溫陽(yáng)解郁顆粒對(duì)抑郁模型大鼠行為學(xué)和血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響

孟霜 馮振宇 馬小娟 周曉榮 史敏 趙杰

中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）23-3226-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.23.11

摘 要 目的：研究溫陽(yáng)解郁顆粒的抗抑郁作用及可能機(jī)制。方法：將60只行為、體質(zhì)量接近的大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組（2.10 mg/kg）和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組（1.89、3.78、7.56 g/kg），每組10只;灌胃給藥，每天1次，連續(xù)28 d。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠均在給藥同時(shí)采用慢性不可預(yù)見性溫和刺激配合孤養(yǎng)法復(fù)制抑郁模型。在給藥第0、7、14、21、28天，測(cè)定大鼠體質(zhì)量變化，通過糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠的糖水偏好率和4 min內(nèi)行徑總路程、四角路程;末次給藥1 h后，通過強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)時(shí)間和漂浮狀態(tài)時(shí)間，并采用高效液相色譜法測(cè)定大鼠血清中5-羥色胺（5-HT）和多巴胺（DA）含量。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量（給藥第7、14、21、28天）、糖水偏好率（給藥第14、21、28天）顯著降低（P<0.05或P<0.01），4 min內(nèi)行徑總路程、四角路程（給藥第21、28天）顯著減少，4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)時(shí)間顯著縮短、漂浮狀態(tài)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.01），血清中5-HT、DA含量顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，溫陽(yáng)解郁顆粒各劑量組大鼠體質(zhì)量（低劑量組在給藥第28天，中、高劑量組在給藥第21、28天）和糖水偏好率（給藥第28天）顯著升高（P<0.05或P<0.01），4 min內(nèi)行徑總路程、四角路程（給藥第21、28天）顯著增加（P<0.01），4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)的時(shí)間顯著延長(zhǎng)、漂浮狀態(tài)時(shí)間顯著縮短（P<0.01），血清中5-HT、DA含量顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組比較，溫陽(yáng)解郁顆粒各劑量組大鼠上述指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：溫陽(yáng)解郁顆粒對(duì)抑郁模型大鼠具有明顯的抗抑郁作用，且其作用與氟西汀相當(dāng);其機(jī)制可能與降低血清中5-HT、DA含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞 溫陽(yáng)解郁顆粒;抗抑郁;行為學(xué);5-羥色胺;多巴胺;大鼠

Effects of Wenyang Jieyu Granules on the Behavior and Serum Level of Monoamine Neurotransmitter in Depression Model Rats

MENG Shuang1，F(xiàn)ENG Zhenyu1，MA Xiaojuan1，ZHOU Xiaorong2，SHI Min2，ZHAO Jie1（1.Central Laboratory， Shanxi Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine， Shanxi College of TCM， Taiyuan 030013， China;2.Graduate School， Shanxi University of TCM， Taiyuan 030619， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To study the anti-depressive effects of Wenyang jieyu granules and its possible mechanism. METHODS： A total of 60 rats with similar behavior and body weight were randomly divided into blank control group （distilled water）， model group （distilled water）， fluoxetine positive control group （2.10 mg/kg） and Wenyang jieyu granules low-dose， medium-dose and high-dose groups （1.89， 3.78， 7.56 g/kg）， with 10 rats in each group. They were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 28 d. Except for blank control group， other groups were given chronic unpredictable mild stress combined with feeding alone to establish depression model. On the 0， 7th， 14th， 21st and 28th day of administration， the changes of body weight were measured. The sucrose reference test and open-field test were adopted to determined the rate of sucrose reference， total distance and four corner distance within 4 min. 1 h after last administration， forced swimming test was used to measure struggling time and floating time within 4 min. The contents of 5-hydroxytryptamine （5-HT） and dopamine （DA） in serum were determined by HPLC. RESULTS： Compared with blank control group， body weight （7th， 14th， 21st and 28th day of administration） and the rate of sucrose reference （14th， 21st and 28th day of administration） were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）; total distance and four corner distance within 4 min （21st and 28th day of administration） were decreased significantly; struggling time within 4 min was shortened significantly and floating time within 4 min was prolonged significantly （P<0.01）; serum contents of 5-HT and DA were decreased significantly （P<0.01）. Compared with model group， body weight （28th day of administration in low-dose group， 21st and 28th day of administration in medium-dose group and high-dose group） and the rate of sucrose reference （28th day of administration） were increased significantly in Wenyang jieyu granules groups （P<0.05 or P<0.01）; total distance and four corner distance within 4 min （21st and 28th day of administration） were increased significantly （P<0.01）; struggling time within 4 min was prolonged significantly and floating time within 4 min was shortened significantly （P<0.01）. Serum contents of 5-HT and DA were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）. Compared with fluoxetine positive control group， there was no statistical significance in above indexes among Wenyang jieyu granules groups （P>0.05）. CONCLUSIONS： Wenyang jieyu granule has obvious anti-depression effect on depression model rats， which is similar to fluoxetine， and its mechanism may be related to the down-regulation of serum contents of 5-HT and DA.

