內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)的可培養(yǎng)黏細(xì)菌及其抗菌活性

王雪寒 馬強(qiáng) 田媛 胡靖 劉惠榮

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018）

黏細(xì)菌屬于革蘭氏陰性真細(xì)菌，是一類(lèi)形態(tài)特殊復(fù)雜、具有明顯的社會(huì)學(xué)特征的細(xì)菌［1]。由于黏細(xì)菌的分離純化較困難，黏細(xì)菌的研究比其他細(xì)菌少很多。但隨著分離純化方法的不斷探索與改進(jìn)，菌株來(lái)源不斷增加。近年來(lái)隨著各國(guó)學(xué)者對(duì)黏細(xì)菌研究工作的深入，黏細(xì)菌的新型種屬不斷涌現(xiàn)，當(dāng)前德國(guó)生物技術(shù)中心（GBF）共確定黏細(xì)菌菌株7 500多株，同時(shí)黏細(xì)菌保存的種屬與數(shù)量最多，山東大學(xué)及河北大學(xué)等高校更是推動(dòng)了國(guó)內(nèi)黏細(xì)菌分離純化的順利進(jìn)行。黏細(xì)菌具有復(fù)雜的生活史和多細(xì)胞行為，可以滑行運(yùn)動(dòng)，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)各異、種類(lèi)多樣、活性高效的次級(jí)代謝產(chǎn)物，尤其是Epothilones（埃博霉素）［2-3]在抗腫瘤方面成效顯著，使黏細(xì)菌成為開(kāi)發(fā)潛力巨大的一類(lèi)生物類(lèi)群［4-6]，更是發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)天然生物活性物質(zhì)的“微工廠”［7]，在農(nóng)業(yè)、生態(tài)、醫(yī)藥等方面具有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值［8-14]。

呼倫貝爾市地處內(nèi)蒙古自治區(qū)東北部，地處東經(jīng) 115°31'-126°04'、北緯 47°05'-53°20'。其地形總體特征為西高東低，地勢(shì)由西到東逐漸過(guò)渡，該地區(qū)地處溫帶北部，屬溫帶大陸性氣候，晝夜溫差和降水量差異大，降水期多集中在7-8月。呼倫貝爾市國(guó)土面積2.5×107hm2，各類(lèi)資源豐富，類(lèi)型多種多樣，農(nóng)耕地土壤類(lèi)型主要以黑土、暗棕壤、黑鈣土和草甸土為主，質(zhì)地肥沃，肥力高，由于近年來(lái)人們對(duì)牧區(qū)、草原的過(guò)度開(kāi)墾，導(dǎo)致土壤肥力逐漸下降，荒漠化現(xiàn)象也日趨嚴(yán)重，使其成為生態(tài)環(huán)境脆弱區(qū)［14]。

呼倫貝爾地形得天獨(dú)厚，自然資源以及土壤類(lèi)型多樣，這些都預(yù)示著該地區(qū)黏細(xì)菌資源的豐富性。本研究首次對(duì)內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)的可培養(yǎng)黏細(xì)菌資源的多樣性進(jìn)行研究，并對(duì)黏細(xì)菌的分布與環(huán)境因子之間的相關(guān)性及其抗菌活性進(jìn)行初步分析，為今后該地區(qū)黏細(xì)菌資源的開(kāi)發(fā)利用與活性物質(zhì)研究的進(jìn)一步探究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試土樣 2016年8月從呼倫貝爾地區(qū)共采集土壤樣品20份。采集的土樣要具備均一性和代表性。根據(jù)采樣區(qū)域的大小確定取樣點(diǎn)數(shù)，一般面積大于3.3 hm2要取超過(guò)15個(gè)樣點(diǎn)，小于0.7 hm2取5-10個(gè)樣點(diǎn)，面積在二者之間則取10-15個(gè)點(diǎn)。以對(duì)角線或蛇形的方式布置采樣點(diǎn)，去除土壤表層雜質(zhì)后，挖一個(gè)5 cm左右深度的“凹”字土坑，再混勻所有挖出的土樣，將其中的1/4收在封口袋內(nèi)。依照《中國(guó)土壤分類(lèi)與代碼》（GB/T 17296-2009）內(nèi)土壤的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，確定呼倫貝爾地區(qū)的土壤類(lèi)型（表1）。測(cè)定含水量后于室溫自然陰干，過(guò)60目篩室溫保存（表 2）。

