同位素稀釋—超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血漿中氟康唑的濃度

楊浩天 吳茵 宋浩靜 邱志宏 董占軍

中圖分類號(hào) R927.2；R978.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）02-0235-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.02.19

摘 要 目的：建立測(cè)定人血漿中氟康唑濃度的方法。方法：血漿樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后，以同位素氟康唑-d4為內(nèi)標(biāo)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18，流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液-乙腈（梯度洗脫），流速為0.3 mL/min，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量為3 μL；采用電噴霧離子源，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行正離子掃描，用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 307.1→220.0（氟康唑）和m/z 311.1→223.0（內(nèi)標(biāo)）。結(jié)果：氟康唑血藥濃度檢測(cè)的線性范圍為10～5 000 ng/mL（r=0.998 1），定量下限為10 ng/mL；日內(nèi)、日間RSD均低于8%，準(zhǔn)確度為95.8%～106.7%；提取回收率為97.3%～107.3%（RSD<5.0%，n=6），基質(zhì)效應(yīng)、稀釋效應(yīng)及殘留效應(yīng)均不影響待測(cè)物的定量分析。結(jié)論：該方法簡便、快速、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，可用于氟康唑治療藥物監(jiān)測(cè)及藥動(dòng)學(xué)研究。

關(guān)鍵詞 氟康唑；同位素內(nèi)標(biāo)；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；血藥濃度；治療藥物監(jiān)測(cè)

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for determination of fluconazole concentration in human plasma. METHODS： UPLC-MS/MS method was adopted to determine plasma after precipitated with acetonitrile. Using isotope fluconazole-d4 as internal standard， the determination was performed on ACQUITY UPLC BEH C18 column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid-acetonitrile （gradient elution） at the flow rate of 0.3 mL/min. The column temperature was 40 ℃， and the sample size was 3 μL. ESI was used for positive ion scanning by multiple reaction monitoring mode. The ion pairs for quantitative analysis were m/z 307.1→220.0 （fluconazole） and m/z 311.1→223.0 （internal standard）. RESULTS： The linear range of fluconazole was 10-5 000 ng/mL （r=0.998 1）. The limits of quantitation was 10 ng/mL. RSDs of intra-day and inter-day were less than 8%； accuracy ranged 95.8%-106.7%. The extraction recovery ranged 97.3%-107.3% （RSD<5.0%， n=6）， and matrix effect， dilution effect and residual effect didn’t influence quantitative analysis of the substance to be measured. CONCLUSIONS： The method is simple， rapid， specific and accurate， which can be used for therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic study of fluconazole.

KEYWORDS Fluconazole； Isotope internal standard； UPLC-MS/MS； Plasma concentration； Therapeutic drug monitoring

