包蟲病基因篩查

李有義

[摘要]包蟲病屬于人畜共患性寄生蟲疾病，具有一定的自然疫源性和地方流行性特征，嚴重威脅羞牧區(qū)人們的身體健康，同時也阻礙了牧區(qū)經(jīng)濟的健康穩(wěn)定發(fā)展，我國可以說是包蟲病嚴重流行的國家，嚴重程度居世界首位。按我國各省包蟲病的流行程度劃分，依次是：新疆、青海、西藏、寧夏、甘肅、四川、內(nèi)蒙古等七省區(qū)的牧區(qū)或半農(nóng)半牧區(qū)，覆蓋國土面積達44%，流行區(qū)入口數(shù)約6600萬，其中未經(jīng)治療的包蟲病患者十年病死率高達94%，就如此高的致死率來看，包蟲病已經(jīng)成為直接侵害到人們健康、生命的罪魁禍首，不僅如此，也是影響到地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展的一大感染性病癥。20082013年全州六個縣，對由B超所篩查出來的包蟲病相關流行情況做統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)：主要有囊型、泡型和混合型這三型的包蟲病廣泛分布。而其分布范圍主要涉及到44個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，患病率平均達到了5.12%，甚至于由2012年開展的局部地區(qū)（班瑪縣、達日縣特合土鄉(xiāng)）調(diào)查結(jié)果顯示，平均染病率超過了10.00%，達到了11.20%，在犬類當中的感染率已經(jīng)達到47.62%，在嚙齒類動物當中的感染發(fā)生率則是4.72%，另外于牛、羊類動物當中的感染率達到了13.37%。位于果洛州的班瑪縣則為世界上流行最嚴重的地區(qū)之一，目前已經(jīng)成為包蟲病的重災區(qū)。本文主要對包蟲病基因的相關問題進行了研究。

[關鍵詞]包蟲病;基因;篩查

[中圖分類號]R532.32 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）18-0191-02

包蟲病一般是棘球?qū)俳{蟲幼蟲所引起，目前已分布全球，屬于全世界范圍內(nèi)最具致命性的疾病之一。關于包蟲病的治療，國家雖然頒布和提出相關措施，但受到宗教信仰、民族、文化等因素的影響，這些預防措施的實施難度通常較大。近年來，為了能夠更好的預防和控制包蟲病，在疾病基因研制方面也做了大量工作，且也取得了顯著成果。在棘球蚴基因方面研究中，僅Cucher報道有38個與細粒棘球蚴發(fā)育階段密切相關基因，其中細粒棘球蚴屬特有的序列。與細粒棘球蚴不同，形成包蟲病的多房棘球蚴以出芽或浸潤式增殖，直接破壞和取代肝實質(zhì)，當囊液發(fā)生滲漏并且接觸到了肝組織之后，便會造成局部肝組織的病變、增生以及纖維化?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，這種變化與病毒性肝炎引發(fā)的肝癌極為相似。蟲體通過改變肝細胞的miRNA，使肝細胞的代謝、生長、分化發(fā)生變化以適應蟲體生長及逃避人體的免疫系統(tǒng)。這些結(jié)果表明，泡球蚴感染引起的肝組織miRNA變化是特異及有規(guī)律的，掌握了這一變化，即找到特異的基因作為檢測標志就能對包蟲病感染的程度及預防等工作作出貢獻。基因工程主要是借助生物學技術和基因重組技術，修復和改造病原微生物基因，具有著十分廣闊的發(fā)展前景。

1.棘球?qū)俳{蟲基因篩查

由棘球?qū)俳{蟲所引起的包蟲病目前在全國范圍內(nèi)發(fā)病率極高，棘球?qū)俳{蟲幼蟲可寄生在動物和人體的任何部位，不僅生命力頑強，且體積龐大，同時還會形成繼發(fā)性感染，如果棘球?qū)俳{蟲包囊破裂，后果不堪設想，可能會引起腹腔種植，引起患者過敏性休克。目前，關于棘球?qū)俳{蟲的治療一般以外科手術為主，藥物屬于輔助治療措施，但手術經(jīng)常會對人體產(chǎn)生危害，且術后復發(fā)概率較高。例如，通過阿苯達挫類藥物的應用，生物利用度很差，效果不確定，缺乏有效的藥物，且可產(chǎn)生很多的不良反應，基因研究為包蟲病的預防和控制帶來了希望的曙光。