表1 土壤類(lèi)型分類(lèi)表

1.1.2 培養(yǎng)基 WCX固體培養(yǎng)基（pH6.0、6.5、7.2）、VY/2固體培養(yǎng)基（pH7.2）、ST21CX固體培養(yǎng)基、CAS液體培養(yǎng)基、土豆葡萄糖瓊脂（PDA）固體培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨固體及液體培養(yǎng)基、酵母蛋白葡萄糖（YPD）液體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基參考Rechenbach等［15]的研究。

1.2 方法

1.2.1 土壤樣品環(huán)境參數(shù)的測(cè)定 測(cè)土壤含水量采用烘干法［16]，測(cè) pH 值采用電位法［17]，測(cè)有機(jī)質(zhì)采用重鉻酸鉀容量法（稀釋熱法）［18]，測(cè)速效鉀采用NaNO3浸提-四苯硼鈉比濁法［19]，測(cè)有效磷采用NaHCO3浸提-鉬銻抗比色法［20]，測(cè)水解氮采用堿解擴(kuò)散法［21]。

表2 土壤樣品信息

1.2.2 黏細(xì)菌的分離 土樣預(yù)處理：取約50 g土樣于滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，加入終濃度100 mg/mL的放線菌酮溶液浸泡過(guò)夜。

在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用無(wú)菌槍頭挑取黃豆粒大小的浸泡過(guò)夜土樣接種到涂有大腸桿菌劃線的WCX培養(yǎng)基內(nèi)和鋪有濾紙的ST21CX培養(yǎng)基內(nèi)，另挑取粒大飽滿的滅菌兔糞3顆放入鋪有浸泡土樣的ST21CX培養(yǎng)基內(nèi)，30℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，分別于2 d，10 d和7 d后開(kāi)始觀察是否有子實(shí)體形成及濾紙降解情況，及時(shí)轉(zhuǎn)接到VY/2固體培養(yǎng)基和ST21CX固體培養(yǎng)基上。

1.2.3 黏細(xì)菌的純化及保存 采用子實(shí)體反復(fù)轉(zhuǎn)接的方法對(duì)黏細(xì)菌進(jìn)行純化，直至無(wú)其他雜菌為止。挑取純化好的菌株于CAS液體培養(yǎng)基內(nèi)30℃，180 r/min振蕩培養(yǎng)24 h，若培養(yǎng)基澄清則表明該菌株已純，用25%滅菌甘油于-80℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.4 黏細(xì)菌的鑒定 通過(guò)Nikon SMZ275體視顯微鏡和Sony數(shù)碼相機(jī)對(duì)純化的菌株進(jìn)行形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察拍照，并參照《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》和《原核生物學(xué)》的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步鑒定。再采用NaOH-CTAB法提取黏細(xì)菌的基因組DNA，并以通用引物27 F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和 1495 R（5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'）進(jìn)行16S rRNA基因序列擴(kuò)增。擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性 3 min，94℃變性 30 s，55℃退火 45 s，72℃延伸90 s，共30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。電泳檢測(cè)后將PCR產(chǎn)物送至北京博邁德基因技術(shù)有限公司測(cè)序，利用BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)的已知序列進(jìn)行同源性比對(duì)。