氟康唑（Fluconazole）是通過抑制真菌麥角甾醇合成而抑制或殺滅真菌的三唑類抗真菌藥物，對(duì)深部真菌感染特別是白色念珠菌和新型隱球菌感染具有顯著療效[1]。該藥自1988年上市以來，因具有抗真菌譜廣、肝毒性小、口服吸收好、生物利用度高、組織分布廣等優(yōu)點(diǎn)，其臨床應(yīng)用十分廣泛[2]。氟康唑用藥過量易導(dǎo)致患者肝腎功能異常，且與其他藥物（如氫氯噻嗪、異煙肼、利福平等）聯(lián)合使用時(shí)，也可能會(huì)導(dǎo)致氟康唑血藥濃度發(fā)生改變[3-4]；同時(shí)有文獻(xiàn)指出，在聯(lián)合使用氟康唑和部分降脂、降糖、降壓藥物（如辛伐他汀、格列吡嗪、硝苯地平等）時(shí)，累及患者肝臟、腎臟及骨骼、心血管、內(nèi)分泌系統(tǒng)的不良反應(yīng)的發(fā)生率將會(huì)有所增高[5]。因此對(duì)于聯(lián)合使用氟康唑及其他藥物治療的患者，有必要對(duì)其體內(nèi)氟康唑的血藥濃度進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)（TDM），并結(jié)合監(jiān)測(cè)結(jié)果及患者癥狀優(yōu)化個(gè)體治療方案，以保證用藥的安全、有效、合理[6]。目前文獻(xiàn)報(bào)道的血藥濃度檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC）和液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS），所用到的內(nèi)標(biāo)化合物包括甲磺酸酚妥拉明、甲硝唑和非那西丁等[7-10]。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（LC-MS/MS）在靶向定量分析領(lǐng)域中的應(yīng)用獨(dú)具優(yōu)勢(shì)；與傳統(tǒng)的LC-MS/MS法相比，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（UPLC-MS/MS）顯著提高了復(fù)雜體系中藥物定量分析的效率，并逐漸得到了廣泛應(yīng)用[11]。此外，上述內(nèi)標(biāo)的應(yīng)用可能會(huì)受到類似聯(lián)用藥物的干擾，而同位素內(nèi)標(biāo)則可有效避免這種干擾，有助于實(shí)現(xiàn)復(fù)雜體系中某一藥物的準(zhǔn)確定量[12]。為此，本研究建立了測(cè)定人血漿中氟康唑濃度的同位素稀釋-UPLC-MS/MS法，以期為該藥的TDM和臨床合理應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-30A型UPLC系統(tǒng)，配有LC-30AD型二元高壓梯度泵、CTO-30A型柱溫箱、SIL-30AC型自動(dòng)進(jìn)樣器（日本Shimadzu公司）；AB Sciex Triple QuadTM 5500型三重四極桿MS儀，配有Turbo ⅤTM型離子源、AcQuRateTM型脈沖離子計(jì)數(shù)檢測(cè)器和Analyst 1.6數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)（美國AB Sciex公司）；BP211D型分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；Elmasonic S150實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用型超聲波清洗器（德國Elma公司）；Sorvall ST16R型高速冷凍離心機(jī)（美國Thermo Fisher Scientific公司）；MIULAB MIX-25P型渦旋儀（杭州米歐儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

氟康唑?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號(hào)：100314-201605，純度：99.7%）；氟康唑-d4對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，加拿大TLC Pharmaceutical Standards公司，批號(hào)：1132- 051A1，純度：98.7%）；脂肪乳注射液（C14～24）[20%，費(fèi)森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80LA004，規(guī)格：250 mL ∶ 50 g（大豆油） ∶ 3 g（卵磷脂）]；二甲基亞砜（DMSO）、乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純，水為自制超純水。

1.3 空白血漿

來自于我院體檢中心，經(jīng)肝素抗凝后，分離上層血漿即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫[0～1.2 min，20%B→50%B；1.2～1.8 min，50%B→90%B；1.8～3.1 min，90%B；每針進(jìn)樣前以初始比例（20%B）平衡2 min]；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：15 ℃；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：3 μL。

2.1.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源，正離子方式檢測(cè)（ESI+）；離子源溫度：600 ℃；離子源噴射電壓：4 500 V；霧化氣（Gas 1，N2）和加熱氣（Gas 2，N2）壓力：55 psi；氣簾氣（N2）壓力：35 psi；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式掃描。用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z 307.1→220.0[氟康唑，去簇電壓（DP）：130 V，碰撞能量（CE）：20 eV]、m/z 311.1→223.0（內(nèi)標(biāo)，DP：100 V，CE：25 eV）。氟康唑和內(nèi)標(biāo)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式與質(zhì)譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液 取氟康唑?qū)φ掌?0 mg，精密稱定，置于10 mL量瓶中，加DMSO溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的對(duì)照品貯備液。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控工作溶液 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，用50%乙腈稀釋，配制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.4、1.0、3.0、10.0、30.0、80.0、100.0 μg/mL的系列溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。另取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，用50%乙腈稀釋，配制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.6、7.5、40.0、75.0、500.0 μg/mL的系列溶液，作為質(zhì)控工作溶液。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)貯備液和內(nèi)標(biāo)工作溶液 取內(nèi)標(biāo)對(duì)照品2 mg，精密稱定，用DMSO溶解并稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的內(nèi)標(biāo)貯備液。取上述內(nèi)標(biāo)貯備液適量，用50%乙腈稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 000 ng/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液。

2.3 血漿樣品的制備及處理

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品的制備 取空白血漿190 μL，置于1.5 mL離心管中，精密加入“2.2.2”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液各10 μL，配制成質(zhì)量濃度分別為10、20、50、150、500、1 500、4 000、5 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品。

