肝胃百合湯對(duì)慢性應(yīng)激與幽門(mén)螺桿菌雙重?fù)p傷因素模型小鼠胃黏膜組織HSP70、NF-κB蛋白表達(dá)的影響

喻斌　曾孟暉　徐寅　杜珊　黃柳向　毛一之　符佳

〔摘要〕 目的 觀(guān)察肝胃百合湯對(duì)慢性應(yīng)激與Hp感染雙因素?fù)p傷模型小鼠胃組織NF-κB、HSP70蛋白表達(dá)的影響，并研究其治療機(jī)制。方法 將60只雄性小鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白組、單純應(yīng)激組、單純Hp組、Hp+應(yīng)激組、肝胃百合湯組及雷尼替丁組;空白組和單純Hp組正常飼養(yǎng)，不限制進(jìn)食進(jìn)水;其余各組小鼠隨機(jī)選取禁食、禁水、電擊、行為束縛等10種刺激方法制備慢性應(yīng)激小鼠模型。于造模第7天時(shí)，除空白組及單純應(yīng)激組外，其余各組小鼠給予Hp菌液灌胃;連續(xù)造模14 d時(shí)，肝胃百合湯組小鼠灌胃肝胃百合湯，雷尼替丁組小鼠予以灌胃鹽酸雷尼替丁，其他各組小鼠灌胃蒸餾水;連續(xù)干預(yù)14 d后，取胃組織檢測(cè)潰瘍指數(shù);采用免疫組化法檢測(cè)小鼠胃黏膜組織HSP70、NF-κB的蛋白表達(dá)。結(jié)果 對(duì)比空白組，單純Hp組、單純應(yīng)激組以及Hp+應(yīng)激組小鼠的潰瘍指數(shù)與HSP70、NF-κB蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.01），且Hp+應(yīng)激組小鼠的潰瘍指數(shù)及NF-κB蛋白表達(dá)顯著高于單純應(yīng)激組及單純Hp組（P<0.01）;對(duì)比Hp+應(yīng)激組，肝胃百合湯組和雷尼替丁組小鼠潰瘍指數(shù)均顯著降低（P<0.01），且肝胃百合湯小鼠的潰瘍指數(shù)組顯著低于雷尼替丁組（P<0.01）;肝胃百合湯組和雷尼替丁組HSP70蛋白表達(dá)顯著增加（P<0.01），NF-κB蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），且肝胃百合湯組HSP70蛋白表達(dá)量大于雷尼替丁組，NF-κB蛋白表達(dá)量低于雷尼替丁組（P<0.01）。結(jié)論 慢性應(yīng)激與Hp可協(xié)同致胃黏膜損傷;肝胃百合湯可能是通過(guò)使HSP70蛋白表達(dá)增加，加強(qiáng)胃組織的自身修復(fù)作用，使受體的自身免疫能力提高，并降低NF-κB蛋白表達(dá)，減少其活性，使受損胃組織的炎癥反應(yīng)降低，從而起到抑制Hp，修復(fù)受損胃組織，加快胃潰瘍好轉(zhuǎn)的作用。

〔關(guān)鍵詞〕 肝胃百合湯;慢性應(yīng)激性胃潰瘍;幽門(mén)螺桿菌;HSP70;NF-κB

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R285.5;R573.1? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.09.005

Effects of Ganwei Baihe Decoction on Expressions of HSP70 and NF-κB Proteins in

Gastric Mucosa Tissue of Model Mice with Double Injury Factors of

Chronic Stress and Helicobacter pylori

YU Bin1， ZENG Menghui2， XU Yin1， DU Shan3， HUANG Liuxiang1， MAO Yizhi3， FU Jia1

（1. The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China;

