基于TiO2@Fe3O4納米材料的鹽酸阿霉素磁性熱敏脂質(zhì)體制備及其理化特性、磁效應(yīng)和光熱效應(yīng)考察

祝俠麗 張慧娟 王莎莎 李玲華 賈永艷

中圖分類號(hào) R943 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）20-2752-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.20.04

摘 要 目的：制備一種包載鹽酸阿霉素（DOX）的磁性熱敏脂質(zhì)體（MTSL），考察其理化性質(zhì)、磁效應(yīng)和光熱效應(yīng)，為腫瘤的化療及光熱/光動(dòng)力治療提供基礎(chǔ)。方法：以DOX為模型藥物，以納米二氧化鈦-納米四氧化三鐵復(fù)合材料（TiO2@Fe3O4）作為光敏劑和磁性材料，采用薄膜分散法制備DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL。觀察該脂質(zhì)體的形態(tài)和分散性、粒徑及Zeta電位，采用超濾-離心法結(jié)合高效液相色譜法考察其包封率;采用磁強(qiáng)針考察其順磁性。與DOX溶液比較，采用透析法考察該脂質(zhì)體的體外釋放行為，并比較在不同溫度（37、43 ℃）下的釋放曲線。采用808 nm近紅外激光照射，考察該脂質(zhì)體的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)以及對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中活性氧（ROS）產(chǎn)生的影響。結(jié)果：制備的DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL為棕黑色，水分散性好;電鏡下呈類圓球形，大小較均勻;平均粒徑為250.6 nm，多分散性指數(shù)為0.107，Zeta電位為（-7.76±3.41）mV;包封率為（92.3±3.2）%;在外加磁場下可定向移動(dòng)，具有明顯的順磁性。與DOX溶液比較，該脂質(zhì)體釋藥速度較慢，具有明顯的緩釋特性;與37 ℃條件比較，該脂質(zhì)體在43 ℃條件下的釋藥速度明顯加快。隨激光（808 nm）照射時(shí)間的增加，該脂質(zhì)體的溫度持續(xù)升高，具有明顯的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)，并可使MCF-7細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生明顯增加。結(jié)論：成功制備了DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL，其外觀形態(tài)均勻、理化性質(zhì)良好;具有明顯的順磁性、緩釋作用和光熱轉(zhuǎn)換性能，能在808 nm近紅外激光照射下增加MCF-7細(xì)胞中ROS的含量。

關(guān)鍵詞 納米二氧化鈦;納米四氧化三鐵;TiO2@Fe3O4復(fù)合納米材料;磁性熱敏脂質(zhì)體;鹽酸阿霉素;光熱治療;光動(dòng)力治療;光熱效應(yīng);磁靶向性

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To prepare Adriamycin hydrochloride （DOX） magnetic thermosensitive liposome （MTSL）， investigate its physicochemical properties， magnetic effect and photothermal effect， so as to provide reference for tumor chemo- therapy and photodynamic/photothermal therapy. METHODS： Using DOX as model drug， TiO2@Fe3O4 as photosensitizers and magnetic materials， DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL was prepared with membrane dispersion method. The morphology and dispersibility were observed; particle size and Zeta potential were detected; encapsulation efficiency of the liposome were determined by centrifugal ultrafiltration and HPLC. Its paramagnetism property was also detected by magnetometer. Compared with DOX solution， in vitro release behavior of the liposome was investigated by dialysis method， and the release curves at different temperatures （at 37， 43 ℃） were compared. The photothermal conversion effect of the liposome and the production of reactive oxygen species （ROS） in human breast cancer MCF-7 cells were investigated by near infrared laser irradiation at 808 nm. RESULTS： Prepared DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL was brown-black with good water dispersion， and was spherical in shape and uniform in size under electron microscopy. Average particle size was 250.6 nm; polydispersity index was 0.107; Zeta potential was （-7.76±3.41）mV; encapsulation efficiency was （92.3±3.2）%. Under the external magnetic field， the liposome could move in a directional direction and had obvious paramagnetism. Compared with DOX solution， the liposomes released slowly and showed obvious sustained- release characteristics. Compared with at 37 ℃， the drug release of liposome speeded up significantly at 43 ℃.With the increase of laser （808 nm） irradiation time， the temperature of the liposome kept rising， which had obvious photothermal conversion effect and could induce the increase of ROS in MCF-7 cells. CONCLUSIONS： DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL is prepared succe- ssfully， which has uniform appearance， good physical and chemical properties. It has obvious paramagnetism sustained release effect and photothermal conversion efficiency， and can promote ROS production in MCF-7 cells under near infrared laser irradiation at 808 nm.