2.3.2 質(zhì)控血漿樣品的制備 取空白血漿190 μL，精密加入“2.2.2”項(xiàng)下質(zhì)控工作溶液各10 μL，配制成質(zhì)量濃度依次為10、30、375、2 000、3 750、25 000 ng/mL的質(zhì)控血漿樣品。

2.3.3 待測(cè)血漿樣品的處理 精密吸取待測(cè)血漿樣品及內(nèi)標(biāo)工作溶液各30 μL，加入乙腈180 μL，以2 000 r/min渦旋5 min沉淀蛋白后，以12 000 r/min高速離心10 min，取上清液30 μL，加入50%乙腈270 μL，混勻，備測(cè)。

2.4 專屬性考察

取6個(gè)不同來源的空白血漿及質(zhì)量濃度為10 ng/mL的質(zhì)控血漿樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，不同來源空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)均不影響待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定，兩者的保留時(shí)間約為2.0 min，詳見圖2。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與定量下限的考察

取“2.3.1”項(xiàng)下氟康唑質(zhì)量濃度分別為10、20、50、150、500、1 500、4 000、5 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品各適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測(cè)物質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)、待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法（權(quán)重系數(shù)ω=1/x2）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=5.11×10-4x+1.82×10-3（r=0.998 1）。結(jié)果表明，氟康唑血藥濃度檢測(cè)的線性范圍為10～5 000 ng/mL，定量下限為10 ng/mL。

2.6 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下氟康唑定量下限質(zhì)量濃度（10 ng/mL）血漿樣品以及“2.3.2”項(xiàng)下低、中、高質(zhì)量濃度（30、2 000、3 750 ng/mL）質(zhì)控血漿樣品各6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)測(cè)定3 d，考察日間精密度。將實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，考察準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，各質(zhì)控血漿樣品日內(nèi)、日間RSD均低于8%，準(zhǔn)確度為95.8%～106.7%，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[13]，詳見表1。

2.7 提取回收率試驗(yàn)

取“2.3.2”項(xiàng)下氟康唑低、中、高質(zhì)量濃度（30、2 000、3 750 ng/mL）質(zhì)控血漿樣品各6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，得峰面積（A1）。取空白血漿適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理，制得空白基質(zhì)，以該空白基質(zhì)為溶劑，平行配制基質(zhì)質(zhì)控樣品各6份，使最終質(zhì)量濃度與前者對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣分析，得峰面積（A2）。提取回收率=A1/A2×100%。結(jié)果顯示，低、中、高質(zhì)量濃度質(zhì)控血漿樣品的提取回收率分別為（102.1±1.3）%、（99.7±2.4）%、（104.5±2.8）%（結(jié)果范圍為97.3%～107.3%），RSD分別為1.3%、2.4%、2.7%（n=6）；內(nèi)標(biāo)提取回收率為（96.8±4.2）%，RSD為4.3%（n=6），符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[13]。

2.8 基質(zhì)效應(yīng)

2.8.1 正?；|(zhì)效應(yīng) 取6個(gè)不同來源的空白血漿適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理，制得空白基質(zhì)，以該空白基質(zhì)為溶劑，平行配制氟康唑低、高質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的基質(zhì)質(zhì)控樣品各3份，進(jìn)樣分析，得峰面積（B1）。以乙腈為溶劑配制相應(yīng)質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的氟康唑?qū)φ掌啡芤?，進(jìn)樣分析，得峰面積（B2）。正?；|(zhì)效應(yīng)=B1/B2×100%。結(jié)果顯示，氟康唑的正常基質(zhì)效應(yīng)為92.7%～100.4%，內(nèi)標(biāo)的正?；|(zhì)效應(yīng)為（96.2±4.6）%，RSD均小于5%（n=3），提示正常血漿的基質(zhì)效應(yīng)不影響待測(cè)物的測(cè)定，詳見表2。