1.2.5 黏細(xì)菌抗菌活性的檢測(cè) 將大腸桿菌DH-5α（Escherichia coliDH-5α）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和枯草芽孢桿菌（Bcicius subtilis）的菌液接入已滅菌的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃，180 r/min 的條件下振蕩培養(yǎng)16 h，第2天將3種菌的液體培養(yǎng)基進(jìn)行離心，取菌體沉淀分別涂布在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，晾干。用滅菌的藍(lán)槍頭扎取已純化的黏細(xì)菌，將黏細(xì)菌菌餅倒扣在涂有指示細(xì)菌的培養(yǎng)基上，并在培養(yǎng)基邊緣放上相同大小的VY/2培養(yǎng)基菌餅作空白對(duì)照，37℃恒溫培養(yǎng)48 h后觀察抑菌情況。將釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）接入已滅菌的YPD液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)18 h后，均勻涂布在PDA培養(yǎng)基上，晾干。將其菌餅倒扣在涂有指示細(xì)菌的培養(yǎng)基上，并在培養(yǎng)基邊緣放上VY/2培養(yǎng)基菌餅作空白對(duì)照，37℃恒溫培養(yǎng)40 h后觀察抑菌情況。將核盤(pán)菌（Sclerotinia sclerotiorum）、立枯絲核菌（Rhizoctonia solanikuhn）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）的菌餅放入PDA培養(yǎng)基中心，馬鈴薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）的菌餅放入黑麥培養(yǎng)基中心，再將黏細(xì)菌菌餅分別倒扣在距指示真菌約2 cm處，VY/2培養(yǎng)基菌餅作空白對(duì)照，18℃恒溫培養(yǎng)7 d后觀察抑菌情況。

2 結(jié)果

2.1 土樣環(huán)境參數(shù)測(cè)定

對(duì)內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)采集的20份土壤樣品進(jìn)行了含水量、pH、速效鉀、有機(jī)質(zhì)、有效磷和水解氮含量的測(cè)定（表3）。

表3 土壤樣品參數(shù)

將呼倫貝爾地區(qū)的20個(gè)土壤樣品的環(huán)境參數(shù)指標(biāo)與養(yǎng)分含量分別與全國(guó)第二次土壤普查的各級(jí)土壤養(yǎng)分指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比，可以得出該地區(qū)土壤整體呈酸性，其中55%為強(qiáng)酸性土壤，30%為微酸性土壤，10%為極度酸性土壤，僅5%為中性土壤；80%的土樣處于輕旱至重旱狀態(tài)，10%的土樣含水量處于適宜狀態(tài)，10%處于偏濕狀態(tài)；45%的土樣有機(jī)質(zhì)含量處于低和很低水平，25%處于中等水平，30%處于高水平；90%的土樣有效磷含量處于極低的水平，只有5%的土樣處于中等水平；55%的土樣速效鉀含量處于低和很低水平，35%處于中等水平，10%處于高水平；水解氮的含量整體呈高水平，65%的土樣處于極高水平，15%處于高水平，10%處于中等水平，10%處于低和很低水平。

2.2 黏細(xì)菌的分離及鑒定

利用3種分離方法對(duì)20份土壤樣品進(jìn)行黏細(xì)菌分離，共得到106株細(xì)菌，通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定及16S rRNA基因序列比對(duì)，得到黏細(xì)菌共41株（表4），包括黏球菌屬（Myxococcus）20株、珊瑚球菌屬（Corallococcus）13株、孢囊桿菌屬（Cystobacter）5株、原囊菌屬（Archangium）3株共4個(gè)屬；弱小珊瑚球菌（Corallococcus exiguous）13株、橙色黏球菌（Myxococcus fulvus）12株、黃色黏球菌（Myxococcus xanthus）8株、過(guò)渡原囊球菌（Archangium gephyra）3株和紫色孢囊桿菌（Cystobacter violaceus）5株共5個(gè)種（圖1）。其中，通過(guò)大腸桿菌劃線誘導(dǎo)法得到的分離菌株數(shù)及純化菌株數(shù)均為最高，經(jīng)鑒定共獲得的4個(gè)屬5個(gè)種的黏細(xì)菌，且各種屬黏細(xì)菌菌株數(shù)也較其他方法多；濾紙誘導(dǎo)法分離到的菌株數(shù)略低于大腸桿菌誘導(dǎo)法，但該法并沒(méi)有純化出黏細(xì)菌，故其純菌率為0；兔糞誘導(dǎo)法雖然分離出的菌株數(shù)最少，但純化得到黏細(xì)菌11株，純菌率為57.89%，經(jīng)鑒定該法共獲得2個(gè)屬3個(gè)種的黏細(xì)菌（表5）。

