疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織血管生成的影響

李琳霈 楊曉 王容容 潘博 蔣益蘭 柏正平

〔摘要〕 目的 研究中藥疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織微血管密度（microvessel density， MVD）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）及乳腺組織結(jié)構(gòu)的影響，探討其防治乳腺癌的作用機(jī)制。方法 采用二甲基苯蒽灌胃及夾尾法制備乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型，隨機(jī)分為模型組（蒸餾水）、中藥組（疏肝健脾解毒方10.35 g/kg）、三苯氧胺組（2.0 mg/kg），另取10只為空白對(duì)照組，分別相應(yīng)干預(yù)4周后，制備乳腺組織石蠟切片進(jìn)行病理學(xué)觀察，采用免疫組織化學(xué)方法及Western-blot法檢測(cè)各組大鼠乳腺組織中MVD及VEGF表達(dá)情況。結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示，與模型組比較，中藥組及三苯氧胺組乳腺組織非典型增生現(xiàn)象減少，乳腺組織MVD及VEGF水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），中藥組MVD及VEGF水平稍低于三苯氧胺組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;Western-blot結(jié)果顯示：與模型組比較，中藥組及三苯氧胺組乳腺組織非典型增生現(xiàn)象減少，乳腺組織MVD及VEGF水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），中藥組MVD及VEGF水平與三苯氧胺組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 中藥疏肝健脾解毒方可在一定程度上降低乳腺癌癌前病變?nèi)橄俳M織非典型增生傾向，其機(jī)制可能與降低VEGF水平、抑制新生血管生成有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 乳腺癌;癌前病變;疏肝健脾解毒方;血管生成;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

〔中圖分類號(hào)〕R285.5;R737.9? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.10.005

Effects of Shugan Jianpi Jiedu Formula on Angiogenesis of Breast Tissue in Breast Cancer Rat Model with Precancerous Lesion of Liver Qi Stagnation Syndrome

LI Linpei1，2， YANG Xiao1， WANG Rongrong2， PAN Bo2， JIANG Yilan2， BAI Zhengping1，2*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The Affiliated Hospital of Hunan

Academy of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410006， China）

〔Abstract〕 Objective To study on effects of Shugan Jianpi Jiedu Formula on microvessel density （MVD）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and breast tissue structure in breast cancer rat model with precancerous lesion of liver Qi stagnation syndrome， so as to explore its mechanism in prevention and treatment of breast cancer. Methods The breast cancer rat model with precancerous lesion of liver Qi stagnation syndrome was prepared by intragastric administration of dimethyl benzanthracene and tail clamping method. The rats were randomly divided into a model group （distilled water）， a Chinese materia medica group （Shugan Jianpi Jiedu Formula 10.35 g/kg）， a tamoxifen group （2.0 mg/kg） and a blank control group （n=10）. Paraffin sections of breast tissue were prepared for pathological observation. MVD and VEGF expressions in breast tissue of rats were detected by immunohistochemical method and Western-blot. Results Immunohistochemical results showed that compared with the model group， atypical hyperplasia of breast tissue in the Chinese materia medica group and the tamoxifen group was decreased， breast tissue MVD and VEGF levels were decreased， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The MVD and VEGF levels in the Chinese materia medica group were slightly lower than those in the tamoxifen group， and there was no statistical significance in the difference （P>0.05）. Western-blot results showed that compared with the model group， atypical hyperplasia of breast tissue in the Chinese materia medica group and the tamoxifen group was decreased， breast tissue MVD and VEGF levels were decreased， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The differences of MVD and VEGF levels between the Chinese materia medica group and the tamoxifen group were not statistically significant （P>0.05）. Conclusion Shugan Jianpi Jiedu Formula can decrease atypical hyperplasia tendency in breast tissue for precancerous lesions of breast cancer to a certain extent， and the mechanism may be related to the decrease of VEGF level， and the inhibition of angiogenesis.

