高通量測序研究中藥經(jīng)方對正常小鼠腸道菌群的影響

張俊杰 張淑靜 董瑞娟

摘要 目的：探討四君子湯、麻杏石甘湯、麻杏石甘湯合四君子湯對正常小鼠腸道菌群多樣性的影響。方法：將20只Balb/c小鼠隨機分為正常組、四君子湯組、麻杏石甘湯組、麻杏石甘湯合四君子湯組4組，每組5只，除正常組給予無菌雙蒸水灌胃外，其余3組分別以對應(yīng)湯藥灌胃。于灌胃第4、7天無菌收集各組小鼠糞便，16S rRNA高通量測序法檢測各組藥物對小鼠糞便中微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性變化的調(diào)節(jié)。結(jié)果：各藥物的干預(yù)使正常小鼠腸道菌群的OTU（operational taxonomic unit）數(shù)量產(chǎn)生了變化，麻杏組菌群豐富度增加尤為顯著（P<0.05）;2時間段各中藥組的菌群香農(nóng)指數(shù)（Shannon index）較正常組比較均有變化、麻杏組的菌群多樣性增加更為明顯;正常組分別與給藥組比較，正常組與四君組間共有的OTUs數(shù)目最多，其菌群間的相似性最高;藥物的使用會使小鼠腸道的優(yōu)勢菌群發(fā)生結(jié)構(gòu)及比例的變化;給藥組與正常組小鼠的總體菌群在結(jié)構(gòu)上分離明顯、差異有統(tǒng)計學(xué)意義;四君子湯、麻杏石甘湯合四君子湯的使用會顯著性地使與短鏈脂肪酸（SCFA）產(chǎn)生相關(guān)的菌屬豐度增加。結(jié)論：與正常組比較，各中藥組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及多樣性均發(fā)生明顯變化。

關(guān)鍵詞 腸道菌群;四君子湯;麻杏石甘湯;高通量測序;16S rRNA;小鼠;經(jīng)方

Abstract Objective：To explore the effects of Sijunzi Decoction，Maxingshigan Decoction，the combination of Maxingshigan and Sijunzi Decoction on the diversity of intestinal flora in normal mice.Methods：A total of 20 Balb/c mice were randomly divided into 4 groups：the normal group，the Sijunzi Decoction group，the Maxingshigan Decoction group，the combined Maxingshigan and Sijunzi Decoction group，with 5 mice in each group.Sterile double distilled water was administrated to the normal group by gavage，while the other 3 groups were given the corresponding decoction by gavage.The feces of mice in each group were collected aseptically on the 4th and 7th day of gavage.The 16S rRNA high-throughput sequencing method was used to detect the changes of microbial community structure and diversity in the feces of mice in each group.Results：The intervention of each drug resulted in changes in the numbers of OTU（operational taxonomic unit）in the intestinal flora of normal mice，and the increase in the abundance of the Maxingshigan Decoction group was especially significant（P<0.05）.In the two time periods，the Shannon indexes of all traditional Chinese medicine groups were different from that of the normal group，and the increase of the flora diversity of the Mmaxingshigan Decoction group was more significant.Compared individually with each drug group，the number of OTUs shared between the normal group and the Sijunzi Decoction group was the highest，and the similarity of the two intestinal floras was the highest.The use of drugs changed the structure and proportion of dominant bacteria in the intestinal tract of mice.The total microflora of mice in the drug groups and the normal group were significantly isolated from each other.The use of Sijunzi Decoction and the combination of Maxingshigan and Sijunzi Decoction can significantly increase the abundance of bacteria related to SCFA production.Conclusion：Compared with the normal group，the structure and diversity of intestinal flora of mice in every Chinese medicine group changed significantly.