圖1 部分黏細(xì)菌菌落形態(tài)圖及相應(yīng)的子實(shí)體圖（30×）

2.3 不同土樣利用方式黏細(xì)菌的分布

通過(guò)表1可知呼倫貝爾地區(qū)共有4種土樣利用方式，即草地（8份）、林地（6份）、耕地（4份）和未利用（2份）。不同土樣利用方式黏細(xì)菌的分布有所差異（圖2），耕地平均每個(gè)樣品中得到的分離菌株數(shù)和純化菌株數(shù)均高于其他利用方式的土樣，分別為7.25和2.75，未利用土地次之，草地第三，林地平均每個(gè)樣品中得到的分離菌株數(shù)和純化菌株數(shù)最低。

表4 菌株16S rRNA基因序列相似性比對(duì)分析

圖2 不同利用方式樣品分離純化的菌株數(shù)

表5 不同分離方法中黏細(xì)菌的分布情況

統(tǒng)計(jì)不同土壤利用方式中黏細(xì)菌種屬的分布情況（表6），4種土樣利用方式中均純化出Corallococcus exiguous、Myxococcus xanthus、Myxococcus fulvus和Cystobacter violaceus， 只 有 草地和林地土樣中純化出了Archangium gephyra。其中，耕地平均每個(gè)樣品中的Corallococcusexiguous、Myxococcus xanthus、Myxococcus fulvus較 多，Cystobacter violaceus數(shù) 量 較 少， 沒(méi) 有Archangium gephyra；未利用土地平均每個(gè)樣品中的Corallococcus exiguous數(shù)量較多，Myxococcus xanthus、Myxococcus fulvus、Cystobacter violaceus數(shù) 量 較 少，沒(méi)有Archangium gephyra；草地平均每個(gè)樣品中的Myxococcus fulvus數(shù)量最多，Corallococcus exiguous次之，后續(xù)依次為Myxococcus xanthus、Archangium gephyra，而Cystobacter violaceus數(shù)量最少；林地平均每個(gè)樣品中的Corallococcus exiguous數(shù)量最多，Myxococcus fulvus次 之，Myxococcus xanthus、Archangium gephyra和Cystobacter violaceus數(shù)量最少。

表6 不同利用方式土壤中黏細(xì)菌的分布

2.4 不同土壤類(lèi)型黏細(xì)菌的分布

由表1可知呼倫貝爾地區(qū)土樣共有8個(gè)土壤類(lèi)型，即灰色森林土（1份）、沼澤土（3份）、黑土（4份）、草甸土（3份）、暗棕壤土（2份）、風(fēng)沙土（1份）、栗鈣土（3份）、棕色針葉林土（3份）。不同土壤類(lèi)型中黏細(xì)菌的分布有所差異（圖3），黑土平均每個(gè)樣品分離菌株數(shù)最高，為6.5，后續(xù)依次為草甸土、栗鈣土、沼澤土、暗棕壤、風(fēng)沙土、棕色針葉林；沼澤土和栗鈣土平均每個(gè)樣品的純化菌數(shù)最高，均為2.67，之后依次為后續(xù)草甸土、黑土、暗棕壤土、風(fēng)沙土、棕色針葉林土，灰色森林土平均每個(gè)樣品中分離菌株數(shù)和純化菌株數(shù)最低。

統(tǒng)計(jì)不同土壤類(lèi)型黏細(xì)菌種屬的分布情況（表7），只有黑土中5個(gè)種屬的黏細(xì)菌都有分布，灰色森林土樣中未純化出黏細(xì)菌，暗棕壤土僅純化出Corallococcus exiguous。沼澤土平均每個(gè)土樣中純化出的Myxococcus xanthus數(shù)量最多，Corallococcus exiguous和Cystobacter violaceus較 少，Myxococcus fulvus數(shù)量最少，沒(méi)有Archangium gephyra；黑土平均每個(gè)土樣中純化出的Myxococcus xanthus、Corallococcus exiguous、Archangium gephyra和Cystobacter violaceus數(shù)量相同且最多，Myxococcus fulvus最少；栗鈣土平均每個(gè)土樣中純化出的Myxococcus fulvus數(shù)量最多，Myxococcus xanthus次之，Corallococcus exiguous最少，未純化出Archangium gephyra和Cystobacter violaceus；棕色針葉林土中平均每個(gè)土樣中純化出Corallococcus exiguous最多，后續(xù)依次為Myxococcus xanthus、Archangium gephyra和Cystobacter violaceus，未純化出Myxococcus fulvus；草甸土和風(fēng)沙土平均每個(gè)土樣中純化得到的Myxococcus fulvus數(shù)量最多，Corallococcus exiguous較少，且均未純化出Myxococcus xanthus、Archangium gephyra和Cystobacter violaceus。