KEYWORDS ? Wenyang jieyu granules; Anti-depressant; Behavior; 5-hydroxytryptamine; Dopamine; Rat

抑郁癥是一種常見的心境障礙，以顯著而持久的情緒低落為主要特征，具體表現(xiàn)為精力減退、興趣喪失、思維遲緩或言語(yǔ)動(dòng)作減少、疲乏感、自我評(píng)價(jià)過低或有內(nèi)疚感，并伴有睡眠障礙、性功能減退、食欲減退等軀體癥狀，嚴(yán)重者還可出現(xiàn)自殺念頭和行為[1]。近年來，隨著社會(huì)節(jié)奏的不斷加快，工作和生活壓力的不斷提高，抑郁癥逐漸成為臨床中的常見病、多發(fā)病[2]。抑郁癥的病因復(fù)雜，病程多變，發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前公認(rèn)的病因包括遺傳因素、生化因素、社會(huì)文化因素、心理素質(zhì)因素等[3-4]。其中，生化因素包括單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝異常、受體假說、神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂等。而單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝異常又包括5-羥色胺（5-HT）假說，去甲腎上腺素（NE）假說，多巴胺（DA）假說和α-氨基丁酸假說等[5]。

溫陽(yáng)解郁方為我院（即山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院）的臨床驗(yàn)方，由桂枝、附子、烏梅、炙甘草、大棗、生姜六味中藥組成，具有溫陽(yáng)助腎、開郁安神的功效。方中附子為君藥，辛熱，能補(bǔ)坎中真陽(yáng)，真陽(yáng)為君火之種，補(bǔ)真火即是補(bǔ)君火也，同時(shí)其可上助心陽(yáng)，中溫脾陽(yáng);桂枝、生姜為臣藥，辛通心陽(yáng)、疏肝氣，溫肝陽(yáng)，補(bǔ)肝用;炙甘草、大棗為佐藥，甘緩其中，合辛甘化陽(yáng)、酸甘化陰之意，同時(shí)“甘草補(bǔ)中有引火歸根之妙”;生姜、大棗溫中焦，助脾陽(yáng);烏梅為使藥，統(tǒng)領(lǐng)陽(yáng)藥入肝，溫補(bǔ)肝陽(yáng)，使肝中陽(yáng)氣得以升發(fā)，又可斂肝氣、養(yǎng)肝血以柔肝，正合肝“體陰而用陽(yáng)”的生理特性。諸藥合用，復(fù)腎陽(yáng)、補(bǔ)肝陽(yáng)、暖心陽(yáng)、運(yùn)脾陽(yáng)，收納微陽(yáng)于腎，伏虛火于中。