Key Words Intestinal flora; Sijunzi decoction; Maxingshigan decoction; High-throughput sequencing; 16S rRNA; Mice; Classical prescription

中圖分類號：R285.5文獻標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.05.014

數(shù)量巨大、種類繁多的腸道微生物構(gòu)成了人體中最復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)[1]。腸道菌群與宿主之間互利共生、相互依存，腸道菌群在調(diào)控新陳代謝的途徑、維生素等人體必需成分的合成以及促進免疫系統(tǒng)的建成等方面都發(fā)揮重要作用;而宿主腸道則為菌群提供富含營養(yǎng)、適宜的生存環(huán)境[2-3]，宿主與腸道菌群間的穩(wěn)定平衡對維系人體的健康發(fā)揮著不可或缺的作用。近年來，Illumina高通量測序等一些前沿性技術(shù)的應(yīng)用加速了腸道菌群的研究進展，使得腸道菌群與人體生理病理變化間的聯(lián)系得到更深入的研究。

首載于《太平惠民和劑局方》的四君子湯，是益氣健脾之經(jīng)典方劑，臨床上用于治療脾胃氣虛諸證。諸多研究表明，四君子湯可以通過對腸道菌群結(jié)構(gòu)及多樣性的調(diào)節(jié)來對機體發(fā)揮一系列的作用。孟良艷[4]等通過對大鼠糞便16s rDNA的測序，發(fā)現(xiàn)四君子湯可以通過調(diào)節(jié)腸道中益生菌數(shù)量的變化、改變腸道菌群的多樣性來改善脾虛大鼠腸道菌群的失調(diào)。溫秋玉[5]等的臨床研究顯示，采用腸道菌群培養(yǎng)法分析四君子湯對新生兒窒息患兒腸道菌群多樣性的影響，結(jié)果顯示，四君子湯治療后，患兒雙歧桿菌及腸球菌的腸道定植數(shù)量較對照組明顯增多，說明四君子湯可以改善新生兒窒息患兒腸道菌群的失衡情況。

麻杏石甘湯（麻黃杏仁甘草石膏湯）出自《傷寒論》，具有辛涼宣肺、清熱平喘的功用，主治外感風(fēng)寒之肺熱咳喘、邪熱雍肺證，臨床上在防治證屬邪熱雍肺的甲型H1N1流感中應(yīng)用廣泛[6]。本實驗室前期研究證實，麻杏石甘湯合四君子湯能明顯增強麻杏石甘湯治療流感病毒小鼠的效果。因此，本實驗采用四君子湯、麻杏石甘湯、麻杏石甘湯合四君子湯分別給正常小鼠灌胃，高通量測序分析各組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及多樣性的變化，以明確各組藥物對腸道菌群的作用以及四君子湯是否通過對腸道菌群的調(diào)節(jié)來對麻杏石甘湯的治療起到增效作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級BALB/c小鼠20只，17～19 g，雄性，購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司（許可證號：SCXK（京）2016-0011），于SPF級動物房中飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物 1）四君子湯：茯苓10 g、黨參10 g、炙甘草10 g、白術(shù)10 g，共需1劑。藥物浸泡于蒸餾水中40 min，第一煎大火煮沸后，小火煎煮30 min;第二煎大火煮沸后，小火煎煮20 min，最后將2次煎煮湯藥混合濃縮至26.67 mL，制成含生藥1.5 g/mL的藥液。2）麻杏石甘湯：麻黃6 g、杏仁9 g、生石膏24 g、生甘草6 g，共需1劑。藥物（麻黃與生石膏單獨浸泡）浸泡于蒸餾水中40 min，生石膏先煎30 min，加入杏仁、生甘草熬至水沸后，小火煎煮15 min，加入麻黃后下，再煎煮5 min;倒出湯藥后加水進行第二次煎煮（大火煮沸后，小火煎煮10 min），最后將2次所煮湯藥混合濃縮至30 mL，制成含生藥1.5 g/mL的藥液。3）麻杏石甘湯合四君子湯：將以上制備好的2組湯藥各取出10.5 mL共21 mL混合并濃縮至10.5 mL。以上藥物均購于北京中醫(yī)藥大學(xué)國醫(yī)堂。