圖3 不同土壤類(lèi)型樣品分離純化的菌株數(shù)

2.5 黏細(xì)菌分布與環(huán)境因子的相關(guān)性分析

利用SPSS 19.0軟件對(duì)呼倫貝爾地區(qū)黏細(xì)菌的分布與其環(huán)境參數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行分析（表8）?？梢钥闯鲈摰貐^(qū)分離得到的黏細(xì)菌總數(shù)和菌株總數(shù)均與含水量、pH、有機(jī)質(zhì)、有效磷和水解氮含量呈正相關(guān)，均與速效鉀含量呈負(fù)相關(guān)，但土樣的各環(huán)境參數(shù)與分離得到的黏細(xì)菌總數(shù)和菌株總數(shù)并未有顯著的相關(guān)性。

表7 不同土壤類(lèi)型黏細(xì)菌的分布

表8 呼倫貝爾地區(qū)黏細(xì)菌的分布與環(huán)境參數(shù)之間的相關(guān)性

2.6 黏細(xì)菌抗菌活性分析

對(duì)41株黏細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性檢測(cè)，通過(guò)測(cè)量抑菌圈的大小來(lái)確定其抗菌活性的強(qiáng)弱，圖4為一株Cystobacter violaceus的抗菌活性檢測(cè)結(jié)果，可以看出其對(duì)Escherichia coliDH-5α的微弱的抑菌圈及對(duì)Phytophthora infestans產(chǎn)生的明顯抑菌圈，對(duì)其他指示菌株無(wú)抑菌活性。

圖4 一株Cystobacter violaceus抗菌活性的檢測(cè)

通過(guò)對(duì)菌株抗菌活性的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，所有黏細(xì)菌對(duì)Phytophthora infestans均表現(xiàn)出不同程度的拮抗作用且對(duì)Escherichia coliDH-5α均有微弱的溶解能力，有3株黏細(xì)菌（1株Corallococcus exiguous，2株Myxococcus fulvus）表現(xiàn)出對(duì)Staphylococcus aureus的抑制作用，所有黏細(xì)菌對(duì)Bcicius subtilis、Saccharomyces cerevisiae、Sclerotinia sclerotiorum、Rhizoctonia solanikuhn和Fusarium oxysporum均未表現(xiàn)出抑制活性。

3 討論

從環(huán)境參數(shù)中可以看出呼倫貝爾地區(qū)土樣基本呈酸性，且多呈干旱狀態(tài)；有90%的土樣有效磷含量處于極低水平，水解氮含量整體處于中等以上水平，有機(jī)質(zhì)和速效鉀含量整體處于中等偏低水平，說(shuō)明該地區(qū)土壤養(yǎng)分含量不均衡。與內(nèi)蒙古中部和西部地區(qū)土壤環(huán)境參數(shù)［22-23]相比較，這些地區(qū)的土壤含水量、有機(jī)質(zhì)和速效鉀的含量均處于較低水平，但是中部和西部地區(qū)土壤多為中性偏堿性，而呼倫貝爾地區(qū)多為酸性土壤；中部和西部地區(qū)土壤整體有效磷含量較高，水解氮含量較低，而呼倫貝爾地區(qū)則完全相反。王璐等［24]發(fā)現(xiàn)，雖然呼倫貝爾市92.53%的耕地有效磷處于不同程度富集狀態(tài)，但其中鄂溫克族自治旗、新巴爾虎左旗、陳巴爾虎旗、牙克石市和阿榮旗5個(gè)旗市的耕地有效磷含量卻介于中等偏低水平，本研究中的耕地土樣均采自這5個(gè)區(qū)域，其中25%的耕地土樣有效磷含量處于中等水平，75%處于極低水平，與王璐等的研究結(jié)果相符，這可能是采樣地點(diǎn)土壤的溫度、降水等環(huán)境條件以及期間是否施用磷肥等因素造成的。

