甲基蓮心堿抗腫瘤藥理作用及其分子機(jī)制研究進(jìn)展

李琦瑋 張甘霖 孫旭 王笑民

摘 要 目的：了解甲基蓮心堿（Nef）抗腫瘤的藥理作用及其分子機(jī)制研究進(jìn)展，為該生物堿的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。方法：以“甲基蓮心堿”“腫瘤”“Neferine”“Anti-tumor”“Cancer”等中英文為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)、PubMed等數(shù)據(jù)庫中組合查詢發(fā)表于2000年-2018年9月的文獻(xiàn)，對Nef抗腫瘤的藥理作用及分子機(jī)制進(jìn)行綜述。結(jié)果：共檢索到文獻(xiàn)84篇，其中有效文獻(xiàn)34篇。結(jié)果與結(jié)論：Nef是一種提取自蓮子心的雙芐基異喹啉類生物堿，具有多重抗腫瘤藥理活性。Nef可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、阻滯腫瘤細(xì)胞周期、影響腫瘤細(xì)胞的自噬過程，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖；可通過提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性（如影響腫瘤細(xì)胞線粒體功能、抑制炎癥相關(guān)信號通路、阻礙上皮間質(zhì)性轉(zhuǎn)化進(jìn)程、協(xié)同抗腫瘤藥物）、降低化療藥物（如阿霉素、順鉑等）的毒性起到減毒增效的作用。近年來，有關(guān)Nef的基礎(chǔ)研究逐漸增多，但主要集中在體外分子機(jī)制研究，而基于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的安全性評價(jià)及藥理研究十分缺乏。多數(shù)研究關(guān)注于Nef在細(xì)胞水平內(nèi)與炎癥通路、自噬過程、氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系，但對引起這類反應(yīng)的上游腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)的研究仍有待深入開展。此外，Nef要從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用仍有相當(dāng)?shù)木嚯x，如何優(yōu)化藥物劑型、提高有效成分生物利用度，是今后亟需解決的問題。

關(guān)鍵詞 甲基蓮心堿；抗腫瘤；藥理作用；分子機(jī)制；自噬；凋亡；氧化應(yīng)激；炎癥通路；減毒增效

天然植物來源藥物的抗腫瘤作用一直備受關(guān)注。蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）是睡蓮科蓮屬植物，是一種重要的藥食同源植物。蓮子心是蓮成熟果實(shí)中的干燥幼葉及胚根，含有蓮心堿、甲基蓮心堿、去甲基衡州烏藥堿、荷葉堿、牛角花堿、蓮子堿等多種生物堿[1]。蓮子心味苦，性寒，無毒，入心、腎經(jīng)，具有清心安神、交通心腎、澀精止血之功效，常用于治療熱入心包、心腎不交、失眠遺精、血熱吐血等病癥[2]。除此之外，蓮子心在中醫(yī)腫瘤治療中也有重要的地位。

中醫(yī)腫瘤學(xué)認(rèn)為，癌癥的發(fā)生、發(fā)展與中醫(yī)“心”“腎”功能失調(diào)密切相關(guān)。《景岳全書》中指出：心為君火，腎為相火，心有所動，腎必應(yīng)之。若君相之火失司、水火未濟(jì)，易引起體內(nèi)環(huán)境失衡，可能導(dǎo)致癌毒的滋生與轉(zhuǎn)移。當(dāng)腫瘤患者出現(xiàn)熱擾心神證時(shí)，可應(yīng)用蓮子心清心安神、助血運(yùn)、交通心腎，有助于穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境，避免癌毒來復(fù)[3]。

蓮子心的主要有效成分是生物堿類，其中甲基蓮心堿（Neferine，Nef）屬于其主要成分雙芐基異喹啉類生物堿（Nef結(jié)構(gòu)式見圖1）。Nef具有多種藥理作用，包括抗氧化、抗炎[4]、抗抑郁[5]、抗藥物性肺/肝纖維化[6]、降壓、抗心律失常、抗血小板聚集、松弛血管平滑肌[7]、增加胰島素敏感性[8]、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞[9]、抗人類免疫缺陷病毒（HIV）[10]等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Nef具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、提高化療敏感性、降低腫瘤治療毒性等作用，在腫瘤治療方面具有良好的應(yīng)用前景，逐漸引起研究者的關(guān)注。筆者以“甲基蓮心堿”“腫瘤”“Neferine”“Anti-tumor”“Cancer”等中英文為關(guān)鍵詞，在中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫、PubMed等數(shù)據(jù)庫中組合查詢發(fā)表于2000年-2018年9月的文獻(xiàn)。結(jié)果，共檢索到文獻(xiàn)84篇，其中有效文獻(xiàn)34篇。本文對Nef抗腫瘤藥理作用及其分子機(jī)制進(jìn)行綜述，為該生物堿的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

