(qū)豬源糞腸球菌檢出率(64.80%)相比，筆者研究中糞腸球菌檢出率略低，這可能是由于筆者研究中所采集的樣品除糞便外，還有環(huán)境樣品等原因有關(guān)。

筆者研究中，分離到的沙門氏菌血清型均為鼠傷寒，血清型單一。中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心李月華等[20]對(duì)2012-2017年分離自山東等6省份的89株豬源沙門氏菌進(jìn)行了血清型鑒定，結(jié)果顯示豬源菌株以鼠傷寒(58.43%)、腸炎(12.36%)、印第安納(11.24%)和德爾卑(7.87%)為主。過效民[21]的研究結(jié)果則顯示從河南省鄭州、開封、焦作和許昌4個(gè)地市生豬屠宰場(chǎng)檢出的沙門氏菌以德爾卑沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌為主。在四川省豬調(diào)查的結(jié)果表明豬源沙門氏菌血清型以德爾卑為主(60.26%)，其次是鼠傷寒(16.56%)和羅森(6.60%)[22]。在哈爾濱卻以豬霍亂(71.40%)血清型為主，其次為豬傷寒(22.90%)和鼠傷寒(5.70%)[23]。與現(xiàn)有研究結(jié)果相比，可發(fā)現(xiàn)豬源沙門氏菌的主要血清型受地域影響較大，隨地域不同而有所不同，但在各地豬源沙門氏菌中均有鼠傷寒沙門氏菌檢出。

7株金黃色葡萄球菌中有1株MRSA檢出。2013年，中國(guó)食品藥品檢定研究院研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖生豬是MRSA的重要宿主[24]。該研究還顯示，2013年河北省檢出MRSA 28株(25.0%)，湖北省檢出16株(12.1%)，陜西省檢出12株(8.51%)，四川省檢出2株(1.60%)。這表明，在我國(guó)，豬場(chǎng)MRSA檢出率并不高，且在地區(qū)間MRSA檢出狀況不同。結(jié)合筆者研究的數(shù)據(jù)可以看出，陜西省豬源MRSA分布與其他省份相比并不廣泛。另外，雖然筆者研究中只分離到7株金黃色葡萄球菌，但卻涵蓋了4種SPA型，分別是T701型(2株)、T441型(1株)、T189型(1株)和T899型(1株)，剩余2株暫未分出SPA型，表明陜西省豬源金黃色葡萄球菌SPA型的多樣性較高。而中國(guó)食品藥品檢定研究院的研究顯示，從4個(gè)省31個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)和2個(gè)豬屠宰場(chǎng)中獲得的58株MRSA均屬于同1個(gè)spa型(07-16-23-02-34，t899)，與本研究結(jié)果有所不同。

綜上，筆者研究所調(diào)查的豬場(chǎng)中4種細(xì)菌分布較為廣泛，型別相對(duì)較多，且檢出很多致病性型別的菌株。該4種細(xì)菌可能會(huì)給生豬養(yǎng)殖、豬肉產(chǎn)業(yè)鏈和豬肉安全健康發(fā)展帶來潛在的安全隱患，所以，應(yīng)結(jié)合研究結(jié)果對(duì)豬場(chǎng)加強(qiáng)管理，控制細(xì)菌的生長(zhǎng)和污染，從源頭上為豬肉食品安全把關(guān)。