2. Xingsha Branch of Hunan Provincial People's Hospital/People's Hospital of Changsha County， Changsha，

Hunan 410100， China; 3. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of Ganwei Baihe Decoction on expressions of HSP70 and NF-κB proteins in gastric mucosa tissue of model mice with double injury factors of chronic stress and Helicobacter pylori， and to study its mechanism of treatment. Methods A total of 60 male mice were randomly divided into 6 groups： blank group， stress group， Hp group， Hp + stress group， Ganwei Baihe Decoction group， and ranitidine group. The blank group and the Hp group were given normal diet， without limiting the intake of food and water; the other groups were randomly given 1 of the 10 stimulus methods such as fasting food， fasting water， electric shock， behavior constraints and other methods to prepare chronic stress mouse models. On the 7th day of modeling， except the blank group and the stress group， the other groups were given Hp bacterium solution by gavage. After 14 d of continuous modeling， the Ganwei Baihe Decoction group was given Ganwei Baihe Decoction by gavage， the ranitidine group was given ranitidine hydrochloride by gavage， and the rest groups were given distilled water by gavage. After 14 d of continuous intervention， gastric tissue was selected to determine ulcer indexes. The expressions of HSP70 and NF-κB proteins in gastric mucosa tissue of mice were detected by immunohistochemistry. Results The ulcer indexes and HSP70 and NF-κB protein expressions in the stress group， the Hp group and the Hp + stress group were significantly higher than those in the blank group （P<0.01）， and the ulcer index and NF-κB protein expression in the Hp + stress group were significantly higher than those in the stress group and the Hp group （P<0.01）. Compared with the Hp + stress group， the ulcer indexes in the Ganwei Baihe Decoction group and the ranitidine group were significantly decreased （P<0.01）， and the ulcer index in the Ganwei Baihe Decoction group was significantly lower than that in the ranitidine group （P<0.01）. The expression of HSP70 protein in the Ganwei Baihe Decoction group and the ranitidine group was significantly increased （P<0.01）， and the NF-κB decreased expression was significantly decreased （P<0.01）. And the expression quantity of HSP70 protein in the Ganwei Baihe Decoction group was higher than that in the ranitidine group， and the expression quantity of NF-κB protein was lower than that in the ranitidine group （P<0.01）. Conclusion Chronic stress and Hp can cause gastric mucosal injury in synergy. Ganwei Baihe Decoction can increase the expression of HSP70 protein， promote self-repair function of gastric tissue， enhance the immunity of receptors， decrease NF-κB protein expression and activity， and decrease the inflammatory reaction of gastric tissue， so as to achieve the effects of inhibiting Hp， repairing gastric mucosal injury， and promoting ulcer healing.

〔Keywords〕 Ganwei Baihe Decoction; chronic stress gastric ulcer; Helicobacter pylori; HSP70; NF-κB

胃潰瘍（gastric ulcer，GU）是指在飲食藥物刺激、精神應(yīng)激、幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori， Hp）感染等條件下，由于胃酸或胃蛋白酶自我消化破壞胃組織，而引起的潰瘍，其破壞程度通常達(dá)到或超過(guò)了胃黏膜肌層。而Hp也是潰瘍發(fā)生的重要原因之一。Matsushima等[1]通過(guò)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，神戶(hù)大地震發(fā)生后的一段時(shí)間，消化性潰瘍的人群顯著增加，其中很大一部分患者都是由于精神壓力過(guò)大導(dǎo)致，同時(shí)Hp感染在胃潰瘍的發(fā)病中也有不可忽視的作用。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，Yamamoto等[2]對(duì)應(yīng)激與Hp感染雙重?fù)p傷因素對(duì)小鼠胃組織的損害作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，得出了Hp感染會(huì)使強(qiáng)迫游泳小鼠出現(xiàn)的胃黏膜破壞更加嚴(yán)重的結(jié)論。而Guo等[3]研究發(fā)現(xiàn)，感染了Hp的BALB/c小鼠，慢性心理應(yīng)激會(huì)使其胃中Hp繁殖量明顯增加，并使Hp導(dǎo)致的胃組織損傷更加嚴(yán)重，證明慢性應(yīng)激與Hp對(duì)胃黏膜的損傷有協(xié)同作用。