[圖1 Nef結(jié)構(gòu)式]

1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖

1.1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是為了維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、由基因控制的細(xì)胞自主的程序性死亡，而腫瘤細(xì)胞往往具有抑制凋亡作用、異常增殖的特點(diǎn)。Poornima P等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Nef可通過影響凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)等機(jī)制誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。研究者采用Nef處理肝癌細(xì)胞HepG2后，細(xì)胞表現(xiàn)出胞內(nèi)活性氧（ROS）積累、谷胱甘肽含量降低的現(xiàn)象；而在Nef誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中，線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白減少，鈣離子（Ca2+）含量增加，同時(shí)凋亡蛋白如Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）/Bcl-xl相關(guān)死亡促進(jìn)蛋白（Bad）、解離形式的Caspase-3、Caspase-9和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）水平升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平降低。該研究結(jié)果表明，Nef可誘導(dǎo)線粒體產(chǎn)生ROS，進(jìn)而導(dǎo)致HepG2細(xì)胞發(fā)生Caspase依賴的細(xì)胞凋亡；此外，Nef可使HepG2細(xì)胞內(nèi)腫瘤壞死因子α（TNF-α）、p38絲裂原活化蛋白激酶與細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Erk1/2）表達(dá)上調(diào)，這些變化與ROS介導(dǎo)的凋亡過程有關(guān)。Yoon JS等[12]通過體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用15～30 μmol/L的Nef作用24 h后，可引起肝癌細(xì)胞Hep3B發(fā)生明顯的劑量依賴性細(xì)胞凋亡，而對肝臟正常細(xì)胞HCC Sk-Hep1或THLE-3則無明顯毒性。該研究還發(fā)現(xiàn)，Nef可激活Hep3B細(xì)胞中Bcl-2家族蛋白，如Bcl-2相互作用介質(zhì)蛋白（Bim）、BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白（Bid）、Bax、Bcl-2拮抗蛋白（Bak）、p53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子（Puma），表明細(xì)胞發(fā)生了線粒體膜電位變化誘導(dǎo)的凋亡過程，繼而激活了Caspases凋亡信號因子（Caspase-3、Caspase-6、Caspase-7、Caspase-8及PARP）表達(dá)上調(diào)；同時(shí)，Nef作用后細(xì)胞中免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白（Bip）、鈣聯(lián)結(jié)蛋白（Calnexin）、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）、鈣蛋白酶2（Calpain-2）及Caspase-12蛋白水平表達(dá)也明顯升高，表明死亡受體介導(dǎo)的外源性凋亡通路參與了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

Nef誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制與氧化應(yīng)激反應(yīng)、線粒體功能變化、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激密切相關(guān)，可能引起信號通路的級聯(lián)放大效應(yīng)，使凋亡與其他生理病理過程發(fā)生交互作用，共同導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的劇烈變化而引起其程序性死亡。