KEYWORDS? ?Nano-titanium dioxide; Nano-ferroferric oxide; TiO2@Fe3O4 nano materials; Magnetic thermo-sensitive liposomes; Adriamycin hydrochloride; Photothermal therapy; Photodynamic therapy; Photothermal effect; Magnetic targeting

光療是目前一種新興的腫瘤治療方法，其中最具代表性的是光熱治療（Photothermal therapy，PTT）和光動(dòng)力治療（Photodynamic therapy，PDT）[1]，其原理是在700～1 100 nm近紅外激光照射下，利用某些納米材料對(duì)光的強(qiáng)吸收作用而產(chǎn)生的高熱量或活性氧（ROS）直接或間接殺死腫瘤細(xì)胞[2]，在惡性腫瘤的綜合治療方面具有良好的應(yīng)用前景。其中，PTT是采用具有較強(qiáng)組織穿透能力的近紅外光作為光源，輻照具有光熱轉(zhuǎn)化能力的納米材料使其產(chǎn)熱，從而發(fā)揮殺滅腫瘤細(xì)胞的治療作用[3];PDT的治療基礎(chǔ)則是一種光敏化反應(yīng)，即通過特定波長的光源照射光敏劑，光敏劑被激活后可產(chǎn)生ROS，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡乃至死亡[4-5]。

納米二氧化鈦（TiO2）作為新興光敏劑的代表，具有催化活性高、穩(wěn)定性好、毒性較低、容易獲取等優(yōu)點(diǎn)，已在PTT和PDT抗腫瘤領(lǐng)域表現(xiàn)出了巨大潛力[6]。但TiO2具有在水中穩(wěn)定性較差、在生理?xiàng)l件下容易發(fā)生聚沉、難以實(shí)現(xiàn)在腫瘤部位的靶向遞送等不足[7]。近年來，納米四氧化三鐵（Fe3O4）作為一種納米級(jí)磁性材料，因可在外加磁場作用下定向遷移，從而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域[8]。本課題組在前期研究中通過化學(xué)合成將TiO2包覆在Fe3O4表面，制得一種磁性納米級(jí)復(fù)合材料TiO2@Fe3O4，該復(fù)合材料既可作為光敏劑，同時(shí)又能結(jié)合外加磁場實(shí)現(xiàn)定向分布;但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，TiO2@Fe3O4納米材料表面光滑、載藥率極低，其本身難以作為藥物載體來實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物在腫瘤部位的控制釋放[9]。

磁性熱敏脂質(zhì)體（Magnetic thermo-sensitive liposomes，MTSL）是在熱敏脂質(zhì)體中加入磁性物質(zhì)制成的一種新型脂質(zhì)體，是近年發(fā)展起來的一類重要的靶向型制劑[10]。其具有較高的載藥能力以及比普通脂質(zhì)體更強(qiáng)的組織靶向和控釋性能[11]，可在外加磁場和實(shí)體瘤的高通透性及滯留效應(yīng)的共同作用下，隨血液循環(huán)靶向聚集到腫瘤組織，同時(shí)結(jié)合局部高溫，可控制其包載的藥物在腫瘤組織迅速釋放[12]。