〔Keywords〕 Shugan Jianpi Jiedu Formula; breast cancer; precancerous lesion; angiogenesis; vascular endothelial growth

乳腺癌已成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一[1]，該病發(fā)病率和死亡率每年都在不斷上升[2]。對(duì)癌前病變進(jìn)行早期干預(yù)治療，可有效降低乳腺癌的發(fā)生。我院腫瘤科經(jīng)過(guò)多年實(shí)驗(yàn)研究與臨床實(shí)踐，研制出“疏肝健脾解毒方”用于防治乳腺癌及乳腺癌癌前病變，并在臨床應(yīng)用中取得一定療效。本文研究該方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織中微血管密度（microvessel density，MVD）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及乳腺組織結(jié)構(gòu)的影響，進(jìn)一步探索中藥復(fù)方防治乳腺癌的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 動(dòng)物? SPF級(jí)SD雌性大鼠41只，體質(zhì)量（200±20） g，購(gòu)自長(zhǎng)沙斯萊科景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2017-0013，在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房飼養(yǎng)適應(yīng)1周后開(kāi)始動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1.1.2? 藥物及試劑? 疏肝健脾解毒方藥物組成：郁金10 g，柴胡10 g，茯苓10 g，白術(shù)10 g，白花蛇舌草30 g，半枝蓮30 g，蒲公英30 g，飲片由湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院中藥房提供。陽(yáng)性對(duì)照藥：三苯氧胺（枸櫞酸他莫昔芬片），規(guī)格：10 mg/片，江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司。二甲基苯蒽（DMBA，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：35605-5G-F）;ABC免疫組化試劑盒（武漢博士德，批號(hào)：SA1022）;APS（批號(hào)：ST005）、TEMED（批號(hào)：ST728）均為上海碧云天;兔抗鼠VEGF抗體（批號(hào)：ab68334）、CD34抗體（批號(hào)：ab185732）均為英國(guó)Abcam;水合氯醛（上海展云化工有限公司，批號(hào)：302-17-0）。

1.1.3? 主要儀器? 石蠟切片機(jī)（杭州艾普儀器公司）;倒置生物顯微鏡 CKX41SF 型（日本Olympus）;XFS-280型壓力蒸氣滅菌鍋（浙江新豐醫(yī)療器械公司）。

1.2? 方法

1.2.1? 藥物制備? 先將疏肝健脾解毒方飲片粉碎成粗顆粒，用8倍量溫水浸泡30 min，大火加熱，水沸騰后繼續(xù)小火加熱30 min，濾過(guò)。藥渣再加6倍量水煎煮2次，每次30 min，過(guò)濾。將3次水煎液混合均勻，過(guò)濾，減壓濃縮為濃度為1 g/mL的溶液保存于4 ℃;三苯氧胺用生理鹽水溶解成0.2 mg/mL的溶液備用;二甲基苯蒽按50 g∶500 mL溶于芝麻油中備用。

1.2.2? 造模及分組? 將SD大鼠隨機(jī)選取10只為空白對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)第1天所有大鼠先用芝麻油2 mL灌胃1次后自然飼養(yǎng)。乳腺癌癌前病變肝郁證模型制備參考文獻(xiàn)[3]。模型大鼠實(shí)驗(yàn)第1天用溶解有二甲基苯蒽的芝麻油（l0 mg/mL），按10 mg/kg給大鼠一次性灌胃處理。第4周開(kāi)始，限制大鼠活動(dòng)范圍，用鉗頭纏有紗布的止血鉗夾大鼠的尾巴，使其互相追咬、尖叫、保持激怒狀態(tài)，每天夾尾激惹時(shí)間為45 min，持續(xù)4周。4周后隨機(jī)選取造模大鼠1只，切取乳腺組織，制備石蠟切片，HE染色，顯微鏡下觀察腺泡細(xì)胞排列紊亂、核漿比增大、核異形性改變等不典型增生改變或顯示腺泡或?qū)Ч苌掀ぴ龆嗟仍錾钴S改變，提示乳腺癌癌前病變模型造模成功。模型大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組，分別為模型組、中藥組（疏肝健脾解毒方組）、三苯氧胺組，每組10只。干預(yù)如下，空白對(duì)照組：自然飼養(yǎng)，不做處理;模型組：蒸餾水灌胃10 mL/kg，每天1次;中藥組：疏肝健脾解毒方煎液灌胃，10.35 g/kg，每天1次;三苯氧胺組：三苯氧胺生理鹽水溶液2 mg灌胃，每天1次。各組大鼠均連續(xù)灌胃4周。各組干預(yù)劑量均為臨床等效劑量。