1.2 阻滯腫瘤細(xì)胞周期

細(xì)胞周期是指正常連續(xù)分裂的細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束的過程，包括靜止期（G0期）、DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）和有絲分裂期（M期）。細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的調(diào)控異常與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，可使腫瘤具有不斷增殖的特點(diǎn)[13]。Nef可引起腫瘤細(xì)胞周期阻滯，發(fā)揮抑制腫瘤增殖的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Hep3B細(xì)胞經(jīng)15 μmol/L Nef處理12 h后，出現(xiàn)了G1/S期阻滯；經(jīng)Western blotting法檢測證實(shí)，細(xì)胞中骨髓細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白（c-Myc）、細(xì)胞周期蛋白D1/D3（cyclin D1/D3）、周期依賴性蛋白激酶4（CDK 4）、E2F轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子1（E2F-1）表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞分裂控制蛋白2（CDC2）分子發(fā)生去磷酸化，這印證了細(xì)胞出現(xiàn)周期阻滯的現(xiàn)象[12]。Zhang X等[14]研究發(fā)現(xiàn)，1～10 μmol/L的Nef作用于人骨肉瘤細(xì)胞48 h后，可明顯引起細(xì)胞的G1期阻滯，而此過程與p53蛋白或視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤腫瘤抑制蛋白（RB）無關(guān)；同時(shí)，Nef對非腫瘤的成骨細(xì)胞無毒性作用。該研究證實(shí)，Nef可通過激活p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38 MAPK）通路和c-Jun氨基末端激酶（JNK），從而使p21蛋白半衰期延長；而采用抑制劑單獨(dú)阻斷p38蛋白作用并保持JNK活性后，可減弱Nef誘導(dǎo)的p21蛋白上調(diào)。由此提示，Nef的治療作用與p21蛋白的Ser130位點(diǎn)磷酸化密切相關(guān)，該磷酸化過程依賴于p38蛋白。

Nef對正常的肝臟細(xì)胞或成骨細(xì)胞均無明顯毒性作用，但可阻滯肝癌細(xì)胞、骨肉瘤細(xì)胞等的細(xì)胞周期進(jìn)程，這對于將Nef開發(fā)為腫瘤輔助治療藥物十分有利。但這一特性對其他腫瘤細(xì)胞是否同樣成立，還有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。Nef對于腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的細(xì)胞周期影響具有差異性，其內(nèi)在機(jī)制尚未明確。

1.3 影響腫瘤細(xì)胞的自噬過程

自噬是一個(gè)不斷循環(huán)進(jìn)行的生理過程，其被認(rèn)為在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有“雙刃劍”作用：一方面細(xì)胞自噬水平降低或缺失可激活DNA損傷，可能導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生；另一方面，腫瘤細(xì)胞的自噬水平一般高于其他正常組織，有利于其利用物質(zhì)和能量進(jìn)行自身發(fā)展[15]。此外，細(xì)胞在應(yīng)激狀態(tài)下可能發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡，這是一種由溶酶體介導(dǎo)的保守的程序性細(xì)胞死亡，是細(xì)胞自我分解組分以回收蛋白、維持細(xì)胞所必需的代謝過程或清除受損組織以維持基因穩(wěn)定的一種方式[16]。自噬被認(rèn)為可能是影響腫瘤發(fā)展的重要機(jī)制之一。

近年來研究表明，Nef可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬來干預(yù)腫瘤增殖活動。Nef可誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞中微管相關(guān)蛋白輕鏈3B（LC3B）過表達(dá)，使自噬小體形成增多；可誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞自噬發(fā)生，使酸性自噬泡積累增多，導(dǎo)致LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ的轉(zhuǎn)換增加，該過程與抑制磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路、誘導(dǎo)ROS累積相關(guān)，但與PI3K復(fù)合物PI3KCⅢ和Beclin1蛋白無明顯關(guān)聯(lián)[17]。一項(xiàng)針對卵巢癌細(xì)胞的體外研究表明，0.5～2 μmol/L的Nef作用于卵巢癌A2780細(xì)胞和SKOV3細(xì)胞48 h后，可劑量依賴性地抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞自噬水平升高，其分子機(jī)制與抑制mTOR信號通路、激活p38 MAPK和JNK信號通路有關(guān)[18]。

盡管多項(xiàng)研究認(rèn)為Nef具有誘導(dǎo)自噬的作用，但同時(shí)也有研究指出Nef對自噬的影響在于阻斷自噬降解過程。Xu T等[19]采用Nef處理可使人類細(xì)胞hTERT-RPE1、HEK-293、Hela細(xì)胞中LC3-Ⅱ與自噬底物泛素化蛋白p62/SQSTM1（SQSTM1）積累，而沉默自噬起始基因ATG5后并不能降低Nef誘導(dǎo)的LC3-Ⅱ積累效應(yīng)。進(jìn)一步通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，Nef處理可導(dǎo)致胞內(nèi)多泡體的形成，而溶酶體成熟出現(xiàn)障礙；同時(shí)，Nef還阻礙了組織蛋白酶D的成熟過程，使自噬降解過程受干擾。因此該研究認(rèn)為，Nef在自噬過程中是作為阻斷劑而非誘導(dǎo)劑，其通過抑制自噬小體與溶酶體的融合，從而抑制自噬降解過程。而對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231或MCF-7開展的體外研究也有類似發(fā)現(xiàn)[20]。