Dawid等［25]表明黏細(xì)菌在pH值為6-8的土壤環(huán)境中最豐富，但本地區(qū)土樣pH有一半以上呈強(qiáng)酸性，加之黏細(xì)菌純化周期較長(zhǎng)，反復(fù)轉(zhuǎn)接過(guò)程中容易導(dǎo)致菌株的丟失，故最終分離得到的黏細(xì)菌種屬較少，共得到41株噬細(xì)菌類(lèi)群的黏細(xì)菌，包括黏球菌屬（Myxococcus）20 株、珊瑚球菌屬（Corallococcus）13株、孢囊桿菌屬（Cystobacter）5株和原囊球菌屬（Archangium）3株，優(yōu)勢(shì)菌屬為Myxococcus。值得注意的是，內(nèi)蒙古中部、西部地區(qū)和呼倫貝爾地區(qū)的優(yōu)勢(shì)菌均為Myxococcus，這也驗(yàn)證了Myxococcus對(duì)環(huán)境適應(yīng)性較強(qiáng)，在貧瘠和肥沃的土壤中均有分布［26]這一研究結(jié)果。與中部地區(qū)土樣中分離得到的黏細(xì)菌［22]相比，該地區(qū)沒(méi)有Pyxidicoccus和Melittangium這2個(gè)屬的黏細(xì)菌分布，與西部地區(qū)分離得到的黏細(xì)菌［27-29]相比，本地區(qū)缺少?zèng)]有Pyxidicoccus和Anqiococcus這2個(gè)屬的黏細(xì)菌分布。周秀文等［30]研究表明，黏細(xì)菌的豐度和有機(jī)碳含量、碳氮比、pH、溫度等的相關(guān)性較低，與年平均溫度和碳氮比相關(guān)性較高。本研究中，呼倫貝爾地區(qū)的黏細(xì)菌總數(shù)和菌株總數(shù)均與含水量、pH、有機(jī)質(zhì)、有效磷和水解氮呈正相關(guān)，與速效鉀呈負(fù)相關(guān)，但卻并未表現(xiàn)出顯著的相關(guān)性，與周秀文等的研究結(jié)果基本一致，分析原因，可能是樣品采集地點(diǎn)有限或黏細(xì)菌未能全部純化出來(lái)，也可能是鹽度、重金屬等其他因素也對(duì)黏細(xì)菌的分布有影響［31-32]。

方曉梅等［33]關(guān)于黏細(xì)菌生態(tài)多樣性的研究中表明褐土和黑土營(yíng)養(yǎng)豐富，黏細(xì)菌數(shù)量多，而沙土、風(fēng)化巖中黏細(xì)菌極少。分析本研究結(jié)果數(shù)據(jù)可知，在土壤類(lèi)型和利用方式不同的情況下，呼倫貝爾地區(qū)的黑土純化出黏細(xì)菌種類(lèi)及數(shù)目最多，相較其他土壤類(lèi)型表現(xiàn)出較豐富的多樣性，而暗棕壤土中的黏細(xì)菌最少；草地純化出黏細(xì)菌種類(lèi)及數(shù)目最多，未利用土地最少。與內(nèi)蒙古中部和西部地區(qū)相比，中部地區(qū)潮土和灰褐土中分離黏細(xì)菌較多，栗褐土和粗骨土分布較少，中部地區(qū)樣品在土樣利用方式上的黏細(xì)菌分布規(guī)律和本研究結(jié)果相同；而西部地區(qū)風(fēng)沙土和草甸土中分離黏細(xì)菌較多，棕漠土和灰漠土較少，林地中菌株數(shù)目多且種類(lèi)最豐富［22，27-29]。由于不同地區(qū)的同一土壤類(lèi)型環(huán)境參數(shù)差異較大，以及這些土壤被不同植被覆蓋，可能造成了黏細(xì)菌種群和數(shù)量上分布的差異。

