瑤藥銅鉆（定心藤）化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展＊

潘祥龍，郝二偉＊＊，韋 瑋，謝金玲，秦健峰，杜正彩，候小濤，鄧家剛

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室南寧 530001；3.廣西農(nóng)作物廢棄物功能成分研究協(xié)同創(chuàng)新中心 南寧 530200）

銅鉆來(lái)源于茶茱萸科植物定心藤M(fèi)appianthus iodoides Hand.-Mazz.根、莖，為瑤藥老班藥“五虎、九牛、十八鉆、七十二風(fēng)”之一，又名定心藤、藤蛇總管、買(mǎi)撇花藤、甜果藤、黃九牛、黃馬胎和假丁公藤，主要分布于廣西、廣東、海南、云南及越南北部等地區(qū)，常見(jiàn)于疏林、灌叢及溝谷林內(nèi)。其味微苦、澀，性平，歸肝、膽經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕，痛經(jīng)活絡(luò)，活血調(diào)經(jīng)，止痛之功效，民間常用來(lái)治療黃疸型肝炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕痹痛，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，跌打損傷，癰瘡，毒蛇咬傷等[1,2]。瑤醫(yī)認(rèn)為“鉆”類藥物性能強(qiáng)勁鉆透、通達(dá)經(jīng)絡(luò)、透利關(guān)節(jié)，多為行氣止痛、散瘀消腫藥，是瑤族傳統(tǒng)治癌“打藥”[3,4]。目前，已有研究報(bào)道對(duì)銅鉆藥材中蒲公英賽酮、蒲公英賽醇、香草酸和香草醛的化學(xué)成分進(jìn)行定性定量，制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及生藥的鑒定[5,6]。現(xiàn)代藥理研究表明，銅鉆具有多種藥理活性，如保護(hù)心血管、降血脂、抗腫瘤、抗氧化及清除自由基、抗炎鎮(zhèn)痛等作用。本文查閱并整理近年來(lái)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)資料，對(duì)銅鉆的化學(xué)成分及藥理作用等進(jìn)行綜述，以期為其深入研究提供參考依據(jù)。

1 化學(xué)成分

現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道，銅鉆（定心藤）中化學(xué)成分主要包括木脂素類、黃酮類、萜類、甾體類、有機(jī)酸類、生物堿類等化合物。

1.1 木脂素類化合物

蔣芝華等[7-9]從定心藤植物中首次分離出8個(gè)木脂素類化合物，經(jīng)過(guò)鑒定為落葉松樹(shù)脂醇[(+)-lariciresinol，1]、異落葉松樹(shù)脂素（isolariciresinol，2）、5'-甲氧基落葉松樹(shù)脂醇（5'-methoxylaricirecinol，3）、橄欖樹(shù)脂素（olivil，4）、去氫雙松柏醇（dehydrodiconiferyl alcohol，5）、chushizisin I(6)[10]、3,3-didemethoxyverrucosin(7)[11]、4-epi-larreatricin(8)。木脂素類化合物結(jié)構(gòu)式（圖1）。

圖1 木脂素類化合物結(jié)構(gòu)式

1.2 黃酮類化合物

黃酮類化合物廣泛分布于多種植物中，是一類具有廣泛活性、研究較為深入的重要化合物[12,13]。目前，已從定心藤莖中分離出3 個(gè)黃酮類物質(zhì)，分別為蘆丁（rutin，9）[14]，槲皮素（quercetin，10）[15]，白楊素（chrysin，11）[16]。黃酮類化合物結(jié)構(gòu)式（圖2）。

圖2 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)式

1.3 萜類化合物

萜類是異戊二烯的聚合物及其衍生物的總稱，具有多種生物活性[17]。蔣芝華等[9]運(yùn)用正反相硅膠柱色譜及Sephadex LH-20 凝膠柱色譜方法從定心藤莖90%乙醇提取物中分離出7 個(gè)降碳倍半萜類化合物，經(jīng)過(guò)鑒定為9-hydroxy-4,6-megastigmadien-3-one(12)、9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(13)、9,10-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(14)、5,12-epoxy-9-hydroxy-7-megastigmen-3-one(15)、blumenol A(16)、黑麥草內(nèi)酯（loliolide，17）、5,12-epoxy-6,9-hydroxy-7-megastigmen-3-one(18)。陳承聲等[18,19]從定心藤莖中分離出一種新倍半萜醇，通過(guò)波譜分析和旋光數(shù)據(jù)比較確定其為(-)-雪松醇[(-)-cedrol，19]。此外，卞理等[20,21]從該植物中分離出蒲公英賽酮（taraxerone，20），蒲公英賽醇（taraxerol，21）。萜類化合物結(jié)構(gòu)式（圖3）。