1.2 方法

1.2.1 分組 小鼠按隨機數(shù)字表法隨機分為4組：正常組（Z組）、四君子湯組（簡稱四君組S組）、麻杏石甘湯組（簡稱麻杏組即M組）、麻杏石甘湯合四君子湯組（簡稱麻四組MS組），每組5只（數(shù)字1～5對應(yīng)第4天取材樣本、數(shù)字6～10對應(yīng)第7天取材樣本）。

1.2.2 給藥方法 正常組給予無菌雙蒸水灌胃，0.15 mL/次，2次/d;其余3組分別以對應(yīng)湯藥灌胃，0.15 mL/次，2次/d。4組動物均連續(xù)灌胃7 d。

1.2.3 取材方法 1）取無菌濾紙一張;2）帶好無菌手套，一手固定小鼠頸部，另一只手按摩小鼠肛門附近，使其排出的糞便掉落在干凈的濾紙上;3）用滅過菌的鑷子將糞便（不少于3粒）夾到凍存管（Corning）里，擰緊蓋子，標(biāo)清編號，放到液氮中;

1.2.4 Illumina高通量測序16S rRNA測序?qū)嶒灹鞒?糞便DNA提取;設(shè)計合成、引物接頭;PCR擴增、產(chǎn)物純化;PCR產(chǎn)物定量和均一化;Miseq文庫構(gòu)建、Illumina測序。以上過程均由美吉生物公司完成。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS Statistics 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用One Way ANOVA檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 糞便樣本微生物測序OUT分類結(jié)果 要了解樣本測序結(jié)果中的菌屬等數(shù)目信息，就需要對序列進行聚類。通過聚類，將序列按照彼此的相似性分歸為許多小組，一個小組就是一個OTU。通常在97%的相似水平下的OTU進行生物信息統(tǒng)計分析。經(jīng)Illumina測序后，4組40個樣本總共獲得1 167 427條優(yōu)化序列，平均每個樣本29 186條序列、342個OTUs。其中正常組10個樣本，共301 851條序列、3 356個OTUs;四君組10個樣本，共295 551條序列、3 387個OTUs;麻杏組10個樣本，共289 722條序列、3 592個OTUs;麻四組10個樣本，共280 303條序列、3 329個OTUs。經(jīng)統(tǒng)計，各給藥組的干預(yù)均對正常小鼠腸道菌群的OTU數(shù)量產(chǎn)生影響。除麻四組外，各給藥組的OTU數(shù)量均升高，麻杏組尤為明顯（P<0.05），表明各組藥物均能影響正常小鼠腸道菌群的豐富度。各組樣品相關(guān)信息見表1。

2.2 藥物對正常小鼠腸道菌群多樣性的影響 Shannon指數(shù)用來評價微生物群落的多樣性，利用各樣本的測序量在不同測序深度時的微生物多樣性指數(shù)構(gòu)建曲線，以此反映各樣本在不同測序數(shù)量時的微生物多樣性。當(dāng)曲線趨于平坦時，說明測序數(shù)據(jù)量足夠大，可以反映樣本中絕大多數(shù)的微生物信息，其數(shù)值的高低可以表示菌群數(shù)量的變化。2時間段各中藥組菌群Shannon指數(shù)較正常組比較均有變化：在給藥第4天，四君組菌群Shannon指數(shù)較正常組比較，指數(shù)值略有降低，其菌群數(shù)量略有減少;麻杏組Shannon指數(shù)較正常組升高，其菌群數(shù)量增加;麻四組菌群Shannon指數(shù)較正常組比較，指數(shù)有所減少，其菌群數(shù)量有所降低。給藥第7天各組指數(shù)趨勢變化大致相同。綜上所述，表明各組藥物均可以對正常小鼠腸道菌群的數(shù)量及多樣性產(chǎn)生影響。見圖1。