2.8.2 溶血基質(zhì)效應(yīng) 取凍存全血樣品適量，加至空白血漿中，混勻，得5%（V/V）溶血血漿，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理，制得溶血基質(zhì)，以該溶血基質(zhì)為溶劑，平行配制氟康唑低、高質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的溶血基質(zhì)質(zhì)控樣品各3份，進(jìn)樣分析，得峰面積（B3）。以乙腈為溶劑配制相應(yīng)質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的氟康唑?qū)φ掌啡芤?，進(jìn)樣分析，得峰面積（B2）。溶血基質(zhì)效應(yīng)=B3/B2×100%。結(jié)果顯示，氟康唑的溶血基質(zhì)效應(yīng)為93.9%～103.8%，內(nèi)標(biāo)的溶血基質(zhì)效應(yīng)為（101.7±3.9）%，RSD均小于5%（n=3），提示5%溶血血漿的基質(zhì)效應(yīng)不影響待測(cè)物的測(cè)定，詳見表2。

2.8.3 高脂基質(zhì)效應(yīng) 取20%脂肪乳注射液各適量，分別加至空白血漿中，混勻，得5%、10%、15%（V/V）高脂血漿，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理，制得高脂基質(zhì)，以該高脂基質(zhì)為溶劑，平行配制氟康唑低、高質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的高脂基質(zhì)質(zhì)控樣品各3份，進(jìn)樣分析，得峰面積（B4）。以乙腈為溶劑配制相應(yīng)質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）的氟康唑?qū)φ掌啡芤?，進(jìn)樣分析，得峰面積（B2）。高脂基質(zhì)效應(yīng)=B4/B2×100%。結(jié)果顯示，氟康唑在5%、10%、15%高脂血漿中的基質(zhì)效應(yīng)分別為90.8%～99.4%、86.3%～95.7%、83.6%～93.8%，內(nèi)標(biāo)的高脂基質(zhì)效應(yīng)分別為（92.9±3.5）%、（90.5±3.1）%、（85.8±6.3）%，RSD均小于5%（n=9），提示高脂血漿的基質(zhì)效應(yīng)不影響待測(cè)物的測(cè)定，詳見表2。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3.2”項(xiàng)下氟康唑低、高質(zhì)量濃度（30、3 750 ng/mL）質(zhì)控血漿樣品各6份，按“2.3.2”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，分別考察其凍融3次（-80 ℃～25 ℃）、-80 ℃凍存7 d、-20 ℃凍存7 d、室溫放置8 h的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，各樣品實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的偏差均在±15%范圍內(nèi)，提示其在上述條件下穩(wěn)定性良好。另按“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下方法分別配制質(zhì)量濃度均為1.0 μg/mL的氟康唑?qū)φ掌啡芤汉蛢?nèi)標(biāo)工作液，進(jìn)樣分析，得峰面積（C1），在-4 ℃貯存7 d以及室溫放置8 h后進(jìn)樣分析，得峰面積（C2）。結(jié)果，上述樣品峰面積的偏差[（C2-C1）/C1]均在±5%范圍內(nèi)，提示其在上述條件下穩(wěn)定性良好。

2.10 稀釋效應(yīng)考察

取“2.3.2”項(xiàng)下氟康唑質(zhì)量濃度為25 000 ng/mL的質(zhì)控血漿樣品適量，用空白血漿稀釋10倍，平行配制6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品的精密度與準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，經(jīng)稀釋后血漿樣品的日內(nèi)、日間RSD及準(zhǔn)確度分別為6.5%、7.7%、96.1%，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[13]，提示稀釋效應(yīng)不會(huì)影響待測(cè)物的測(cè)定。

2.11 殘留效應(yīng)考察

在測(cè)定最高質(zhì)量濃度（5 000 ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品后，同法測(cè)定空白血漿樣品以考察方法的殘留效應(yīng)。結(jié)果顯示，在待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處，空白血漿樣品相應(yīng)色譜峰峰面積與定量下限質(zhì)量濃度（10 ng/mL）血漿樣品相應(yīng)色譜峰峰面積的比值小于1%，視為基線平齊[13]，表明殘留效應(yīng)不影響后續(xù)血漿樣品的測(cè)定。

3 討論

3.1 內(nèi)標(biāo)的選擇

本研究采用氟康唑的氘代同位素氟康唑-d4作為內(nèi)標(biāo)，其與氟康唑具有相同的色譜保留時(shí)間、相似的提取回收率和離子化效率，與其他內(nèi)標(biāo)相比，能最大程度地避免或減少其他物質(zhì)及基質(zhì)效應(yīng)的干擾[12]，有助于提高分析方法的準(zhǔn)確度與精密度。