1.4 甾體類化合物

定心藤中含有的甾體類化合物包括：β-谷甾醇（β-sitosterol，22）[15]，β-胡蘿卜苷（daucosterol，23）[15]，豆甾醇-3β-葡萄糖苷（stigmasterol-3β-glucoside，24）[22]，豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（stigmasterol-3-O-β-Dglucopyranoside，25）[23,24]。甾體類化合物結(jié)構(gòu)式（圖4）。

1.5 有機(jī)酸類化合物

圖3 萜類化合物結(jié)構(gòu)式

圖4 甾體類化合物結(jié)構(gòu)式

有機(jī)酸類成分具有抗腫瘤、抗血栓、抑菌、抗艾滋病毒等廣泛的生物活性，具有很大的研究和開(kāi)發(fā)潛力[25]。目前，曾立等[26,27]從定心藤莖中分離出有機(jī)酸及酚類化合物，分別為棕櫚酸甲酯（methyl palmitate，26）、亞油酸甲酯（methyl linoleate，27）、油酸甲酯（methyl oleate，28）、角鯊烯（squalene，29）、2-癸酮（2-decanone，30）、壬酸甲酯（methyl nonanoate，31）、8-炔-壬酸甲酯（methyl 8-nonanoate，32）、正十四烷（tetradecane，33）、正十五烷（pentadecane，34）、正十六烷（hexadecane，35）、正十七烷（heptadecane，36）、12-甲基-十三烷酸甲酯（methyl 12-methyl-tridecanoate，37）、正十八烷（octadecane，38）、正十九烷（nonadecane，39）、9-棕櫚油酸甲酯[(Z)-methyl 9-hexade-cenoate，40]、亞油酸（linoleic acid，41）、正十七烷酸甲酯（methyl heptadecanoate，42）、(R)-(-)-14-甲基-8-十六炔-1-醇[(R)-(-)-14-methyl-8-hexadecyn-1-ol，43]、硬脂酸甲酯（methyl octadecanoate，44）、正二十烷（eicosane，45）、10-甲基十七烷酸甲酯（methyl 10-methylheptadecanoate，46）、正十九酸甲酯（methyl nonadecanoate，47）、油酸（oleic acid，48）、花生酸甲酯（methyl icosanoate，49）、正二十四烷（tetracosane，50）、正二十二烷酸甲酯（methyl docosanoate，51）、正二十三烷酸甲酯（methyl tricosanoate，52）、1-碘代十八烷（1-iodooctadecane，53）、正二十四烷酸甲酯（methyl tetracosanoate，54）、正二十六烷酸甲酯（methyl heneicosanoate，55）、二十三烷酸（tricosanoic acid，56）、異丙苯（1-methylethyl-benzene，57）、二丁基羥基甲苯（butylatedhydroxytoluene，58），沒(méi)食子酸（gallic acid，59）[27]、香草醛（3-methoxy-4-hydroxybenzaldehyde，60）[28]、香草酸（4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid，61）[28]。有機(jī)酸類化合物結(jié)構(gòu)式（圖5）。

1.6 生物堿及其他化合物

定心藤中含有生物堿類化合物包括：青藤堿（sinomenine，62）[20]，漢防己堿（tetrandrine，63）[29]，mappine A(64)[30]，mapposidic acid(65)[30]，glycerol monolinoleate(66)[7,30]，吲哚類生物堿等[31,32]。另外，黃瀟[33]從定心藤莖中提取粗多糖，并對(duì)其進(jìn)行分離純化，確定單糖組成為鼠李糖（Rha，67），阿拉伯糖（Ara，68），木糖（Xyl，69），甘露糖（Man，70），半乳糖（Gal，71），葡萄糖（Glc，72）。生物堿及其他化合物結(jié)構(gòu)式（圖6）。