對(duì)于慢性應(yīng)激引起并同時(shí)有Hp感染的消化性潰瘍患者，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一般選擇三聯(lián)或四聯(lián)療法來(lái)清除Hp、保護(hù)胃黏膜，此療法起效較快，可有容易耐藥、副作用較多、費(fèi)用較高的不足之處，且胃中定植的Hp雖被清除，但慢性應(yīng)激使患者產(chǎn)生的不適感并沒(méi)有太大緩解。肝胃百合湯是已故湖湘中醫(yī)五老之一的夏度衡教授的經(jīng)驗(yàn)方，也是夏教授“后天脾胃難離肝”的學(xué)術(shù)思想的代表方，本院使用此方治療合并有Hp感染的肝胃氣滯型胃潰瘍常有顯著療效。通過(guò)前期的各項(xiàng)研究[4-7]，得出了肝胃百合湯能明顯緩解肝胃氣滯型胃潰瘍患者的難受癥狀，對(duì)胃組織的修復(fù)有促進(jìn)作用，且能有效殺滅Hp的結(jié)論。根據(jù)這個(gè)結(jié)論，我們進(jìn)一步推測(cè)肝胃百合湯可能是通過(guò)加強(qiáng)熱休克蛋白70（heat shock protein 70， HSP70）的表達(dá)，降低核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）的活性來(lái)治療合并Hp感染的慢性應(yīng)激性胃潰瘍。為中醫(yī)藥預(yù)防和治療合并Hp感染的慢性應(yīng)激性胃潰瘍提出新的診療方法與實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和菌種

6周齡雄性健康BALB/c小鼠（SPF級(jí)）60只，質(zhì)量在19～22 g之間，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SYXK（湘）2015-0003，動(dòng)物質(zhì)量合格號(hào)：43004700025541。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：溫度20～25 ℃，濕度50%～70%。幽門(mén)螺桿菌：悉尼標(biāo)準(zhǔn)菌株（悉尼菌株I，SSI），菌株含有空泡細(xì)胞毒素（vacA）和細(xì)胞毒素相關(guān)基因（cagA）蛋白由湖南中醫(yī)藥大學(xué)微生物免疫教研室提供，濃度為1×l09cfu/mL。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物

肝胃百合湯（百合15 g，柴胡9 g，郁金9 g，烏藥9 g，川楝子9 g，丹參9 g，白芍9 g，蒲公英15 g，甘草6 g），飲片購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房;煎煮飲片并使用離心機(jī)去除藥物中殘?jiān)?，將藥物濃縮至每1 mL含1 g生藥，置于4 ℃冰箱中備用。鹽酸雷尼替丁膠囊批號(hào)：1602224，購(gòu)自佛山手心制藥有限公司，規(guī)格：0.15 g/粒。

1.3? 主要儀器及試劑

GIS-1000數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng)（天能科技有限公司），PM 8AD攝像顯微鏡（奧林巴斯公司），Image-Pro-Plus圖像分析軟件（Media Cybernetics）。PBS（pH 7.2～7.6）、枸櫞酸鹽緩沖液均購(gòu)自Wellbio公司，HSP70一抗（批號(hào)10995-1-AP）、NF-κB一抗（批號(hào)14220-1-AP）均購(gòu)自Proteintech公司。

2 方法

2.1? 實(shí)驗(yàn)分組及造模方法

將60只BALB/C小鼠按體質(zhì)量分層隨機(jī)分成6組，分別為空白組、單純應(yīng)激組、單純Hp組、Hp+應(yīng)激組、雷尼替丁組、肝胃百合湯組，每組10只?？瞻捉M及單純Hp組正常飼養(yǎng)，不限制飲水及納食。其他組按照相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]隨機(jī)選取禁食、禁水、電擊、行為束縛等10種刺激方法制備慢性應(yīng)激小鼠模型，固定于每天上午9時(shí)重新選擇刺激因素，共制造小鼠模型28 d。于造模第7天時(shí)，除空白組及單純應(yīng)激組外，其余各組小鼠使用Hp菌液0.5 mL/只（1×109cfu/mL）灌胃，并在灌Hp菌液前24 h禁止進(jìn)食，4 h禁止飲水;灌胃后再禁食禁水2 h。每次灌胃間隔1 d，共灌胃3次。28 d后，造模結(jié)束，剪斷小鼠尾巴提取血液檢測(cè)血清中Hp抗體，將小鼠胃組織制成病理切片，鏡下察看其炎癥情況。