1.2.3? 乳腺組織病理學(xué)觀察? 各組大鼠均切取第3對(duì)乳腺，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色。利用光學(xué)顯微鏡觀察各組大鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)。1.2.4? 免疫組化IHC法檢測(cè)乳腺組織MVD? 最后一次灌胃后2 h，處死大鼠，切除大鼠第2對(duì)乳房，取乳腺組織石蠟包埋后制成4 μm厚的石蠟切片，常規(guī)脫蠟水化，加兔抗鼠CD34、VEGF的單克隆抗體，使用免疫組織化學(xué)通用型試劑盒，DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，中性樹(shù)膠封片。根據(jù)CD34表達(dá)情況，計(jì)算MVD，計(jì)算方法：光鏡下CD34免疫組化染色呈棕黃色、淡黃色或棕褐色。將CD34染色陽(yáng)性的切片，在低倍鏡（×100）下確定3個(gè)血管最密集部分，再在高倍鏡（×200）下計(jì)數(shù)每個(gè)密集區(qū)中1個(gè)視野的微血管數(shù)，以3個(gè)區(qū)域微血管數(shù)的平均數(shù)作為MVD，并在高倍鏡（×400）下拍照。

1.2.5? 乳腺組織VEGF蛋白表達(dá)檢測(cè)? 各組大鼠取0.1 g乳腺組織，用PBS洗滌1次后加入200 μL RIPA蛋白裂解液，提取細(xì)胞總蛋白，苯二甲芐基氯化銨（BCA）蛋白濃度測(cè)定法進(jìn)行蛋白定量，聚丙烯酰胺電泳按分子量大小分離蛋白，再將蛋白轉(zhuǎn)移到雜交膜上，加入5 mL封閉液，封閉 60 min后，加入VEGF一抗（稀釋比例1∶5 000），放入搖床，4 ℃過(guò)夜，用TBST洗滌蛋白條帶3次后用稀釋后的二抗（稀釋比例 1∶5 000）與膜共同孵育45～60 min。再用TBST洗滌3次，加入化學(xué)發(fā)光試劑后曝光顯影，掃描底片，采用Image J軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度分析，目的蛋白與內(nèi)參蛋白灰度比值為蛋白相對(duì)含量。

1.2.6? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析? 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以“x±s”表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布及方差齊性時(shí)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD法;數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布或方差不齊時(shí)，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)中多個(gè)獨(dú)立樣本Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

用藥過(guò)程中，模型組大鼠死亡2只，三苯氧胺組死亡1只，中藥組死亡0只。經(jīng)解剖，大鼠死亡原因?yàn)楦胃顾渭?xì)胞壞死。

2.1? 疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織結(jié)構(gòu)的影響

與空白組比較，模型組乳腺導(dǎo)管高度擴(kuò)張，上皮層增多，細(xì)胞間推擠及重疊現(xiàn)象等乳腺非典型增生現(xiàn)象明顯，三苯氧胺組及中藥組乳腺組織非典型增生現(xiàn)象較模型組少。見(jiàn)圖1。