圖5 有機(jī)酸類化合物結(jié)構(gòu)式

圖6 生物堿及其他化合物結(jié)構(gòu)式

2 藥理作用

現(xiàn)代藥理研究表明，銅鉆（定心藤）具有多種藥理活性，如保護(hù)心血管、降血脂、抗腫瘤、抗氧化及清除自由基、抗炎鎮(zhèn)痛等作用。

2.1 保護(hù)心血管作用

心肌缺血再灌注損傷（Myocardial Ischemia Reperfusion Injury，MIRI）是心肌缺血，冠狀動(dòng)脈再通和心肌灌注后引起的心肌損傷性反應(yīng)，是一個(gè)復(fù)雜病理生理變化過(guò)程。總黃酮化合物作為許多中草藥的有效成分，其對(duì)心腦血管疾病的保護(hù)作用已在相關(guān)文獻(xiàn)中有所闡述［34,35］。路倩[36,37]建立心肌缺血再灌注損傷SD 大鼠模型，灌胃不同劑量的銅鉆總黃酮提取物，通過(guò)TTC染色法測(cè)定大鼠心肌梗死面積，結(jié)果表明，銅鉆總黃酮三個(gè)劑量組（低60 mg?kg-1，中120 mg?kg-1，高240 mg?kg-1）均能夠使大鼠心肌梗死面積減少；通過(guò)檢測(cè)血清中各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果表明，其能明顯降低大鼠血清中脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）水平，升高超氧化物歧化酶（SOD）水平；通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blotting）檢測(cè)蛋白表達(dá)水平，結(jié)果表明，其明顯降低Bax蛋白表達(dá)、增加Bcl-2蛋白表達(dá)?？梢?jiàn)銅鉆總黃酮可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子，抗氧化，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡等途徑對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。

2.2 降血脂作用

楊光等[38-40]建立高血脂癥SD 大鼠模型，研究定心藤莖中總黃酮提取物不同劑量對(duì)高血脂大鼠的干預(yù)作用，灌胃大鼠6 周后，通過(guò)眼球取血檢測(cè)血清中指標(biāo)，結(jié)果表明，各劑量組與模型組比較均能降低高脂血癥大鼠血清中總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的水平，上調(diào)高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。灌胃12周后，通過(guò)心臟采血檢測(cè)血清中指標(biāo)，結(jié)果表明，各劑量組與模型組比較均能下調(diào)高脂血癥大鼠血清中丙二醛（MDA）的水平，上調(diào)SOD及總氧化能力（T-AOC）水平。同時(shí)還探討了定心藤莖總黃酮對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（Athersclerosis，AS）大鼠血脂的作用，通過(guò)ELISA法測(cè)定血清中一氧化氮（NO）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的含量，結(jié)果表明，通過(guò)提高機(jī)體的抗氧化能力調(diào)節(jié)VEGF-IP3 信號(hào)通路，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，從而保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞及動(dòng)脈壁，達(dá)到降血脂和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用。

2.3 抗腫瘤作用

腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類健康的危重疾病，腫瘤細(xì)胞之間的異質(zhì)性及長(zhǎng)期應(yīng)用傳統(tǒng)化療藥物可引起腫瘤細(xì)胞的耐藥性，多藥耐藥（Multidrug Resistance，MDR）是腫瘤化療失敗的主要原因[41-43]。鐘海微等[44,45]應(yīng)用超臨界CO2萃取法從定心藤莖中提取揮發(fā)油，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)探討揮發(fā)油對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901及人白血病細(xì)胞K562 的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示，提取的揮發(fā)油對(duì)這兩種腫瘤細(xì)胞均具有一定的抑制作用，并且表明其對(duì)人白血病細(xì)胞K562的抑制作用更加顯著，其IC50為13.95 μg·m L-1。曾立[46]等通過(guò)實(shí)驗(yàn)探討定心藤莖中提取揮發(fā)油對(duì)肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1 及肝癌細(xì)胞BEL-7402的抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明其對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，IC50分別為169.54、695.21 μg·mL-1。龐聲航[47,48]等建立小鼠S180、H22腹水瘤及肉瘤動(dòng)物模型，觀察20種瑤藥鉆類藥材對(duì)荷瘤小鼠生命延長(zhǎng)率及腫瘤抑制率的影響，結(jié)果表明，銅鉆水提物對(duì)H22肉瘤抑制率超過(guò)30%。