2.3 藥物對正常小鼠腸道菌群相似度的影響 通過韋恩圖（Venn diagram）可以比較分析各組之間獨有和共有的OTU數(shù)目，進而比較多個樣本群落間組成的相似度與重疊關(guān)系。正常組與四君組：用藥第4天與用藥第7天，2組共有的OTUs數(shù)目分別為445、447，正常組獨有的OTUs數(shù)目分別為20、29，四君組獨有的OTUs數(shù)目為29、22;正常組與麻杏組：用藥第4天與用藥第7天，2組共有的OTUs數(shù)目分別為435、441，正常組獨有的OTUs數(shù)目分別為30、35，麻杏組獨有的OTUs數(shù)目為49、29;正常組與麻四組：用藥第4天與用藥第7天，2組共有的OTUs數(shù)目分別為435、441，正常組獨有的OTUs數(shù)目分別為30、35，麻四組獨有的OTUs數(shù)目為42、43。結(jié)果表明，隨著用藥時間的延長，各中藥組與正常組之間共有的OTUs數(shù)目均增加。其中，四君組與正常組間共有的OTUs數(shù)目最多，其菌群間的相似性最高。見圖2。

2.4 藥物對小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的影響

通過群落結(jié)構(gòu)組分圖可以得知一個或多個樣本在各分類水平上的分類學(xué)比對情況。正常組與各中藥組在門（Phylum）與屬（Genus）2個分類學(xué)水平上的差異。見圖3。

2.4.1 在門分類學(xué)水平上，在第4天與第7天2個時間段，四組樣本的菌群組成以擬桿菌門Bacteroidetes、厚壁菌門Firmicutes 2個菌門為主，兩者所占比例總和在各組各時間段內(nèi)均大于94%。

用藥第4天，擬桿菌門在各中藥組中所占比例均大于正常組，其中以麻四組所占比例最高（66.05%），麻杏組與麻四組的擬桿菌門占比相較正常組分別增加了5.03%、5.68%，四君組與正常組相差不大，僅增加了0.16%;厚壁菌門在各中藥組中所占比例均小于正常組，其中以麻四組所占比例最低（28.91%），麻杏組與麻四組的厚壁菌門占比相較正常組分別降低了6.19%、8.66%，四君組與正常組相差不大，僅減少了0.45%。

2.4.2 在屬分類學(xué)水平上，norank_f_Bacteroidales_S24_7_group為4組各時間段占比最高的種屬，其比例均大于24%。

在第4天與第7天的正常組中，norank_f_Bacteroidales_S24_7_group、乳桿菌屬Lactobacillus、Prevotellaceae_UCG_001、Alistipes是腸道菌群中占比最高的4個種屬。

服用四君子湯后，樣本菌群結(jié)構(gòu)基本不變、而其優(yōu)勢菌屬的比例有所變化：norank_f_Bacteroidales_S24_7_group的占比在2時間段均升高（分別升高1.62%、2.24%）;Prevotellaceae_UCG_001的占比均下降（2時間段分別降低0.73%、5.53%）;乳桿菌屬占比在給藥第4天較正常組降低1.33%，但隨著給藥時間的延長，

2.4.2 在屬分類學(xué)水平上，norank_f_Bacteroidales_S24_7_group為4組各時間段占比最高的種屬，其比例均大于24%。

在第4天與第7天的正常組中，norank_f_Bacteroidales_S24_7_group、乳桿菌屬Lactobacillus、Prevotellaceae_UCG_001、Alistipes是腸道菌群中占比最高的4個種屬。