2.2? 干預(yù)及樣本處理

小鼠連續(xù)造模14 d后，給予肝胃百合湯組小鼠灌胃肝胃百合湯，在灌胃前將藥物按照人體用藥量換算成小鼠等效劑量，換算后為12.2 g/（kg·d）。將鹽酸雷尼替丁膠囊用蒸餾水溶解后，按照60 kg成人用藥量換算成小鼠等效劑量40 mg/（kg·d），然后給雷尼替丁組小鼠灌胃;剩下各組小鼠給予同等體積（均為0.4 mL/d）蒸餾水灌胃。灌胃時(shí)間固定為每天更改刺激因素前1 h，連續(xù)灌胃14 d。2周灌胃結(jié)束后，將所有小鼠禁食禁水12 h，然后處死取出胃組織，從胃大彎測(cè)將胃組織剪開(kāi)，把其中殘留物使用冰生理鹽水沖洗干凈，使用微測(cè)尺測(cè)量黏膜潰瘍或糜爛長(zhǎng)度，計(jì)算潰瘍指數(shù)。選擇胃黏膜損傷較多的位置，取一塊約1 cm×0.5 cm的胃標(biāo)本，用生理鹽水將其洗凈，放置于4%多聚甲醛中處理24 h后，切5 μm薄片，封片，用于免疫組化檢測(cè)。

2.3? 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.3.1? 小鼠潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率 按照Guth標(biāo)準(zhǔn)測(cè)算胃黏膜潰瘍指數(shù)（ulcer index， UI）及潰瘍抑制率，使用微測(cè)尺測(cè)量胃組織中潰瘍或糜爛的長(zhǎng)度（mm）：若糜爛為斑點(diǎn)狀計(jì)1分;糜爛不足1 mm則為2分;大于1 mm不足2 mm為3分;大于2 mm不足3 mm為4分;大于3 mm為5分;若同時(shí)寬度大于1 mm則分?jǐn)?shù)翻倍，整個(gè)胃黏膜組織總分?jǐn)?shù)即為潰瘍指數(shù)。

潰瘍抑制率=[（Hp+應(yīng)激組平均潰瘍指數(shù)-藥物干預(yù)組平均潰瘍指數(shù)）/Hp+應(yīng)激組平均潰瘍指數(shù)]×100%

2.3.2? 小鼠胃黏膜組織HE染色? 將所取胃黏膜使用石蠟包埋，然后切片脫蠟水洗，在蘇木素染液中浸泡染色2～4 min，水洗;置于1%鹽酸中分化約10 s，再使用流水沖洗5～l0 min，直至淡紫紅色的細(xì)胞核變?yōu)樗{(lán)色，置于伊紅染液中浸染30 s，再分別使用60%～100%濃度乙醇脫水，使用二甲苯I、二甲苯II透明，中性樹(shù)膠封片，用光鏡觀(guān)察樣本。

2.3.3? 小鼠胃組織HSP70及NF-κB蛋白表達(dá)? 采用免疫組化法。按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，制成封片后將樣本放于顯微鏡下觀(guān)測(cè)，并使用IPP圖像分析軟件分析觀(guān)測(cè)的圖像。在每個(gè)封片觀(guān)測(cè)到的圖像中，隨機(jī)選擇3個(gè)高倍視野，計(jì)算蛋白陽(yáng)性表達(dá)面積占所選取區(qū)域總面積的百分比，作為HSP70、NF-κB的蛋白表達(dá)量，并進(jìn)行半定量分析。