2.4 抗氧化及清除自由基作用

研究報(bào)道黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基的活性，還具有抗菌，抗衰老等藥理保健功能，副作用小，是一種具有巨大發(fā)展前景的天然有機(jī)抗氧化劑。李維峰等[49]研究定心藤醇提取物的5種極性萃取部位的體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，不同極性部位均具有抗氧化活性，其中抗氧化能力最強(qiáng)的為乙酸乙酯部位，其次是氯仿部位和正丁醇部位，最弱的為水相及石油醚部位。其中乙酸乙酯部位黃酮類化合物含量高達(dá)609.96 mg·g-1，對(duì)Fe3+有顯著還原能力，DPPH半數(shù)清除濃度IC50為0.28 mg·mL-1，羥自由基半數(shù)清除濃度IC50為0.41 mg·mL-1，當(dāng)濃度為0.2 mg·mL-1時(shí)對(duì)超氧陰離子自由基的清除率達(dá)到42.88%，從而說(shuō)明黃酮類化合物可能是其抗氧化活性的主要成分。黃瓊等[50]通過(guò)正交試驗(yàn)確定了微波輔助提取定心藤總黃酮的最佳工藝條件，并且進(jìn)行了抗氧化活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示總黃酮對(duì)DPPH 有較強(qiáng)的清除作用，且清除能力呈濃度依賴性，表明其具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

此外，阿西娜等[51]通過(guò)正交試驗(yàn)確定了定心藤水溶性粗多糖的最佳提取工藝條件，并且進(jìn)行了定心藤粗多糖和初步純化多糖體外清除自由基的活性研究，結(jié)果表明粗多糖和初步純化多糖均對(duì)OH、DPPH自由基有明顯清除作用，粗多糖對(duì)OH 自由基的清除作用大于初步純化多糖，而初步純化多糖對(duì)DPPH 自由基的清除作用大于粗多糖，可見(jiàn)定心藤多糖是一種良好的清除自由基抗氧化劑。

2.5 抗炎、鎮(zhèn)痛作用

Pang L X 等[52,53]通過(guò)建立二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹模型以及對(duì)醋酸扭體試驗(yàn)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)觀察，研究定心藤提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其可顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹和扭體反應(yīng)，具有顯著抗炎、鎮(zhèn)痛作用。蔣芝華[9]從定心藤莖中分離出來(lái)的木脂素類化合物進(jìn)行了抗炎活性評(píng)價(jià)，建立脂多糖（LPS）誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞釋放NO模型，并采用MTT法評(píng)價(jià)木脂素類化合物對(duì)細(xì)胞毒性影響，結(jié)果表明隨藥物濃度的增大能顯著抑制NO 的釋放，具有較好的抗炎活性作用，且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。

3 毒性研究

唐春麗等[54]采用銅鉆貼膏對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行皮膚急性毒性試驗(yàn),對(duì)家兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)以及對(duì)豚鼠進(jìn)行皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)，結(jié)果表明，銅鉆貼膏對(duì)小鼠的完整和破損皮膚無(wú)急性毒性反應(yīng)，對(duì)家兔皮膚無(wú)刺激性，對(duì)豚鼠皮膚無(wú)過(guò)敏反應(yīng)，其貼膏為安全性的外用藥。

4 展望

瑤族醫(yī)藥作為傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分,但他們的醫(yī)藥傳統(tǒng)知識(shí)依賴于醫(yī)者秘授親教、指物傳承、口授心記，缺乏典籍記載和系統(tǒng)整理[55-57]。銅鉆作為瑤族醫(yī)藥“十八鉆”中一味常用藥材，具有廣泛的民族民間實(shí)踐應(yīng)用基礎(chǔ)，是一類具有開(kāi)發(fā)前景的天然藥物[58]。目前，國(guó)內(nèi)外仍缺乏對(duì)銅鉆民間傳統(tǒng)應(yīng)用功效進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究，其確切的藥用機(jī)制及藥用價(jià)值未引起足夠重視?，幾遽t(yī)藥在抗腫瘤方面有自己獨(dú)特的治療原則和用藥方式，但其抗腫瘤機(jī)制的研究不夠深入。銅鉆的藥理活性研究多是針對(duì)粗提物進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有確切到單體成分，因此，有必要進(jìn)一步深入系統(tǒng)研究其化學(xué)成分和藥理作用，并結(jié)合功效和臨床應(yīng)用，深入系統(tǒng)地闡述其物質(zhì)基礎(chǔ)及藥效機(jī)制，為其質(zhì)量控制、產(chǎn)品合理開(kāi)發(fā)及利用提供參考依據(jù)。