2.5 藥物對整體菌結(jié)構(gòu)變化的影響 對門與屬2個分類學(xué)水平群落結(jié)構(gòu)的分析已證實3種藥物可以對小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。接下來采用weighted UniFrac距離矩陣的PCoA分析進行剖析，以展示菌群之間的相似度，來查看不同組別間腸道菌群的整體結(jié)構(gòu)差異是否顯著。每個散點代表一個個體，當(dāng)散點越聚集，說明其差異性越小、相似性越大;當(dāng)散點越分散，說明其差異性越大。各給藥組與正常組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明藥物干預(yù)組小鼠與正常組小鼠的總體菌群在結(jié)構(gòu)上分離明顯、差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見圖4。

2.6 藥物組與正常小鼠腸道菌群的差異

LEfSE表示顯著性差異，是一種用于發(fā)現(xiàn)高維生物標(biāo)識和揭示基因組特征的軟件，可以檢測到與豐度有顯著性差異的類群。為了鑒定不同條件下的特定細菌分類群，通過線性判別分析效應(yīng)大?。↙DA）比較來自正常組、四君組、麻杏組、麻四組腸道微生物每個物種豐度對差異效果影響的大小。

2.6.1 在屬分類學(xué)水平上，用藥第4天有18種腸道細菌在正常組與四君組間表現(xiàn)出顯著差異。Eubacterium_brachy_group、Eubacterium_ventriosum_group、布勞特氏菌屬Blautia、Erysipelatoclostridium、Anaerofustis、葡萄球菌屬Staphylococcus等在四君組中富集;羅氏菌屬Roseburia、Lachnospiraceae_g_Incertae_Sedis、Erysipelotrichaceae_g_uncultured、Clostridiaceae_1、Candidatus_Arthromitus、Tyzzerella_3等在正常組中富集。

用藥第7天，有12種腸道細菌在正常組與四君組間表現(xiàn)出顯著差異。Eubacterium_brachy_group、Eubacterium_ventriosum_group、Coriobacteriaceae_g_uncultured等在四君組中富集;Gastranaerophilales、Ruminococcaceae_UCG_009、Lachnospiraceae_UCG_001等在正常組中富集。見圖5。

2.6.2 在屬分類學(xué)水平上，用藥第4天有20種腸道細菌在正常組與麻杏組間表現(xiàn)出顯著差異。Candidatus_Saccharimonas、Saccharibacteria、Peptococcaceae_g_uncultures、Coprococcus_1糞球菌屬_1等在麻杏組中富集;Lactobacillus乳桿菌屬、Clostridiaceae_1、Candidatus_Arthromitus、Eubacterium_coprostanoligenes_group、Erysipelotrichia等在正常組中富集。

2.6.3 在屬分類學(xué)水平上，用藥第4天有30種腸道細菌在正常組與麻四組間表現(xiàn)出顯著差異。Ruminococcaceae_g_unclassified、Parasutterella帕拉薩特菌屬、Enterorhabdus、Erysipelatoclostridium、Staphylococcus葡萄球菌屬、Christensenellaceae_g_uncultured、Anaerofustis等在麻四組中富集;Lactococcus乳桿菌屬、Defluviitaleaceae_UCG_011、Candidatus_Arthromitus、Tyzzerella_3等在正常組中富集。

3 討論

腸道菌群數(shù)量巨多，種類龐大，功能復(fù)雜多樣[7]，在人類的演變過程中與人體形成了穩(wěn)定的一體，正常的菌群微生態(tài)在人體的發(fā)育、代謝、免疫、感染的預(yù)防及治療等方面發(fā)揮了舉足輕重的作用[8，9]，而一旦這種平衡的關(guān)系被打破，則會引起疾病的發(fā)生。近年來，腸道菌群的研究引起了國內(nèi)外學(xué)者的重視。大多數(shù)腸道細菌（尤其是厭氧菌）在體外很難被培養(yǎng)，而現(xiàn)今新技術(shù)的應(yīng)用加速了腸道菌群領(lǐng)域的研究，以幫助了解腸道菌群在健康和疾病中發(fā)揮的作用。本實驗通過對各組小鼠糞便樣本高通量測序結(jié)果的研究來分析菌群的整體變化，更進一步的反映各經(jīng)方藥物對小鼠腸道菌群狀態(tài)的影響。