本項(xiàng)目組在2010年7月-2011年3月對(duì)60例抑郁患者進(jìn)行了觀察，其中觀察組30例服用溫陽(yáng)解郁湯，對(duì)照組30例服用鹽酸氟西汀。治療1個(gè)月后，結(jié)果顯示治療組總有效率>93.3%，與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但該方在臨床傳統(tǒng)應(yīng)用上主要以湯劑為主，而湯劑具有攜帶不方便、患者依從性差、不能長(zhǎng)久貯藏等缺點(diǎn)，因此擬將其開發(fā)為溫陽(yáng)解郁顆粒。本課題組前期已對(duì)溫陽(yáng)解郁顆粒的制備工藝進(jìn)行了研究，并制訂了該顆粒劑的質(zhì)量控制方法。在本研究中，課題組將以溫陽(yáng)解郁顆粒為研究對(duì)象，采用慢性不可預(yù)見性溫和刺激（CUMS）配合孤養(yǎng)復(fù)制抑郁癥大鼠模型，觀察溫陽(yáng)解郁顆粒對(duì)模型大鼠行為學(xué)的影響，并測(cè)定大鼠血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）含量的變化，來探討其抗抑郁的作用與機(jī)制，為該制劑的臨床應(yīng)用及作用機(jī)制的闡明奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

XR-XZ301曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)裝置、XR-XQ202-S SuperFst 強(qiáng)迫游泳裝置（上海欣軟生物技術(shù)有限公司）; e2695高效液相色譜儀、2475熒光檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）;KQ-800KDE高功率數(shù)控超聲清洗器、電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;BT 25S十萬分之一電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸氟西汀分散片（禮來蘇州制藥有限公司，批號(hào)：7339A，規(guī)格：20 mg）;溫陽(yáng)解郁顆粒（山西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，批號(hào)：20181018，規(guī)格：6 g/袋，每1 g相當(dāng)于生藥量6.9 g）; 5-HT對(duì)照品（批號(hào)：11656- 200401，純度：>98%）、DA對(duì)照品（批號(hào)：100070- 201006，純度：>98%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇、磷酸二氫鈉均為色譜純;其余試劑為分析純。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)健康Wistar大鼠60只，♂，體質(zhì)量180～200 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006，合格證號(hào)：11400100303296。大鼠購(gòu)入后飼養(yǎng)于山西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，室溫為（22±1） ℃、相對(duì)濕度為65%～70%、光照周期為12 h /12 h。飼養(yǎng)期間大鼠自由飲水和攝食，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過山西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

2 方法

2.1 分組與給藥

經(jīng)前期篩選，將行為、體質(zhì)量接近的大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組，每組10 只。空白對(duì)照組大鼠正常群居飼養(yǎng)，其余各組大鼠均單籠孤養(yǎng)。各組藥物均用蒸餾水制備成所需質(zhì)量濃度：氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組大鼠給藥劑量為2.10 mg/kg（根據(jù)人臨床等效劑量按體表面積換算法換算而得）;溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組大鼠給藥劑量分別為1.89、3.78、7.56 g/kg，分別為臨床的等效劑量和等效劑量的2、4倍劑量;空白對(duì)照組和模型組大鼠給予等量蒸餾水。灌胃給藥，給藥體積為10 mL/kg。每天給藥1次，連續(xù)給藥28 d。

2.2 大鼠抑郁模型的建立

每次給藥1 h后，除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠均進(jìn)行慢性不可預(yù)見性溫和刺激（CUMS），通過CUMS配合孤養(yǎng)法建立大鼠抑郁模型。CUMS方式包括[6-7]：禁食（24 h）、禁水（24 h）、冰水?。? ℃、6 min）、熱刺激（40 ℃、10 min）、束縛（3 h）、夾尾（2 min）、潮濕墊料（24 h）、超聲（60 W、3 h）、晝夜顛倒、24 h光照。按以上10種刺激方式連續(xù)刺激28 d，每日隨機(jī)選擇一種刺激方式進(jìn)行刺激，同種刺激方式不能連續(xù)2 d出現(xiàn)。空白對(duì)照組大鼠不給予任何刺激。