基于此，本課題以TiO2@Fe3O4納米材料作為光敏劑和磁性材料，以鹽酸阿霉素（Doxorubicin hydrochloride，DOX）為模型藥物，制備一種同時(shí)包載TiO2@Fe3O4和DOX的磁性熱敏脂質(zhì)體（DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL），并對(duì)其進(jìn)行理化表征和體外釋放特性考察;同時(shí)，結(jié)合808 nm波長的近紅外激光照射，考察DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)，并考察在光輻照條件下其對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響，從而為將DOX- TiO2@Fe3O4-MTSL應(yīng)用于腫瘤的化療及PTT/PDT聯(lián)合治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

AE240型電子天平（德國Mettler-Toledo公司）;N-1100-OSB-2100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛郎儀器有限公司）;92-IIN超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（含超聲波探頭，寧波新芝生物科技股份有限公司）;JEM-1400型透射電鏡（日本JEOL公司）;Nano-ZS90型電位及粒度分析儀（英國Malvern公司）;MPMS SQUID XL-7型振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)（美國Quantum 公司）;MW-GX-808/3000mW型激光器（中科院長春激光所）;SHA-C型水浴振蕩器（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）;TGL-16G型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）;1100 型高效液相色譜（HPLC）儀（含2475 FLR型熒光檢測器，美國Agilent公司）;E191型細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國Corning公司）;CKX41型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 藥品與試劑

DOX原料藥（大連美倫生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：25316-40-9，純度：≥99%）;TiO2@Fe3O4納米材料（本課題組制備，批號(hào)：20180915）;二棕櫚酸磷脂酰膽堿（DPPC，瑞士 Corden Pharma公司，批號(hào)：850355P-1G-A-321）;膽固醇（鄭州奇華頓化工產(chǎn)品有限公司，批號(hào)：20150527）; RPMI 1640培養(yǎng)基（北京勃寶萊生物科技有限公司，批號(hào)：20180326）;無噬菌體胎牛血清（北京四季青生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)：18090506）; ROS試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：20180420）;檸檬酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160412）;磷酸氫二鈉（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20170805）;磷酸二氫鉀（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：2017121）;氯仿、甲醇、無水乙醇等其他試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格;水為超純水。

1.3 細(xì)胞

人乳腺癌MCF-7細(xì)胞購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。

2 方法與結(jié)果

2.1 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的制備

采用逆相蒸發(fā)法制備DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL[13]。精密稱取DOX原料藥6 mg、TiO2@Fe3O4 12 mg，加入檸檬酸緩沖液（pH 4.0）6 mL中，超聲（功率：500 W，頻率：40 kHz，以下同）處理5 min使其溶解，作為水相。另精密稱取DPPC 50 mg、膽固醇10 mg，置于茄形瓶中，加入氯仿10 mL、甲醇5 mL，輕輕振搖使其溶解，作為有機(jī)相。將水相加入有機(jī)相，超聲處理15 min使兩者乳化均勻，然后在45 ℃、0.04 MPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)相，再在上述條件下繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)2 h后，加入0.2 mol/L磷酸氫二鈉緩沖液（pH 8.0）調(diào)節(jié)pH至7.0;在60 ℃、0.04 MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去水分，直至溶液體積濃縮為約6 mL后，以超聲波探頭超聲（功率：250 W，頻率：25 kHz）處理60 s，即得DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL。

參照上述步驟，將水相替換為檸檬酸緩沖液（pH 4.0）6 mL，同法制備空白脂質(zhì)體;將水相替換為含12 mg TiO2@Fe3O4的檸檬酸緩沖液（pH 4.0）6 mL，同法制備載有光敏劑和磁性材料的空白脂質(zhì)體（即TiO2@Fe3O4- MTSL）。