短鏈脂肪酸（SCFA），又被稱為揮發(fā)性脂肪酸。甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸等都囊括其中，尤以乙酸、丙酸和丁酸含量最高[10]。腸道中碳水化合物經(jīng)細菌的發(fā)酵、蛋白降解是2種產(chǎn)生SCFA的途徑。SCFA可通過參與腸道的能量供應(yīng)來對宿主起重要的生理調(diào)節(jié)作用。SCFA在維持腸道PH及電解質(zhì)平衡、保護腸黏膜、調(diào)節(jié)免疫等方面均起到重要作用[11-13]。丁酸作為SCFA的一種，可以增加乳桿菌的產(chǎn)量，文獻報道[14]其可以通過激活Treg細胞和抑制促炎細胞因子產(chǎn)生的通路來調(diào)節(jié)慢性炎性反應(yīng)。

高通量測序結(jié)果表明，四君子湯、麻杏石甘湯、麻杏石甘湯合四君子湯的作用均可以對正常小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)及比例產(chǎn)生影響。各給藥組菌群OTU數(shù)量及shannon指數(shù)相較正常組變動明顯，其菌群豐度及多樣性隨之變化。UniFrac PCoA分析結(jié)果證實各給藥組與正常組間菌群結(jié)構(gòu)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。擬桿菌門與厚壁菌門是小鼠腸道中占比最高的兩大菌門，各給藥組在第4天的擬桿菌門占比均大于正常組，尤以麻四組最高;給藥第7天，麻四組擬桿菌門占比仍高于其他組，而麻杏組擬桿菌門占比下降且低于正常組，四君組擬桿菌門占比與正常組相差無幾。在屬水平上，各給藥組的優(yōu)勢菌屬結(jié)構(gòu)及比例也有明顯變化。乳桿菌屬是常見的益生菌，可以通過發(fā)酵食物產(chǎn)生乳酸從而降低PH值，達到抑制病原菌的目的[15]。Alistipes屬是一種常見的病原菌，相關(guān)文獻報道其可能與結(jié)腸炎有關(guān)。服用四君子湯后，乳桿菌屬占比雖在用藥第4天下降，但隨著用藥的延長，其占比在第7天明顯高于正常組。Alistipes占比在2時間段內(nèi)相較正常組均有所下降。僅從腸道優(yōu)勢菌屬的結(jié)構(gòu)及比例可以推斷，在服藥初期，例如乳桿菌屬的益生菌占比不會出現(xiàn)明顯變化，但其在腸道菌群中的占比會隨用藥時間的延長而出現(xiàn)顯著增長的趨勢，因此四君子湯的使用可以通過增加有益菌、抑制病原菌來對腸道菌群進行調(diào)節(jié)。服用麻杏石甘湯后，丁酸產(chǎn)生菌Lachnospiracea-NK4A136-group與病原菌Alistipes占比在2時間段內(nèi)均出現(xiàn)了明顯升高的趨勢，而乙酸產(chǎn)生菌Prevotellaceae_UCG_001占比均下降，說明服用麻杏石甘湯后，腸道中的不同益生菌有相反的變化趨勢，而病原菌會大幅增長，說明麻杏石甘湯調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡作用并不明顯。Ruminococcaceae是一種與丁酸產(chǎn)生有關(guān)的菌科。服用麻杏石甘湯合四君子湯后，Ruminococcaceae_UCG_014在給藥第4天占比較正常組顯著增加，而Alistipes在2時間段占比均降低，另有2種Prevotellaceae菌科的菌屬占比均增加。通過菌群優(yōu)勢菌屬的變化趨勢，我們發(fā)現(xiàn)，麻杏石甘湯合四君子湯對腸道菌群的影響并不單單是兩單方作用的疊加：病原菌Alistipes在合方中的變化趨勢與四君組相同而與麻杏組呈相反趨勢;乙酸產(chǎn)生菌科Prevotellaceae在麻杏組中占比降低而在合方中顯著升高;合方的使用，會使在單方中占比均不占優(yōu)勢的丁酸產(chǎn)生菌Ruminococcaceae成為優(yōu)勢菌屬。我們初步判斷，四君子湯及麻四湯的使用可以增加腸道有益菌屬，減少病原菌，且合方的使用會使腸道菌群出現(xiàn)區(qū)別于兩單方的新變化趨勢，合方是否可以通過菌群的變化趨勢產(chǎn)生新的作用有待進一步探討研究。