Nef對于不同細(xì)胞自噬進(jìn)程的影響表現(xiàn)不盡相同，但存在其既可能增強(qiáng)自噬水平，又可能阻滯溶酶體中自噬產(chǎn)物降解的可能。而關(guān)于Nef引發(fā)的自噬與凋亡過程中存在的互相影響，有待進(jìn)一步研究明確。

2 提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性

研究表明，腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制主要包括細(xì)胞對藥物的攝入減少、細(xì)胞對藥物的外排增加、細(xì)胞凋亡相關(guān)通路改變、藥物靶向分子改變、DNA 修復(fù)機(jī)制增強(qiáng)、藥物代謝酶活性增強(qiáng)等[21]。多種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如調(diào)控藥物通透的高分子糖蛋白P糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）、肺耐藥相關(guān)蛋白（LRP）、乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）等，均能將進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)的化療藥物排出胞外，從而使細(xì)胞產(chǎn)生耐藥；此外，酶系統(tǒng)、凋亡調(diào)控基因、DNA修復(fù)機(jī)制以及其他因素均可導(dǎo)致腫瘤耐藥[21]。上述結(jié)果表明，Nef可逆轉(zhuǎn)耐藥腫瘤細(xì)胞的耐藥性，該作用機(jī)制主要為其通過影響腫瘤細(xì)胞線粒體功能、抑制炎癥相關(guān)信號通路、阻礙上皮間質(zhì)性轉(zhuǎn)化（EMT）進(jìn)程，協(xié)同抗腫瘤藥物發(fā)揮抑瘤作用。

2.1 胃癌細(xì)胞

Nef可逆轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞SGC7901對長春新堿（VCR）的耐藥性。Cao JG等[22]研究發(fā)現(xiàn)，VCR對SGC7901細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為0.059、2.32 mg/mL；而經(jīng)2.5、5、10 mmol/L的Nef處理后，VCR對SGC7901耐藥細(xì)胞株的IC50值分別降至0.340、0.128、0.053 mg/mL，化療敏感性分別上升了6.8、18.1、43.8倍。同時(shí)該研究發(fā)現(xiàn)，SGC7901耐藥細(xì)胞株中 P-gP和MRP的表達(dá)水平顯著升高，而經(jīng)10 mmol/L的Nef處理24 h后，上述兩種蛋白表達(dá)則顯著下調(diào)。

2.2 肺癌細(xì)胞

Poornima P等[23]研究發(fā)現(xiàn)，Nef可加強(qiáng)阿霉素誘導(dǎo)的人肺癌A549細(xì)胞的凋亡作用。與單獨(dú)應(yīng)用10 μmol/L的Nef或2 μmol/L的阿霉素比較，兩者共同作用48 h后可使A549細(xì)胞中阿霉素的積累顯著增多。Nef可調(diào)節(jié)阿霉素誘導(dǎo)的內(nèi)源或外源性細(xì)胞凋亡，其與阿霉素聯(lián)合作用可誘導(dǎo)ROS生成并激活MAPK通路；此外，Nef還可抑制阿霉素誘導(dǎo)的核因子κB（NF-κB）的核轉(zhuǎn)位，兩藥聯(lián)用顯示出較單用阿霉素更強(qiáng)的抗腫瘤作用。另一項(xiàng)研究顯示，Nef聯(lián)合順鉑處理可下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax、Bad、Bak的表達(dá)，提高細(xì)胞色素C和p53蛋白水平，能激活剪切形式的Caspase-9、Caspase-3及PARP，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，并能顯著降低局部黏著斑激酶（FAK）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）水平，降低腫瘤細(xì)胞黏附能力，抑制腫瘤血管生成[24]。