2.4? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理與分析，計(jì)量資料以“x±s”表示，用單因素方差分析（One-way ANOVA）進(jìn)行多組間比較。符合正態(tài)分布，同時(shí)方差齊性時(shí)，采用LSD法，方差不齊時(shí)采用Tamhane’s T2法，不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01認(rèn)為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 小鼠治療后潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率比較

對(duì)比空白組，單純Hp組、單純應(yīng)激組和Hp+應(yīng)激組潰瘍指數(shù)明顯升高（P<0.01），同時(shí)Hp+應(yīng)激組高于單純應(yīng)激組及單純Hp組（P<0.01）;對(duì)比Hp+應(yīng)激組，肝胃百合湯組和雷尼替丁組潰瘍指數(shù)明顯減?。≒<0.01），同時(shí)肝胃百合湯組潰瘍指數(shù)低于雷尼替丁組（P<0.01）。雷尼替丁組抑制潰瘍的百分比低于肝胃百合湯組。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2? 各組小鼠胃組織病理改變

空白組：胃組織光滑柔軟，未見(jiàn)到黏膜腫脹或紅斑，光鏡下可見(jiàn)胃黏膜細(xì)胞與腺體分布規(guī)整連續(xù);單純Hp組：胃組織表面紅腫，不夠平整，有些許糜爛，腺體排列稍紛亂，光鏡下可觀(guān)察到浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞;單純應(yīng)激組：胃組織黏膜層損壞，皺襞失去連續(xù)，能觀(guān)察到掉落壞死的細(xì)胞與被胃酸破壞的組織，并能看到部分胃黏膜糜爛和呈點(diǎn)線(xiàn)狀的潰瘍，光鏡下可見(jiàn)部分浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞;Hp+應(yīng)激組：胃組織表面被破壞較嚴(yán)重，可見(jiàn)多處皺襞沒(méi)有連續(xù)性，有大量掉落的細(xì)胞、被破壞的組織以及出血，能見(jiàn)到許多糜爛的黏膜和點(diǎn)線(xiàn)狀的潰瘍損害，浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞比較多，胃黏膜肌層甚至都可見(jiàn)炎性細(xì)胞;肝胃百合湯組：胃組織的破壞明顯少于Hp+應(yīng)激組，腺體分布規(guī)整連續(xù)，個(gè)別可見(jiàn)少許紅腫，可觀(guān)察到些許呈點(diǎn)狀的糜爛，黏膜未見(jiàn)潰瘍損害，光鏡下僅觀(guān)察到少許的炎癥反應(yīng);雷尼替丁組：胃黏膜較平滑，可見(jiàn)程度較輕的腫脹，腺體的分列尚連續(xù)，胃組織被破壞的地方均不深，有些許糜爛，未見(jiàn)到較顯眼的潰瘍，光鏡下能觀(guān)察的浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞。見(jiàn)圖1。

3.3? 各組小鼠胃組織免疫組化結(jié)果

黃褐色部分在免疫組織化學(xué)圖像中為陽(yáng)性表現(xiàn)。在顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)，空白組小鼠胃組織HSP70、NF-κB陽(yáng)性區(qū)域較小;單純Hp組、單純應(yīng)激組和Hp+應(yīng)激組HSP70、NF-κB在圖像中陽(yáng)性區(qū)域均顯著高于空白組，且Hp+應(yīng)激組多于單純Hp組、單純應(yīng)激組;肝胃百合湯組和雷尼替丁組均有大部分HSP70蛋白陽(yáng)性表達(dá)，且陽(yáng)性區(qū)域明顯大于Hp+應(yīng)激組，其中肝胃百合湯組陽(yáng)性表達(dá)高于雷尼替丁組;肝胃百合湯組和雷尼替丁組胃組織NF-κB在圖像中僅有少許陽(yáng)性區(qū)域，遠(yuǎn)低于Hp+應(yīng)激組，且肝胃百合湯組NF-κB陽(yáng)性表達(dá)低于雷尼替丁組。HSP70、NF-κB蛋白的表達(dá)分別見(jiàn)圖2和圖3。