3.2 前處理方法及色譜、質(zhì)譜條件優(yōu)化

本法進(jìn)樣量少（3 μL），且分析時(shí)間短（3.1 min），優(yōu)于現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道[7-10]，能滿足臨床大樣本同時(shí)檢測(cè)的需求。與液-液萃取法或固相萃取法比較，本法所采用的乙腈沉淀蛋白前處理方法具有簡便易行、操作快速的特點(diǎn)，可顯著提高分析效率[14]。

在色譜條件優(yōu)化方面，本課題組前期考察了乙腈、0.1%甲酸溶液-甲醇、水-乙腈等流動(dòng)相體系的分離效果。有研究指出，在ESI+檢測(cè)模式下，在水相中加入酸性溶劑，可有助于增強(qiáng)化合物的離子化效率，提高檢測(cè)靈敏度，并有助于改善色譜峰峰形[15-16]。前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果也顯示，以0.1%甲酸溶液-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，可獲得良好的峰形及較快的分析速度，故最終以此作為色譜流動(dòng)相。

在質(zhì)譜條件優(yōu)化方面，本課題組前期分別考察了氟康唑m/z 307.1→220.0、m/z 307.1→238.1以及內(nèi)標(biāo)m/z 311.1→223.0、m/z 311.1→242.1等不同離子對(duì)在質(zhì)譜系統(tǒng)中的響應(yīng)，并對(duì)其DP、CE進(jìn)行了調(diào)諧。結(jié)果顯示，氟康唑-d4的[M+H]+ m/z 311.1比氟康唑的[M+H]+ m/z 307.1多4（4個(gè)氘原子），而前者子離子m/z 223.0僅比后者子離子m/z 220.0多3（3個(gè)氘原子）。由此推斷，另1個(gè)氘原子的取代位置在中性丟失碎片上，子離子m/z 223.0 及m/z 220.0的結(jié)構(gòu)一致，可用于定量分析。故本研究結(jié)合調(diào)諧情況最終以m/z 307.1→220.0（氟康唑；DP：130 V，CE：20 eV）、m/z 311.1→223.0（內(nèi)標(biāo)；DP：100 V，CE：25 eV）為定量離子對(duì)。

3.3 溶血、高脂血漿基質(zhì)對(duì)生物分析的影響

溶血現(xiàn)象在血漿樣本的收集、儲(chǔ)存和運(yùn)送過程中時(shí)有發(fā)生。有研究表明，溶血基質(zhì)不僅會(huì)導(dǎo)致離子抑制或離子增強(qiáng)等效應(yīng)的發(fā)生，還會(huì)誘導(dǎo)紅細(xì)胞中血紅蛋白及各種酶的釋放，嚴(yán)重影響待測(cè)物的回收率和穩(wěn)定性[17-18]。高脂血漿中引起基質(zhì)效應(yīng)的主要內(nèi)源性成分包括磷脂、膽固醇和三酰甘油[19]，這些成分常因以下原因產(chǎn)生變化：（1）一些肥胖患者的血樣有可能含有比正常血樣更多的脂類；（2）因患者代謝功能差異等原因，很有可能造成采集到的血漿樣品中血脂含量偏高；（3）藥動(dòng)學(xué)及生物等效性試驗(yàn)中，需進(jìn)行餐后給藥試驗(yàn)，餐后血脂含量升高。在樣品處理過程中，血漿樣品中的脂質(zhì)成分亦有可能對(duì)待測(cè)物的提取回收率及色譜分離產(chǎn)生影響[19]。因此，為保證不同血液樣品中氟康唑濃度的準(zhǔn)確測(cè)定，本研究對(duì)溶血血漿及高脂血漿的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了考察。結(jié)果顯示，上述血漿的基質(zhì)效應(yīng)均不會(huì)影響待測(cè)物的測(cè)定。

綜上所述，本研究建立的測(cè)定人血漿中氟康唑濃度的同位素稀釋-UPLC-MS/MS法具有簡便、快速、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，適用于氟康唑臨床TDM及藥動(dòng)學(xué)研究。

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（收稿日期：2018-05-28 修回日期：2018-11-01）

（編輯：張?jiān)拢?/p>