2.2? 疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織MVD、VEGF的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組瘤體組織可見(jiàn)數(shù)量較多微血管，模型組MVD較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），三苯氧胺組及中藥組MVD略低于空白對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與模型組比較，三苯氧胺組及中藥組MVD水平降低，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;中藥組MVD水平低于三苯氧胺組，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與空白對(duì)照組比較，模型組VEGF較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而三苯氧胺組及中藥組VEGF水平與空白對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與模型組比較，三苯氧胺組及中藥組VEGF水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;中藥組VEGF水平稍低于三苯氧胺組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1及圖2-3。

2.3? 疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織VEGF蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組VEGF較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而三苯氧胺組及中藥組VEGF水平與空白對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與模型組比較，三苯氧胺組及中藥組VEGF水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;中藥組VEGF水平與三苯氧胺組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2及圖4。

3 討論

乳腺癌癌前病變與血管生成緊密相關(guān)。血管生成與乳腺良性疾病惡變，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后均有密切的關(guān)系。血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和分化都受到VEGF mRNA的調(diào)控。VEGF家族被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生的主要參與者[4]，也是最重要的血管形成促進(jìn)因子[5]。VEGF是一種高度特異的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，它可以選擇性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)血管生成，由其主導(dǎo)的信號(hào)通路參與到血管新生整個(gè)過(guò)程，發(fā)揮著不可替代的作用[6]。

許多中草藥已通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究等被證明能夠抑制腫瘤血管生成。如西黃丸有抗乳腺增生，逆轉(zhuǎn)乳腺癌前病變的作用，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制血管生成及其趨化因子受體表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的[7-8]。多項(xiàng)研究均證實(shí)人參皂苷Rg3具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[9]，同時(shí)能減少新生毛細(xì)血管生成，抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，進(jìn)而抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[10-11]。

乳腺癌癌前病變從中醫(yī)學(xué)來(lái)說(shuō)，屬于 “乳癖”范疇[12]。龔居中的《外科活人定本》中首次提出“乳癖”，“此癥生于正乳之上，乃厥陰、陽(yáng)明經(jīng)之所屬……何謂之癖，硬而不痛，如頑核之類，過(guò)久則成毒”，指出該病有可能惡變。多項(xiàng)研究都認(rèn)為乳腺癌的發(fā)病多與情志相關(guān)。乳腺癌癌前病變階段的基本病機(jī)變化在于肝郁氣滯，中醫(yī)辨證證候分布與癌前病變臨床進(jìn)程相參照，肝郁氣滯證的癥狀在乳腺非典型性導(dǎo)管上皮增生、非典型小葉增生、硬化性腺病等多種乳腺癌癌前病變中體現(xiàn)。因此，我們認(rèn)為肝郁脾虛、瘀毒內(nèi)結(jié)是引起乳腺癌癌前病變的重要病機(jī)之一，即著重從“瘀、毒、虛”著手[13]。而肝郁證是乳腺癌癌前病變中醫(yī)病證結(jié)合造模的理想切入點(diǎn)?！笆韪谓∑⒔舛痉健睘槲以耗[瘤科防治乳腺癌及乳腺癌前病變的核心經(jīng)驗(yàn)方，白術(shù)、茯苓、郁金、柴胡健脾疏肝、行氣解郁;蒲公英、白花蛇舌草、半枝蓮清熱解毒、消腫散結(jié)，該方扶正抗癌，標(biāo)本同治。前期研究[14-15]證實(shí)疏肝健脾解毒方對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖有一定的抑制作用，可能通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)，且可有效降低乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型血清中性激素水平。

本研究通過(guò)二甲基苯蒽灌胃聯(lián)合夾尾法制備乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型，為今后乳腺癌癌前病變的研究打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。該方法制備的大鼠模型，神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)的改變和一般行為狀況的改變符合中醫(yī)學(xué)對(duì)肝郁證的認(rèn)識(shí)。相關(guān)文獻(xiàn)[3]亦有報(bào)道利用這種方法構(gòu)建乳腺癌癌前病變模型，造模后第8周即出現(xiàn)組織形態(tài)學(xué)的變化，乳腺癌癌前病變形成時(shí)間較傳統(tǒng)雌激素造模方法提前。另外，此模型可以模擬乳腺癌癌前病變臨床特點(diǎn)，符合中醫(yī)學(xué)肝郁證辯證要求，為乳腺癌癌前病變的中西醫(yī)結(jié)合臨床與實(shí)驗(yàn)研究提供了有力的支持。