2.3 體質(zhì)量變化

在給藥第0、7、14、21、28天，分別測(cè)定每只大鼠的體質(zhì)量。

2.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

在給藥第0、7、14、21、28天，分別進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)開始前大鼠先禁水14 h。實(shí)驗(yàn)時(shí)，給予大鼠定量的一瓶純水和一瓶1%蔗糖水溶液，60 min后將水瓶取走，定量測(cè)定，計(jì)算大鼠的純水消耗量、糖水消耗量和液體總消耗量（純水消耗量和糖水消耗量的總和），計(jì)算糖水偏好率[糖水偏好率（%）=糖水消耗量/液體總消耗量×100%]。

2.5 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

在給藥第0、7、14、21、28天，糖水消耗實(shí)驗(yàn)結(jié)束2 h后，進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)在安靜的房間內(nèi)進(jìn)行。將大鼠置于曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱中央，由攝像機(jī)觀察并記錄大鼠在6 min內(nèi)的活動(dòng)狀況，使用SuperMaze軟件記錄后4 min內(nèi)大鼠的行徑總路程和四角路程。每只大鼠完成以后要徹底清潔敞箱，然后再用下一只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，防止糞便氣味等對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

2.6 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

在末次給藥1 h后，將各組大鼠依此放入SuperFst強(qiáng)迫游泳裝置中進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，水溫控制在25 ℃左右。實(shí)驗(yàn)時(shí)間設(shè)置為6 min，根據(jù)SuperFst軟件記錄大鼠在后4 min內(nèi)的掙扎狀態(tài)時(shí)間和漂浮狀態(tài)時(shí)間。每只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)更換透明玻璃圓桶內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用水，避免糞便氣味等對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

2.7 大鼠血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA含量的測(cè)定

強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，股動(dòng)脈采集大鼠血液，在4 ℃下以10 000 r/min離心15 min，取上清。采用高效液相色譜法測(cè)定各組大鼠血清中5-HT、DA含量。

2.7.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：甲醇-0.1 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（10 ∶ 90，V/V）;流速：1 mL/min;激發(fā)波長(zhǎng)：254 nm，發(fā)射波長(zhǎng)：338 nm;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。

2.7.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取5-HT、DA對(duì)照品適量，加0.1 mol/L鹽酸制成5-HT、DA質(zhì)量濃度分別為0.065、0.030 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.7.3 供試品溶液的制備 取500 μL血清于離心管內(nèi)，加入相同體積的0.4 mol/L高氯酸溶液，在4 ℃下以 ? ? 10 000 r/min離心10 min，取上清液，待測(cè)。

2.7.4 方法學(xué)考察 嚴(yán)格按照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）通則9012生物樣品定量分析方法中驗(yàn)證指導(dǎo)原則[8]進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 體質(zhì)量變化觀察結(jié)果

在給藥第0天，各組大鼠的體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥后，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量（給藥第7、14、21、28天）顯著降低（P<0.05或P<0.01）;與模型組比較，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組、溫陽(yáng)解郁顆粒低劑量組（給藥第28天）和溫陽(yáng)解郁顆粒中、高劑量組（給藥第21、28天）大鼠體質(zhì)量顯著增加（P<0.01）。由上述結(jié)果可提示，氟西汀和溫陽(yáng)解郁顆粒均能增加抑郁模型大鼠的體質(zhì)量，改善抑郁大鼠生長(zhǎng)遲緩狀態(tài)。各組大鼠體質(zhì)量測(cè)定結(jié)果見表1。

3.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

在給藥第0、7天，各組大鼠糖水偏好率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠糖水偏好率（給藥第14、21、28天）顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組（給藥第21、28天）和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組（給藥第28天）大鼠糖水偏好率顯著升高（P<0.05或P<0.01）。由上述結(jié)果可提示，氟西汀和溫陽(yáng)解郁顆粒均能顯著提高抑郁模型大鼠對(duì)糖水的偏好程度。各組大鼠糖水偏好率測(cè)定結(jié)果見表2。