Phytophthora infestans是由致病疫霉菌引起，會(huì)造成馬鈴薯致病，已使全球馬鈴薯產(chǎn)業(yè)損失巨大［34]。如今殺菌劑的耐藥性日漸減弱，為防止致病能力造成的變異使作物喪失抗病性，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了對(duì)植物病害防止較有潛力的一種方式，即以有益菌抑制有害菌，這更是目前抗馬鈴薯晚疫病生物農(nóng)藥研制的重要途徑。Fusarium oxysporum會(huì)使豆類(lèi)及茄科植物根系腐爛死亡，降低土壤的固氮能力等，其產(chǎn)生的一種名為鐮刀菌毒素［35-36]的物質(zhì)會(huì)使人發(fā)生皮膚潰爛等疾?。?7]；Rhizoctonia solanikuhn可使稻麥、蔬菜瓜果等根莖處致?。籗clerotinia sclerotiorum會(huì)使向日葵根莖葉盤(pán)腐爛，致病后使葵花籽的籽仁含油率及蛋白質(zhì)含量下降，對(duì)向日葵產(chǎn)業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重的影響［38-39]。除此之外本研究也對(duì)黏細(xì)菌抗大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等細(xì)菌進(jìn)行了抗菌活性的分析。本地區(qū)分離得到的所有黏細(xì)菌菌株均對(duì)Phytophthora infestans表現(xiàn)出抗性，且不同種屬的黏細(xì)菌陽(yáng)性檢出率均為100%，中部和西部地區(qū)對(duì)Phytophthora infestans有抗性的黏細(xì)菌分別占83% 和 78%［22，27-29]，Myxococcus的陽(yáng)性檢出率最高。由此可見(jiàn)，呼倫貝爾地區(qū)黏細(xì)菌資源的開(kāi)發(fā)對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治及新藥研究可能更具潛力。本研究中不同土樣中分離得到的同一屬種黏細(xì)菌抗指示細(xì)菌和真菌的種類(lèi)及抗性強(qiáng)弱均有差異，研究結(jié)果與武志華等［40]的研究結(jié)果相同，這表明黏細(xì)菌中的抗菌活性物質(zhì)可能具有菌株特異性。李越中等［41]和張利平等［42]研究發(fā)現(xiàn)黏細(xì)菌中具有抗癌、抗腫瘤的活性物質(zhì)，Li［43]、Dahm 等［44]發(fā)現(xiàn)黏細(xì)菌對(duì)林木病原真菌有抑制作用，這都為本地區(qū)黏細(xì)菌的藥用作用及生物防治的進(jìn)一步研究提供了更多方向。

4 結(jié)論

呼倫貝爾地區(qū)的土樣總體呈酸性且多為干旱狀態(tài)，土壤養(yǎng)分含量不均衡。共分布有4個(gè)屬5個(gè)種的可培養(yǎng)黏細(xì)菌，優(yōu)勢(shì)菌屬為Myxococcus。該地區(qū)的黑土樣品中黏細(xì)菌種類(lèi)和數(shù)量最多，而風(fēng)沙土、暗棕壤土樣品中黏細(xì)菌豐富度較差；草地樣品中黏細(xì)菌的種類(lèi)和數(shù)量最多，而未利用土地樣品中黏細(xì)菌豐富較差。黏細(xì)菌分布與土壤環(huán)境參數(shù)沒(méi)有明顯地相關(guān)性。所有黏細(xì)菌菌株均表現(xiàn)出對(duì)Phytophthora infestans有抗性，對(duì)其活性物質(zhì)的確定及拮抗機(jī)理等問(wèn)題需進(jìn)一步探究。本研究對(duì)內(nèi)蒙古呼倫貝爾地區(qū)黏細(xì)菌分布及其抗菌活性進(jìn)行了分析，為未來(lái)該地區(qū)黏細(xì)菌資源的開(kāi)發(fā)及利用奠定基礎(chǔ)。