本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織結(jié)構(gòu)及微血管MVD、VEGF的影響。免疫組化及Western-blot結(jié)果顯示，與模型組比較，中藥組及三苯氧胺組乳腺組織非典型增生現(xiàn)象減少，乳腺組織MVD及VEGF水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），疏肝健脾解毒方組MVD及VEGF水平略低于三苯氧胺組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表明該方可有效改善乳腺癌癌前病變肝郁證大鼠模型乳腺組織結(jié)構(gòu)改變，降低乳腺組織MVD及VEGF水平。提示中藥疏肝健脾解毒方可在一定程度上降低乳腺癌癌前病變?nèi)橄俳M織非典型增生傾向，其機(jī)制可能與降低VEGF水平、抑制新生血管生成有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 索龍格，楊順娥.雙側(cè)原發(fā)性乳腺癌發(fā)病的臨床相關(guān)性因素分析[J].實(shí)用癌癥雜志，2017，32（6）：916-919.

[2] 李華艷.加減逍遙散聯(lián)合姑息性化療治療中晚期乳腺癌患者臨床療效觀察[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2017，23（15）：122-124.

[3] 宋愛(ài)莉，梁? 棟，殷玉琨，等.大鼠乳腺癌癌前病變肝郁證造模的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（1）：5-7.

[4] 趙? 川，李俊萱，劉雪梅，等.腫瘤血管生成機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2017，35（1）：130-132.

[5] LIANG J， WANG H，XIAO H. Relationship and Prognostic Significance of SPARC and VEGF Protein Expression in Colon Cancer[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research，2010，29（1）：1-11.

[6] 向本旭，劉婷婷，孫芳玲，等.VEGF相關(guān)信號(hào)通路在血管新生中的研究進(jìn)展[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2015，25（12）：81-86.

[7] 鄧衛(wèi)芳，裴曉華.乳腺癌癌前病變“毒瘀互結(jié)”模型大鼠生物表征變化及化瘀解毒法的調(diào)控[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（5）：1508-1512.

[8] 馬? 杰，王一堯，楊? 偉，等.西黃丸抗腫瘤作用及其免疫清除功能的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)中藥雜志，2014，39（8）：1499-1501.

[9] 馬? 莉，李小靜，寧金龍.人參皂苷Rg3抗腫瘤作用與病理性瘢痕關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2013，22（20）：2077-2079.

[10] GUO J V Q， ZHENG Q H， CHEN H， et al. Ginsenosede Rg3 inhibiton of vasculogenic mimicry in pancreatic cancer through downregulation of V Ecadherin / EphA2 / MMP9 / MMP2 expression[J]. International Journal of Oncology， 2014，45（3）：1065-1072.

[11] 江? 昌，繆雨青，周文麗，等.人參皂苷Rg3的抗腫瘤作用及研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2017，22（7）：664-667.

[12] 張文嫻，李? 瀾，賈? 波.從溫陽(yáng)論治乳腺癌[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2017，13（8）：89-90.

[13] 李琳霈，潘? 博，杜小艷，等.潘敏求教授從“瘀、毒、虛”論治乳腺癌經(jīng)驗(yàn)[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，36（4）：38-40.

[14] 李琳霈，楊? 曉，潘? 博，等.疏肝健脾解毒方對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖及凋亡的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，38（6）：645-649.

[15] 李琳霈，楊? 曉，潘? 博，等.疏肝健脾解毒方對(duì)乳腺癌癌前病變肝郁證模型大鼠血清性激素水平的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（11）：1200-1203.