2.2 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的表征

2.2.1 外觀形態(tài)和分散性 取空白脂質(zhì)體、TiO2@Fe3O4- MTSL、DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL各適量，肉眼觀察。結(jié)果，三者外觀分別為半透明的乳白色、淺黃色、棕黑色，體系均較為均勻，且無明顯聚沉現(xiàn)象，水分散性良好。

另取TiO2@Fe3O4、DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL適量，用水稀釋分散后，滴至銅網(wǎng)上，用3%磷鎢酸溶液染色，自然晾干，置于透射電鏡下觀察。結(jié)果顯示，TiO2@Fe3O4和DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL均呈類圓形，大小較為均勻，粒徑分別約為10、250 nm，詳見圖1。

2.2.2 粒徑與電位 取DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL適量，用水稀釋分散后，采用電位及粒度分析儀測定其粒徑分布和Zeta電位。結(jié)果顯示，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的平均粒徑為250.6 nm，且大小較為均勻，多分散性指數(shù)（PDI）為0.107;Zeta電位為（-7.76±3.41）mV，表明體系較為穩(wěn)定，詳見圖2。

2.2.3 包封率 采用超濾-離心法結(jié)合HPLC法測定包封率[14]。精密量取DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL 0.2 mL，置于超濾管（30 kDa）中，以4 000 r/min離心1.5 h，采用HPLC法[色譜條件[15]：色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），檢測器為熒光檢測器（激發(fā)波長為480 nm，發(fā)射波長為582 nm），流動(dòng)相為甲醇-pH 4.0的磷酸氫二鉀緩沖液（75 ∶ 25，V/V），流速為0.8 mL/min，柱溫為（30±0.2）℃，進(jìn)樣量為10 μL]測定，并計(jì)算游離DOX的質(zhì)量（W游）;另精密量取DOX- TiO2@Fe3O4-MTSL 0.2 mL，加入甲醇1.8 mL破乳后，采用上述方法測定并計(jì)算DOX總質(zhì)量（W總）。按公式計(jì)算包封率：包封率（%）=（W總-W游）/W總×100%。結(jié)果顯示，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL中DOX的包封率為（92.3±3.2）%。

2.2.4 磁滯回線及磁定向性 稱取TiO2@Fe3O4適量，采用振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)測定其磁矩（μ）隨外加磁場強(qiáng)度（H）的變化值， H范圍設(shè)置為-20 000～20 000 Oe[16]。以磁場強(qiáng)度（H，Oe）為橫坐標(biāo)、單位質(zhì)量的磁矩（μ，emu/g）為縱坐標(biāo)，采用Origin 8.5軟件繪制磁滯回線，結(jié)果顯示，TiO2@Fe3O4納米材料和Fe3O4[17]具有相似的順磁性，詳見圖3。另取 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL適量，置于西林瓶中，在一枚圓柱形強(qiáng)力磁鐵（直徑：5 mm，高度：10 mm）的外加磁場下，與未加磁鐵時(shí)對(duì)比，考察其磁定向性。結(jié)果顯示，未外加磁鐵時(shí)，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL呈現(xiàn)較為均勻的棕黑色;外加磁鐵后，其體系中的棕黑色物質(zhì)定向移動(dòng)，并集中分布在外加磁鐵的位置，詳見圖4。這表明DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL具有明顯的順磁性，可在外加磁場下定向移動(dòng)，可為該脂質(zhì)體的磁靶向性研究提供基礎(chǔ)。