2.3 肝癌細(xì)胞及實(shí)體瘤

經(jīng)體內(nèi)外研究證實(shí)，Nef可增加肝癌細(xì)胞對奧沙利鉑的敏感性。Deng G等[25]研究發(fā)現(xiàn)，Nef可通過上調(diào)上皮鈣黏著蛋白（E-cadherin），下調(diào)波形蛋白（Vimentin）、轉(zhuǎn)錄因子Snail和神經(jīng)鈣黏著蛋白（N-cadherin）的表達(dá)，從而抑制EMT誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞HepG2、Bel-7402的遷移和侵襲。該研究通過免疫組化染色證實(shí)，與奧沙利鉑單用比較，Nef聯(lián)合奧沙利鉑能顯著減少小鼠腫瘤內(nèi)的增殖細(xì)胞，并顯著減少E-cadherin與Vimentin蛋白分布，而且能明顯降低腫瘤組織中EMT標(biāo)志性分子的mRNA表達(dá)水平。

2.4 乳腺癌細(xì)胞

聯(lián)用Nef可顯著增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的凋亡作用。有研究發(fā)現(xiàn)，Nef聯(lián)合多柔比星能使動力蛋白1類似物（DNM1L）Ser637位點(diǎn)去磷酸化，從而增強(qiáng)DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體轉(zhuǎn)位，導(dǎo)致線粒體的過度分裂，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡[20]。

3 降低化療藥物的毒性

化療是目前腫瘤臨床最主要的治療方式，然而化療藥物的毒副作用引起的并發(fā)癥是影響患者治療依從性的主要因素。Nef可在增強(qiáng)化療藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用的同時(shí)，緩解化療藥物引起的不良反應(yīng)。

3.1 降低阿霉素所致心臟毒性

蒽環(huán)類藥物阿霉素的心臟毒性是腫瘤治療中的一大挑戰(zhàn)，其發(fā)生機(jī)制主要與鐵螯合物的形成有關(guān)，通過催化自由基的形成，干擾心肌細(xì)胞內(nèi)的線粒體功能，從而影響心肌細(xì)胞的收縮功能[26]。Priya LB等[27]研究發(fā)現(xiàn)，Nef預(yù)處理可以提高心肌細(xì)胞抗氧化能力，緩解蒽環(huán)類藥物所致的心臟毒性。該研究結(jié)果顯示，阿霉素可激活還原型輔酶Ⅱ（NADPH）氧化酶的亞單位（p22phox、p47phox、gp91phox），使Ca2+和ROS積累明顯增加；并可激活ERK1/2與p38 MAPK，導(dǎo)致時(shí)間依賴性的NF-κB的激活及轉(zhuǎn)位，以及環(huán)氧化酶2（COX-2）、TNF-α的表達(dá)上調(diào)。而Nef可通過調(diào)節(jié)NADPH氧化酶與ROS系統(tǒng)，抑制MAPK激酶激活和NF-κB的激活及轉(zhuǎn)位過程，降低G1期細(xì)胞數(shù)量，改善因cyclin D1表達(dá)增高而減損的阿霉素藥效。阿霉素引起心肌損傷的另一分子機(jī)制在于抑制1型胰島素受體（IGF-1R）的作用。Bharathi Priya L等[28]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)阿霉素處理的心肌細(xì)胞H9c2中，線粒體超氧化物顯著增多，細(xì)胞抗氧化功能受損。阿霉素可通過PI3K/Akt/mTOR分子通路與誘導(dǎo)自噬，抑制IGF-1R信號通路；而采用Nef預(yù)處理可激活I(lǐng)GF-1R分子通路，提高細(xì)胞抗氧化池儲備，誘導(dǎo)核因子2（Nrf2）轉(zhuǎn)位過程，促進(jìn)血紅素氧合酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶（SOD）的表達(dá)，提高心肌細(xì)胞抗氧化功能。

3.2 降低順鉑所致腎毒性

順鉑所致的腎毒性也是影響腫瘤臨床治療的重要因素之一，該毒性反應(yīng)與順鉑能引起腎臟細(xì)胞的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)腎臟細(xì)胞凋亡等過程密切相關(guān)[29]。Li H等[30]研究發(fā)現(xiàn)，Nef預(yù)處理對腎臟細(xì)胞具有保護(hù)作用，可減少順鉑所致的正常腎臟細(xì)胞的凋亡，激活細(xì)胞自噬過程；該保護(hù)作用可能與激活MAPK/mTOR信號通路和自噬過程有關(guān)，但具體機(jī)制仍有待后續(xù)研究進(jìn)一步闡明。