3.3 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

在給藥第0、7、14天，各組大鼠4 min內(nèi)行徑總路程、四角路程差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠4 min內(nèi)行徑總路程、四角路程（給藥第21、28天）顯著減少（P<0.01）。與模型組比較，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁低、中、高劑量組大鼠4 min內(nèi)行徑總路程（給藥21、28天）以及溫陽(yáng)解郁顆粒高劑量組大鼠4 min內(nèi)四角路程（給藥第14天）顯著增加（P<0.05或P<0.01）。由上述結(jié)果可提示，氟西汀和溫陽(yáng)解郁顆粒均能改善抑郁模型大鼠的行為活動(dòng)能力。各組大鼠4 min內(nèi)行徑總路程測(cè)定結(jié)果見表3，4 min內(nèi)四角路程測(cè)定結(jié)果見表4。

3.4 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)持續(xù)時(shí)間顯著縮短（P<0.01），漂浮狀態(tài)持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.01）。與模型組比較，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.01），漂浮狀態(tài)持續(xù)時(shí)間明顯縮短（P<0.01）。上述結(jié)果提示，氟西汀和溫陽(yáng)解郁顆粒均能改善抑郁模型大鼠的游泳狀態(tài)。各組大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)時(shí)間和漂浮狀態(tài)時(shí)間測(cè)定結(jié)果見表5。

3.5 血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA含量測(cè)定結(jié)果

3.5.1 方法學(xué)考察結(jié)果 線性關(guān)系關(guān)系考察結(jié)果顯示，5-HT的回歸方程為y=41 827x+60 815（r=0.999 6）、DA的回歸方程為y=15 955x-29 994（r=0.999 5）（式中，y為峰面積積分值、x為進(jìn)樣量），結(jié)果表明5-HT、DA分別在進(jìn)樣量為108～1 080 μg、60～600 ng范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。5-HT的定量下限為108 μg，DA的定量下限為60 ng。精密度試驗(yàn)中，5-HT、DA峰面積的RSD分別為0.65%、0.70%（n=6），表明儀器精密度較好。重復(fù)性試驗(yàn)中，5-HT、DA含量的RSD分別為2.16%、2.93%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。在室溫條件下放置0、2、4、6、8、10、12 h后測(cè)得5-HT、DA峰面積的RSD分別為1.21%、2.46%（n=7），將含藥血清于-80 ℃反復(fù)凍融3次后測(cè)得其峰面積的RSD分別為2.78%、3.25%（n=3），將含藥血清于-80 ℃條件下放置1周再室溫溶解后測(cè)得其峰面積的RSD分別為3.68%、3.47%（n=6），表明樣品穩(wěn)定性較好。加樣回收試驗(yàn)結(jié)果顯示，5-HT、DA的平均回收率分別為98.35%、98.73%，RSD分別為2.48%、2.95%（n=6），表明該方法準(zhǔn)確度較好。基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果顯示，5-HT在低、中、高質(zhì)量濃度（0.005、0.05、0.5 mg/mL）下的基質(zhì)效應(yīng)分別為（102.46±5.23）%、（98.33±4.25）%、（99.10±5.58）%，DA在低、中、高質(zhì)量濃度（0.003、0.03、0.3 mg/mL）下的基質(zhì)效應(yīng)分別為（98.32±6.27）%、（99.61±5.29）%、（101.11±6.63）%，表明該方法可以有效避免血清基質(zhì)效應(yīng)。

3.5.2 含量測(cè)定結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中5-HT、DA含量顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組大鼠血清中5-HT、DA含量均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。由上述結(jié)果可知，氟西汀和溫陽(yáng)解郁顆粒均能提高大鼠血清中5-HT、DA的含量。各組大鼠血清中5-HT、DA含量測(cè)定結(jié)果見表6。

