食品中納他霉素超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法研究

顏素娟　陳庚超

[摘要]本研究建立了食品中納他霉素殘留量分析的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的檢測(cè)方法。本方法中利用固相萃取技術(shù)PAX強(qiáng)陰離子聚合物混合模式交換柱對(duì)樣品進(jìn)行萃取和凈化，使用Waters公司C18色譜柱對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行分析測(cè)試，結(jié)果表明，在1～100mg/L的濃度下，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99。本方法的檢出限為0.5ng/mL，定量限為1.0ng/mL，在10～100ng/mL的添加水平下，回收率為85%～115%，RSD≤5（n=6），本方法準(zhǔn)確可靠、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，可滿足檢測(cè)工作的需求。

[關(guān)鍵詞]食品;納他霉素;固相萃取;超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀

中圖分類號(hào)：TS207

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20190409

納他霉素（Natamycin，分子式：C33H4NO13，CAS號(hào)：C3H，NO3）是一種無(wú)臭、無(wú)味、低劑量且安全性高的食品防腐劑，由納他鏈霉菌受控發(fā)酵制得一種白色至乳白色的無(wú)臭、無(wú)味的結(jié)晶粉末，通常以烯醇式結(jié)構(gòu)存在"。其作用機(jī)理是與真菌的麥角甾醇以及其他甾醇基團(tuán)結(jié)合，阻遏麥角甾醇生物合成，從而使細(xì)胞膜畸變，最終導(dǎo)致滲漏，引起細(xì)胞死亡。納他霉素是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌劑，其分子是一種具有活性的環(huán)狀四烯化合物，含3mol結(jié)晶水，相對(duì)分子質(zhì)量665.73。納他霉素作為一種微生物防腐劑以其安全、天然、不改變食品的風(fēng)味、低劑量、高效率、抗菌作用時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)被廣泛用于各種食品生產(chǎn)中2。我國(guó)規(guī)定了納他霉素的適用范圍和用量：乳酪、肉制品、肉湯、西式火腿、廣式月餅、糕點(diǎn)表面等，殘留量應(yīng)小于10mg/kg}。現(xiàn)行有效的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)使用的是溶劑萃取、液相色譜檢測(cè)的方法，該方法對(duì)各種食品基質(zhì)萃取凈化不理想，液相色譜出峰干擾也很明顯，對(duì)日常的檢測(cè)工作帶來(lái)很大的困擾。建立靈敏度、準(zhǔn)確度高的納他霉素檢測(cè)方法具有十分重要的意義4。

1材料與方法

1.1儀器

TQD超高效液相色譜儀串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀：美國(guó)Waters公司;AUY120型電子分析天平：日本島津公司;ElmasonicP型超聲波清洗器：德國(guó)Elma公司;Sigma3k30型高速離心機(jī)：博勵(lì)行儀器有限公司;SevenEasypH計(jì)：梅特勒一托利多儀器公司;Milli-Q型純水儀：密理博公司。

1.2試劑

納他霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司;甲醇、乙腈：色譜純;甲酸：分析純;氨水：優(yōu)級(jí)純;實(shí)驗(yàn)用水除特殊說(shuō)明均為一級(jí)水。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解，配制成質(zhì)量濃度為1.00mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液，吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成1.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成濃度為1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL和100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4樣品前處理

準(zhǔn)確稱取制備好的樣品5.00g（液體樣品準(zhǔn)確移去5mL），于50mL離心管中，加入20mL甲醇充分搖勻后渦旋混合30min（300r/min），8000r/min充分離心5min后進(jìn)行固相萃取回。取5mL甲醇、5mL水活化PAX小柱，準(zhǔn)確移取4mL樣液上樣，控制流速1mL/min左右;依次用5mL5%甲醇水+0.1%甲酸、5mL的5%氨水、5mL甲醇淋洗;使用3mL的60%甲醇水+4%甲酸洗脫并收集洗脫液，在約409C下氮吹干，用1.00mL的50%甲醇水定容，過0.22μm親水相濾膜，待上機(jī)測(cè)試6-7。

1.5儀器條件

色譜條件：色譜柱WatersC18（4.6x150mm，5μm），進(jìn)樣量為10μL，柱溫為40°C，流動(dòng)相為0.1%甲酸+乙腈，梯度洗脫程序見表1，流速為0.3mL/min。梯度洗脫程序見表1。

質(zhì)譜參數(shù)：正離子MRM模式。納他霉素離子對(duì)信息見表2。

2結(jié)果與分析

2.1線性范圍及檢出限

樣品經(jīng)上機(jī)測(cè)試，在充分優(yōu)化條件后得到了理想色譜圖，具體見圖1。

實(shí)驗(yàn)室配制濃度為5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL和100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按本方法經(jīng)儀器測(cè)試后，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做線性回歸方程，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，可知線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9996，符合實(shí)驗(yàn)的要求，本文所述的線性范圍為5～100ng/mL。采用1ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，以3倍信噪比（S/N）來(lái)計(jì)算檢出限，確定本方法的檢出限固體為1.0μg/kg、液體為1.0μg/mlL。

2.2精密度及回收率

稱取不含待測(cè)組分制好樣的某月餅樣品5.0g共20份，其中2份按照實(shí)驗(yàn)方法正常操作，另外18份分成3組，分別添加納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品，制成5μg/kg、20μg/kg、100μgkg的3組不同濃度的樣品做三水平、六平行的添加回收試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均回收率為97.4%～100.5%，RSD為0.3%～2.0%.（n=6），回收率和精密度見表3。

3結(jié)論

本文采用SPE固相萃取技術(shù)結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的檢測(cè)方法對(duì)食品中的納他霉素殘留量進(jìn)行檢測(cè)分析，該方法不僅前處理簡(jiǎn)單、適用范圍廣、操作方便，還具有分離效果好、分析快速、低檢出限、高靈敏度和高精密度等特點(diǎn)，符合實(shí)驗(yàn)室對(duì)納他霉素殘留量的檢測(cè)要求。

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