4 其他作用

在腫瘤治療過程中，可能誘發(fā)器官纖維化病變，這屬于異質(zhì)性的慢性瘢痕性疾病，與炎性因子刺激、損傷修復(fù)等因素相關(guān)。而Nef具有抗纖維化作用，可減輕藥物性肺纖維化[31]、肝纖維化程度[6]，其作用機(jī)制與Nef能提高細(xì)胞抗氧化和抗炎水平、抑制NF-kB有關(guān)。Zhao L等[31]采用博來霉素建立小鼠肺纖維化模型，對治療組小鼠采用腹腔注射Nef（20 mg/kg，bid），結(jié)果其肺纖維化指標(biāo)——羥脯氨酸的含量顯著低于模型組；同時(shí)，模型組小鼠體內(nèi)SOD水平較模型組顯著升高，TNF-α、TGF-β、IL-6與內(nèi)皮素1的表達(dá)水平較模型組顯著降低，而Nef可逆轉(zhuǎn)博來霉素引起的上述變化。

血管生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，抗血管生成治療可重塑腫瘤血管微環(huán)境，改變腫瘤血供和含氧量，增強(qiáng)腫瘤治療效果；還能抑制腫瘤內(nèi)毛細(xì)血管生長，使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入休眠狀態(tài)，并誘導(dǎo)其凋亡[32-33]。Nef具有抗血管生成、降低腫瘤組織毛細(xì)血管密度的作用。Zhang Q等[34]進(jìn)行了卵巢癌動物實(shí)驗(yàn)，在治療組和對照組小鼠接種卵巢癌細(xì)胞后，分別給予Nef或磷酸鹽緩沖液皮下注射12 d，結(jié)果顯示治療組小鼠移植瘤瘤質(zhì)量及腫瘤組織血管密度均顯著低于對照組。其機(jī)制研究表明，Nef可通過抑制mTOR/p70S6K信號通路，誘導(dǎo)自噬并抑制M2巨噬細(xì)胞極化作用，從而抑制腫瘤血管生成、減少腫瘤血供。

5 結(jié)語

綜上，Nef在中醫(yī)治療腫瘤領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。對于腫瘤這一機(jī)制復(fù)雜的全身性疾病，Nef可多層次、多靶點(diǎn)地發(fā)揮作用，抑制腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移，包括引起腫瘤細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)凋亡、影響自噬過程、抗血管生成以及對腫瘤微環(huán)境的重塑等；而且Nef對腫瘤細(xì)胞與正常組織細(xì)胞具有不同的影響，其具體機(jī)制有待深入研究明確。

目前針對Nef的研究也存在一定局限性，關(guān)于其藥理作用的研究主要集中于體外研究，基于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的安全性評價(jià)及藥理研究十分缺乏。多數(shù)研究關(guān)注于Nef在細(xì)胞水平內(nèi)與炎癥通路、自噬過程、氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系，但對引起這類反應(yīng)的上游腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)是否存在相關(guān)性仍有待挖掘。此外，Nef要從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用仍有相當(dāng)?shù)木嚯x，例如傳統(tǒng)含蓮子心的煎劑能否最大限度發(fā)揮Nef的抗腫瘤效應(yīng)有待探索；而如何優(yōu)化藥物劑型、提高有效成分生物利用度，是該領(lǐng)域亟需解決的問題。

天然來源的藥物成分對腫瘤本體及其周圍環(huán)境的多層次立體化的網(wǎng)絡(luò)作用，正是天然藥物在腫瘤治療中的特色所在。Nef是一種很有應(yīng)用前景的腫瘤治療天然單體成分，其作用機(jī)制仍存在很多未知之處有待探索，且天然藥物有效單體成分如何更好、更安全地應(yīng)用于臨床，也是需要亟待解決的重要課題。

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（收稿日期：2018-08-25 修回日期：2019-03-06）

（編輯：段思怡）