2.3 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的體外釋放度考察

精密量取DOX溶液（1 mg/mL，以水為溶劑配制）、DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL各1 mL，置于透析袋 （截留分子量：12 kDa）中，釋放介質(zhì)為水100 mL，設(shè)定恒溫振蕩器的溫度為 37 ℃、轉(zhuǎn)速為 100 r/min[18]。分別于透析0.5、1、2、4、6、12、24 h時(shí)取樣，每次取樣后補(bǔ)充等溫、同體積的水。按“2.2”項(xiàng)下HPLC法測定取樣液中DOX的濃度（c，mg/mL），按公式計(jì)算累積釋放率：累積釋放率（%）=（c×V）/W總×100%，其中，V為釋放介質(zhì)體積（mL），W總為DOX的總量（mg）。另取DOX-TiO2@Fe3O4- MTSL適量，其他條件不變，設(shè)定恒溫振蕩器的溫度為 43 ℃[13]，按上述同樣方法進(jìn)行釋放度試驗(yàn)。以時(shí)間（t，min）為橫坐標(biāo)、累積釋放率（Q，%）為縱坐標(biāo)，采用Origin 8.5軟件繪制釋藥曲線，結(jié)果見圖5。

由圖5A可見，在37 ℃條件下，DOX溶液中藥物釋放速度較快，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL釋藥速度較慢，表明后者具有明顯的緩釋特性。由圖5B可見，在43 ℃條件下，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的釋藥速度明顯高于其在37 ℃條件下的釋藥速度;在第24 h時(shí)，其在37、43 ℃條件下的累積釋放率分別為12.3%、36.7%，表明其體外釋藥行為具有溫度依賴性，即在人體溫（37 ℃）條件下釋放較慢，而當(dāng)溫度升高至其相變溫度（43 ℃）時(shí)則釋藥速度明顯加快。

2.4 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的光熱轉(zhuǎn)換性能考察

取DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL適量，加入5倍體積水稀釋后，精密量取3 mL，置于石英比色池，采用808 nm激光以2.0 W/cm2的強(qiáng)度進(jìn)行照射，每分鐘記錄溫度[19]。以時(shí)間（t，min）為橫坐標(biāo)、溫度（T，℃）為縱坐標(biāo)，采用Origin 8.5軟件繪制光-熱轉(zhuǎn)換曲線。結(jié)果顯示，隨激光照射時(shí)間的增加，DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL的溫度持續(xù)升高，詳見圖6。這表明TiO2@Fe3O4-MTSL具有明顯的光熱轉(zhuǎn)換特性，可為該脂質(zhì)體用于腫瘤的PTT治療提供基礎(chǔ)。

2.5 DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL對(duì)MCF-7細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響考察

以MCF-7細(xì)胞為模型，考察DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL對(duì)細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響。將細(xì)胞接種于含100 μg/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素、10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基（以下簡稱“培養(yǎng)液”），在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)期時(shí)，按5×104個(gè)/孔鋪于6孔板（6 孔板底部鋪上無水乙醇處理過的載玻片）。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%時(shí)，棄去原培養(yǎng)基，分別加入空白培養(yǎng)液以及含F(xiàn)e3O4或TiO2@Fe3O4或DOX-TiO2@ Fe3O4-MTSL的培養(yǎng)液（20 μg/mL，均以Fe3O4的量計(jì)算，給藥濃度參照預(yù)試驗(yàn)結(jié)果制定）2 mL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。各組細(xì)胞采用808 nm激光以2.0 W/cm2的強(qiáng)度照射 5 min，然后加入ROS試劑盒，于37 ℃下避光孵育30 min;棄去培養(yǎng)液，以pH 7.2的磷酸鹽緩沖液沖洗3次后，取出細(xì)胞爬片，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生情況（綠色熒光越強(qiáng)，則表示ROS量越多）[20]，結(jié)果見圖7。

由圖7可見，與空白對(duì)照組比較，F(xiàn)e3O4、TiO2@Fe3O4 和DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL在808 nm激光照射下均能產(chǎn)生一定量的ROS，但Fe3O4組細(xì)胞ROS熒光信號(hào)較弱，TiO2@Fe3O4和DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL組細(xì)胞中ROS的熒光信號(hào)則明顯增強(qiáng)。這表明DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL結(jié)合近紅外激光照射可使MCF-7細(xì)胞中ROS的含量明顯增多，可為該脂質(zhì)體用于腫瘤的PDT治療提供基礎(chǔ)。