3.4? 各組小鼠胃組織HSP70、NF-κB蛋白表達(dá)的比較

各組小鼠胃組織HSP70蛋白表達(dá)的比較：對(duì)比空白組，單純Hp組、單純應(yīng)激組和Hp+應(yīng)激組小鼠胃組織HSP70蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.01），但是三組之間蛋白表達(dá)量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;對(duì)比Hp+應(yīng)激組，肝胃百合湯組及雷尼替丁組小鼠胃組織HSP70蛋白表達(dá)大幅升高（P<0.01），同時(shí)肝胃百合湯組高于雷尼替丁組（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

各組小鼠胃組織NF-κB蛋白表達(dá)的比較：對(duì)比空白組，單純Hp組、單純應(yīng)激組和Hp+應(yīng)激組小鼠胃組織NF-κB蛋白表達(dá)明顯上升（P<0.01），同時(shí)Hp+應(yīng)激組小鼠胃組織NF-κB蛋白表達(dá)量高于單純應(yīng)激組及單純Hp組（P<0.05）;對(duì)比Hp+應(yīng)激組，肝胃百合湯組和雷尼替丁組NF-κB明顯減少（P<0.01），且肝胃百合湯組少于雷尼替丁組（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

慢性應(yīng)激性胃潰瘍可分于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“胃脘痛”“胃瘍”的類(lèi)別，疾病的發(fā)生經(jīng)常是由先天體質(zhì)欠佳、情緒意志失調(diào)、飲食饑飽無(wú)常、睡眠晝夜顛倒等引起;這些個(gè)人體質(zhì)、生活習(xí)慣、情志調(diào)控的不足，使中州脾胃受損，不能很好起到人體氣機(jī)運(yùn)行樞紐的職責(zé)，進(jìn)而導(dǎo)致全身氣機(jī)混亂，升降失調(diào)。因此可認(rèn)為疾病發(fā)生的機(jī)制是胃中氣血失于調(diào)和，全身氣機(jī)運(yùn)行混亂。同時(shí)我們?cè)谂R床中觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，合并有Hp感染的胃部疾病的患者常有口干苦、苔黃膩等濕熱性質(zhì)的表現(xiàn)，而Hp有傳染性、病情容易反復(fù)、殺滅后仍有可能再次感染的致病特點(diǎn)，也類(lèi)似于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中濕熱之邪重濁黏滯等的致病特點(diǎn)。所以對(duì)于此類(lèi)疾病的治療需以疏肝行氣、和胃止痛、清熱燥濕為原則。肝胃百合湯是已故的湖湘知名老中醫(yī)夏度衡教授個(gè)人創(chuàng)制方，夏度衡教授結(jié)合眾多古代醫(yī)學(xué)名家的傳世經(jīng)典以及自己幾十年治病救人的體會(huì)，發(fā)表了“后天脾胃難離肝”的學(xué)術(shù)主張，并在為病人處方選藥的時(shí)候十分注意調(diào)節(jié)肝胃間相互的影響。肝氣質(zhì)剛強(qiáng)，并有相火藏于其中，用藥治療肝時(shí)，切記不可一味地使用辛香發(fā)散的藥物來(lái)調(diào)暢肝氣，因?yàn)榇祟?lèi)藥物會(huì)引起肝木更加亢盛，克制脾胃之土，使其氣陰損傷。肝胃百合湯此方正是根據(jù)夏度衡教授這個(gè)觀(guān)點(diǎn)而創(chuàng)制。方中選藥將疏肝行氣，活血止痛作為主要原則，同時(shí)輔以清熱、補(bǔ)虛，寒溫并調(diào)，補(bǔ)瀉同用，達(dá)到了調(diào)暢肝氣，恢復(fù)脾胃氣機(jī)升降樞紐職責(zé)的目的。