Blautia、Roseburia、Eubacterium_ventriosum_group、Clostridiaceae、Ruminococcaceae、Lachnospiraceae等均是與短鏈脂肪酸產(chǎn)生相關(guān)的細菌。在屬水平上的顯著性差異分析顯示，四君組在用藥第4天，Eubacterium_ventriosum_group與Blautia均顯著升高，而Roseburia與Clostridiaceae_1的含量降低，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答所必需的共生菌Candidatus_Arthromitus分段絲狀細菌在四君組中也有了降低的趨勢。用藥第7天，Eubacterium_ventriosum_group菌屬仍顯著性升高，Ruminococcaceae_UCG_009與Lachnospiraceae_UCG_001 2菌屬降低。有研究顯示[15]，Blautia屬Lachnospiraceae科，可通過產(chǎn)生乙酸為器官供能，而一些產(chǎn)丁酸鹽的菌屬可以降低Blautia的豐度，這可能是由于有機體競爭相同的底物或者形成抑制物質(zhì)導(dǎo)致的，因此，Blautia的變化與其他產(chǎn)丁酸菌的細菌呈相反趨勢也是合理的。麻杏組在用藥第4天，Peptococcaceae_g_uncultures與Coprococcus_1糞球菌屬_1在麻杏組中顯著性增多，乳桿菌屬、分段絲狀細菌顯著降低;給藥第7天，Coprococcus_1糞球菌屬_1、Oscillibacter顫螺旋菌屬、Eubacterium_brachy_group、Roseburia等在麻杏組中顯著富集。Peptococcaceae是存在于腸道和呼吸道中的消化球菌科，糞球菌屬是常見病原菌，結(jié)果顯示，給藥第4天，常見病原菌增多、益生菌降低;給藥第7天，雖然丁酸產(chǎn)生菌屬Roseburia有所升高，但病原菌還是顯著增多。因此麻杏石甘湯對腸道菌群的調(diào)節(jié)作用并不明顯。麻四組用藥第4天，Ruminococcaceae_g_unclassified等在麻四組中顯著增加，乳桿菌屬與分段絲狀細菌顯著性減少，減少的此2種菌屬與麻杏組第4天減少的菌屬一致。而用藥第7天，與短鏈脂肪酸產(chǎn)生相關(guān)的2個菌屬Eubacterium_ventriosum_group與Ruminococcaceae_g_unclassified增加，Bifidobacterium雙歧桿菌屬的含量也顯著性升高。

我們的研究結(jié)果表明，各中藥經(jīng)方均可以改變腸道菌群的構(gòu)成及比例，四君子湯、麻杏石甘湯合四君子湯的使用會顯著性地使與SCFA相關(guān)的菌屬豐度增加，且四君子湯與麻杏石甘湯的合用，使雙歧桿菌這一益生菌的豐度顯著增加。而麻杏石甘湯合四君子湯明顯增強麻杏石甘湯治療流感病毒小鼠的作用是否與SCFA相關(guān)菌屬的增加有關(guān)，需要進一步驗證。

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（2018-09-30收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）