為了研究基因和包蟲病之間的關系，實驗中，可通過基因探針的方式，從患者生體上直接選擇包蟲病灶標本，之后將切取的標本基因檢測結(jié)果和正常肝組織相比，如果檢測出高表達或低表達的基因，意味著可能與包蟲感染有關系，能不能從這方面入手，研究疫苗預防包蟲病。

1.1.BCG-EG95基因重組 EG95在棘球?qū)俳{蟲的成蟲、六鉤蚴階段，可對EG95基因進行重組，因此可見，在包蟲病的生長和發(fā)育過程中，EG95基因發(fā)揮著至關重要的作用。據(jù)相關調(diào)查研究顯示，通過對EG95基因進行重組，可有效避免牛、羊等牲畜發(fā)生感染，為包蟲病的預防和控制提供機會。

1.2.BCG-EgGlYl62基因重組 對BCG-EgGlYl62基因進行重組，同時具有抗原性和免疫原性，BCG-EgGlY 162基因重組可誘導產(chǎn)生體液免疫反應和細胞免疫反應。為對BCG-EgGlYl62基因作用進行觀察，一些研究人員開展了實驗，將3組感染患者作為研究對象，年齡30～50歲，將包蟲病灶組織和正常肝臟組織進行基因探針測序。測序的結(jié)果BCG-EgGlYl62基因存在重組，結(jié)果表明，BCG-EgGlYl62基因可能與包蟲免疫有關，由此可見，BCG-EgGlYl62基因可從抑制囊腫生長和減少囊腫數(shù)量等方面入手，來抵抗囊性包蟲感染，以起到良好的保護作用，不管是牲畜還是入類，均能起到良好的免疫保護效應。

1.3.Eg.myophilin基因重組據(jù)相關調(diào)查研究表明，Eg.myophilin基因具有良好的免疫原性和抗原性，可將其作為包蟲病的首選，為對Eg.myophilin的保護性進行探究，在測序研究中。結(jié)果表明，在免疫的患者血清中l(wèi)gG2a、lgGl、lgE等抗體水平也有所提升，這些抗體能溝通通過中和作用、調(diào)理作用等，對棘球?qū)俳{蟲原頭節(jié)進行殺傷，由此也突出了Eg.myophilin的抗棘球?qū)俳{蟲效果。lgE通過嗜酸性粒細胞和巨噬細胞等，直達活化細胞和感染病灶，殺死包蟲。有研究顯示，重組質(zhì)粒pET28a-Egl23當經(jīng)過轉(zhuǎn)化、變成大腸埃希菌BL21后，使用IPTG（劑量為經(jīng)0.4mmol/L）進行誘導、持續(xù)培養(yǎng)3個小時，之后加以超聲破碎處理，以每分鐘12000轉(zhuǎn)的速度（離心半徑設置為0.4cm）進行離心處理，10分鐘后，采用SDS-PAGE電泳進行對上清液與沉淀的鑒定，對所表達出的蛋白分子質(zhì)量單位進行統(tǒng)計，約有29ku，這一結(jié)果和預測值（包括7kuHis標簽）是一致的。同時應注意，目的蛋白大都是存在在細菌沉淀當中的，由此來看，重組蛋白主要表達形式是包涵體。經(jīng)過初步的篩選，我們得到：EgM家族蛋是能夠起到很好的免疫保護效果的，并獲得了EgMl23-GST重組蛋白。但是受到GST標簽蛋白比較大的因素影響，所以可能會對表達蛋白結(jié)構(gòu)造成一定程度的影響。Pet-28a具有強啟動子T7及1ae調(diào)控子，若是于啟動子以及多克隆位點之間帶有6個His標簽，那么可以得到分子質(zhì)量單位較小的結(jié)果，這樣也更有益于支持對目的蛋白的純化與鑒定。

結(jié)語：

在我國的北部和西部牧區(qū)中，包蟲病的發(fā)病概率極高，由此也對牧區(qū)經(jīng)濟的健康穩(wěn)定發(fā)展產(chǎn)生了影響和阻礙。目前，關于包蟲病的治療和控制，國內(nèi)已經(jīng)取得了很多研究成果，為了使該疾病的治療更加完善，還需要進行進一步的研究。例如，在基因重組和免疫保護方面，整體的效果還不夠理想，還需要對最佳免疫時間和免疫劑量進行確定，從而最大限度提升治療效果?；驒z測屬于一種實用性較強、簡便便捷的方法，在包蟲病的控制和預防工作中應用十分廣泛。在當前的包蟲病基因檢測領域中，基因工程優(yōu)勢顯著，隨著免疫學技術和分子生物學技術的不斷發(fā)展，也會研制出更多的基因工程，實現(xiàn)對包蟲病的有效防治。