Hp是一類(lèi)定植于人體胃組織的革蘭陰性微需氧桿菌，它是引起消化性潰瘍重要因素[10-11]，并且很大一部分消化性潰瘍都能通過(guò)清除Hp得到好轉(zhuǎn)甚至完全治愈[12];在經(jīng)過(guò)大量醫(yī)學(xué)臨床觀(guān)察與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后，研究人員提出Hp與應(yīng)激會(huì)相互協(xié)同損害胃組織，Hp還會(huì)進(jìn)一步加重應(yīng)激性胃潰瘍患者的病情[13]。HSP是一類(lèi)在機(jī)體應(yīng)激時(shí)能起到保護(hù)作用的蛋白質(zhì)，它在胃組織的修復(fù)中尤為重要。正常情況下，HSP在細(xì)胞中的表達(dá)一直處于較低狀態(tài)，但當(dāng)機(jī)體受到損傷而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，HSP將顯著增加其在細(xì)胞中的表達(dá)。這類(lèi)蛋白質(zhì)中，對(duì)胃組織起到最重要保護(hù)作用的是HSP70。NF-κB是一個(gè)功能眾多的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，它與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等都有密切關(guān)系。當(dāng)感染、創(chuàng)傷、氧氣缺乏等刺激機(jī)體使其處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，NF-κB被激活，開(kāi)始調(diào)節(jié)許多與炎癥反應(yīng)有關(guān)的細(xì)胞因子、黏附分子和蛋白酶類(lèi)的基因轉(zhuǎn)錄，使機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。與此同時(shí)，相應(yīng)的炎癥因子也會(huì)進(jìn)一步使NF-κB的活性加強(qiáng)，NF-κB與炎癥因子相互催化相互放大，使炎癥對(duì)機(jī)體的傷害更加嚴(yán)重[14-15]。眾多研究者發(fā)現(xiàn)，Hp感染機(jī)體會(huì)促進(jìn)NF-κB的活化，而HSP70可以維持細(xì)胞的生存和功能，提高細(xì)胞抵抗力，對(duì)Hp的預(yù)防和殺滅起到了十分重要的作用[16-17]。同時(shí)，HSP70與NF-κB也會(huì)相互競(jìng)爭(zhēng)和對(duì)抗，HSP70能夠使NF-κB活化受到抑制，讓它與炎癥因子之間無(wú)法相互催化促進(jìn)，有效加強(qiáng)了胃組織的自我修復(fù)能力并明顯改善了炎性反應(yīng)對(duì)機(jī)體的損傷[18]。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)：慢性應(yīng)激合并Hp感染對(duì)于小鼠胃組織的破壞性明顯高于單純慢性應(yīng)激或單純Hp感染。經(jīng)過(guò)肝胃百合湯和雷尼替丁干預(yù)后，Hp+應(yīng)激模型小鼠的Hp定植量明顯減少，胃組織損傷情況顯著好轉(zhuǎn)，HSP70蛋白表達(dá)升高，NF-κB表達(dá)降低，且肝胃百合湯小鼠的潰瘍指數(shù)組顯著低于雷尼替丁組（P<0.01），HSP70蛋白表達(dá)明顯多于雷尼替丁組，NF-κB蛋白表達(dá)明顯少于雷尼替丁組（P<0.01）。說(shuō)明肝胃百合湯可顯著減少慢性應(yīng)激合并Hp感染胃潰瘍的炎性反應(yīng)并能加快潰瘍的好轉(zhuǎn)，且效果優(yōu)于西藥治療。

綜上所述，肝胃百合湯治療慢性應(yīng)激合并Hp感染胃潰瘍的作用機(jī)制可能與使HSP70蛋白表達(dá)增加、抑制Hp、修復(fù)受損胃組織、提高機(jī)體自身免疫能力、抑制NF-κB活化、改善炎性反應(yīng)對(duì)機(jī)體的損傷等方面有關(guān)。

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