3 討論

磁性納米材料在MTSL中主要起導(dǎo)向和定位作用，理想的磁性納米材料應(yīng)具備較小的粒徑（10～20 nm）、較好的磁場響應(yīng)性、優(yōu)良的安全性和生物相容性[10]。本課題組前期研究中合成的TiO2@Fe3O4納米材料大小較為均勻，直徑約為10 nm，和Fe3O4具有相似的順磁性[17];以該納米材料制成的DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL平均粒徑為250.6 nm，大小均勻（PDI=0.107），可在外加磁場下定向移動(dòng)，表明以TiO2@Fe3O4為磁性納米材料制備的DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL具有磁靶向分布特征。

光敏劑的選擇是腫瘤PTT和PDT綜合治療的關(guān)鍵。TiO2作為新一代的抗腫瘤光敏劑，具有良好的生物相容性及化學(xué)穩(wěn)定性、較高的光催化活性、安全無毒等諸多優(yōu)點(diǎn)，已成為近年來醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[21]。本課題組制備的TiO2@Fe3O4兼具光敏性和磁靶向性，以其制備的DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL在808 nm近紅外激光照射下表現(xiàn)出明顯的光熱轉(zhuǎn)換特性;同時(shí)，該熱效能不僅可促進(jìn)DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL中藥物的釋放，而且可使MCF-7細(xì)胞中產(chǎn)生更多ROS。這為DOX-TiO2@Fe3O4-

MTSL用于腫瘤的PTT和PDT綜合治療提供了一定的基礎(chǔ)。

由于人體對(duì)溫度的耐受程度是有限的，超過45 ℃的高溫會(huì)對(duì)人體造成傷害[22]，因此本研究選擇DPPC為熱敏磷脂，其相變溫度為42～43 ℃[23]。為考察DOX- TiO2@Fe3O4-MTSL的溫度控釋特性，本研究分別在人體體溫（37 ℃）和DPPC相變溫度（43 ℃）的條件下進(jìn)行了體外釋放度試驗(yàn)。結(jié)果顯示，與DOX溶液比較，DOX- TiO2@Fe3O4-MTSL具有明顯的緩釋特性，且在43 ℃下的釋藥速度明顯高于其在37 ℃條件下的釋藥速度，表明其釋藥行為具有溫度依賴性。本課題組曾考慮采用808 nm激光照射透析袋內(nèi)的DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL，以考察其因光熱轉(zhuǎn)換特性產(chǎn)生局部高溫后對(duì)藥物釋放的影響，但由于釋放試驗(yàn)是在恒溫振蕩條件下進(jìn)行，激光照射不便操作，故將介質(zhì)溫度設(shè)置為43 ℃，以間接反映808 nm激光的熱效應(yīng)。下一步擬在細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中采用808 nm激光照射制造局部高溫環(huán)境，直接考察光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)對(duì)藥物釋放的影響。

綜上所述，本研究以前期合成的TiO2@Fe3O4作為光敏劑和磁性材料，包載抗腫瘤藥物DOX，成功制備了一種磁性熱敏脂質(zhì)體DOX-TiO2@Fe3O4-MTSL。該脂質(zhì)體外觀形態(tài)均勻、理化性質(zhì)良好;具有明顯的順磁性，可在外加磁場下定向移動(dòng);具有明顯的緩釋作用，并能在熱效應(yīng)下加快釋藥速度;具有明顯的熱轉(zhuǎn)換性能，能在808 nm近紅外激光照射下使MCF-7細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生明顯增加。本研究可為腫瘤的化療以及PTT/PDT聯(lián)合治療提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，后續(xù)擬一步進(jìn)行該脂質(zhì)體的體內(nèi)研究。

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（收稿日期：2019-05-08 修回日期：2019-08-28）

（編輯：段思怡）