原發(fā)性失眠障礙人群與正常對(duì)照人群的腸道菌群結(jié)構(gòu)差異分析

劉秉東 錢玉芹 劉穎 徐鵬 潘集陽(yáng)

摘要：目的：探討原發(fā)性失眠障礙患者和正常人群腸道菌群的差異方法：選取2018年1月-2019年1月暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院睡眠醫(yī)學(xué)中心募集了20名原發(fā)性失眠障礙的患者和正常對(duì)照人群，并收集了他們的糞便樣本，進(jìn)行了16S rDNA測(cè)序分析，采用R語(yǔ)言進(jìn)行a多樣性分析和Anosim相似性檢驗(yàn)。結(jié)果：原發(fā)性失眠障礙組腸道菌群。多樣性分析中Chao指數(shù)和Shannon指數(shù)明顯低于正常對(duì)照人群（p<0.01）。Anosim相似性分析中二組的Statistic R：0.1944>0，組間差異顯著大于組內(nèi)差異，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）。結(jié)論：原發(fā)性失眠障礙人群與正常對(duì)照人群的腸道菌群結(jié)構(gòu)上存在顯著差異。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性失眠障礙;腸道菌群;菌群多樣性;相似性分析

中圖分類號(hào)：R256.23.文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2096-5249（2019）04-043-002

失眠障礙主要以入睡困難、易早醒已經(jīng)難以維持睡眠為三大主要癥狀，近年來(lái)已經(jīng)愈發(fā)成臨床最常見(jiàn)的睡眠障礙之一。根據(jù)2015年流行病的調(diào)查，失眠障礙在我國(guó)成年人群中發(fā)病率已經(jīng)高達(dá)15.1%（95%Ch 13.5%～16.7%）。而且，不僅僅局限于睡眠癥狀，失眠障礙還會(huì)顯著增加其他精神障礙和心腦血管的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，為國(guó)家、社會(huì)和個(gè)人造成了沉重的負(fù)擔(dān)。然而，目前對(duì)于失眠障礙的機(jī)制研究仍上為明確。近年來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)表明腸道菌群的紊亂與多種疾病存在密切的相關(guān)，如肥胖、高血壓、帕金森疾病等。因此本研究重點(diǎn)討論失眠障礙的患者與正常人群腸道菌群的差異性，為失眠障礙的機(jī)制研究提供依據(jù)，對(duì)未來(lái)希望利用菌群靶向治療失眠障礙具有重要意義。

1研究對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象本研究經(jīng)過(guò)暨南大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2018年1月-2019年1月暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院睡眠醫(yī)學(xué)中心門(mén)診及病房按照ICSD-3的慢性失眠障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)招募受試者人群（原發(fā)性失眠障礙患者和正常對(duì)照者各10名）。

1.2研究方法在清潔的環(huán)境下，使用無(wú)菌樣本采集管收集所有受試者的糞便，取樣后立即送往-80度冰箱貯存。使用Illumina HiSeq 2500測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行二代測(cè)序。本研究采用R

3.5.1.Version進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，檢驗(yàn)方法采用T檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1.a多樣性分析失眠障礙患者與正常對(duì)照組的Chao指數(shù)分別為1823.6±192.2，2054.4±148.4，兩組Chao指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）見(jiàn)表1.失眠障礙患者與正常對(duì)照組的Shannon指數(shù)分別為5.4±0.6，6.0±0.4，兩組Shannon指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。見(jiàn)表2：

2.2.Anosim相似性檢驗(yàn)本研究使用失眠障礙患者和正常對(duì)照者的原始數(shù)據(jù)進(jìn)Anosim相似性檢驗(yàn)分析，根據(jù)蒙特卡洛置換檢驗(yàn)，計(jì)算得Statistic R：0.1944>0，證明二者的組間差異大于組內(nèi)差異，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001）。

3討論

本研究在國(guó)內(nèi)首次嚴(yán)格按照Diagnostic Interview forSleep Patterns and Disorder（DISP）會(huì)晤檢查和ICSD-3的慢性失眠障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)，募集了原發(fā)性失眠障礙患者，并利用新型二代基因測(cè)序技術(shù)，證明了原發(fā)性失眠障礙的患者和正常人群的腸道菌群在結(jié)構(gòu)上存在顯著差異。其中，失眠障礙患者在a多樣性分析中較正常人群表現(xiàn)出較低的Chao指數(shù)和Shannon指數(shù)，提示失眠患者腸道菌群的多樣性較低。這種菌種多樣性的降低，可能會(huì)引起短鏈脂肪酸的減少，比如乙酸、丙酸和丁酸。這些物質(zhì)對(duì)于維持機(jī)體免疫和健康具有非常重要的意義。尤其是丁酸的生成減少，可能會(huì)引起腸道內(nèi)γ-氨基丁酸的生成的減少，從而降低經(jīng)腸道進(jìn)入血液循環(huán)的γ-氨基丁酸的攝取，對(duì)于促進(jìn)機(jī)體入睡有著不利的影響。同時(shí)失眠障礙的患者機(jī)體的免疫和健康會(huì)進(jìn)一步下降，這些會(huì)進(jìn)而加劇腸道菌群多樣性的降低，從而陷入惡性循環(huán)。這也從側(cè)面解釋了，為什么失眠障礙的患者難以有效治療，并且存在長(zhǎng)期患病的狀態(tài)，極難自愈，對(duì)個(gè)人、社會(huì)和家庭造成嚴(yán)重的影響。當(dāng)然本研究還存在樣本量較低的不足，沒(méi)有選擇雙盲的入組方法，存在著一定的局限性，還需要進(jìn)行多中心、大樣本的進(jìn)一步研究。