4 討論

目前，抑郁癥發(fā)病機(jī)制尚不明確，被廣為接受的幾類主流研究學(xué)說有單胺類神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說、下丘腦-垂體-腎上腺軸功能性失調(diào)學(xué)說、細(xì)胞因子學(xué)說等。其中，以單胺類神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中認(rèn)可度較高，該假說認(rèn)為抑郁癥與人類情感活動(dòng)有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)的變化有關(guān)，如NE、5-HT、DA含量降低等[9-10]。5-HT和DA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，抑郁癥的發(fā)生與5-HT、DA等神經(jīng)遞質(zhì)濃度的變化密切相關(guān)，其可通過中樞及外周的多種受體參與調(diào)節(jié)情緒、睡眠、攝食、嘔吐、記憶、性活動(dòng)、內(nèi)分泌、胃腸動(dòng)力等多種生命活動(dòng)，而抑郁癥的證候涉及絕大多數(shù)5-HT受體參與調(diào)控的生理活動(dòng)[11-12]。治療抑郁癥的藥物一類是選擇性5-HT再攝取抑制劑，這類藥物主要是選擇性抑制中樞神經(jīng)突觸前膜對(duì)5-HT的再攝取，從而增加突觸間隙的5-HT濃度，達(dá)到抗抑郁的效果;還有一類是單胺氧化酶抑制劑，這類藥物通過抑制單胺氧化酶對(duì)5-HT、DA、NE的降解，導(dǎo)致5-HT、DA、NE濃度升高，從而起到抗抑郁的作用[13-14]。鹽酸氟西汀是目前治療抑郁癥的一線藥物之一，其作用機(jī)制是抑制5-HT神經(jīng)末梢突觸前膜對(duì)5-HT再攝取，增加突觸間隙5-HT的濃度，從而發(fā)揮抗抑郁的作用，因此，在本研究中選擇鹽酸氟西汀分散片作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

本研究采用CUMS配合孤養(yǎng)法復(fù)制大鼠抑郁模型后，模型組大鼠體質(zhì)量增加顯著變慢，糖水偏好率明顯降低，大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)4 min內(nèi)行徑總路程和四角路程明顯減少，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)時(shí)間明顯縮短，4 min內(nèi)漂浮狀態(tài)時(shí)間明顯增長(zhǎng)，這說明抑郁大鼠模型造模成功。連續(xù)給藥21 d后，氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁顆粒給藥組大鼠體質(zhì)量增加明顯，糖水偏好率明顯升高，大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)4 min內(nèi)行徑總路程和四角總路程明顯增加，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)大鼠4 min內(nèi)掙扎狀態(tài)持續(xù)時(shí)間明顯增長(zhǎng)、漂浮狀態(tài)持續(xù)時(shí)間明顯減少。由此可見，溫陽(yáng)解郁顆粒與氟西汀作用相當(dāng)，即能夠抵抗抑郁模型大鼠消化功能紊亂而致的食欲下降、體質(zhì)量增長(zhǎng)變慢的問題，也能改善抑郁模型大鼠的自主活動(dòng)能力及對(duì)糖水的偏好度，增加抑郁大鼠的快感程度和興趣程度。另外，本課題組采用高效液相色譜-熒光法測(cè)定了大鼠血清中的5-HT和DA兩種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量，結(jié)果表明氟西汀陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)解郁顆粒低、中、高劑量組大鼠血清中5-HT和DA含量均顯著升高，這說明溫陽(yáng)解郁顆?？赡苁峭ㄟ^提高突觸間隙多巴胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA的含量，進(jìn)而參與調(diào)控情緒、睡眠、攝食等生命活動(dòng)，達(dá)到抗抑郁作用。

綜上所述，抑郁癥病機(jī)復(fù)雜，而化學(xué)藥治療該病靶點(diǎn)較為單一，療效有限，且副作用大。中醫(yī)辯證論治，復(fù)方中藥通過多靶點(diǎn)整體調(diào)整機(jī)體，療效優(yōu)勢(shì)明顯，因此開發(fā)研制有效的中藥制劑越來越受到全社會(huì)的關(guān)注。溫陽(yáng)解郁顆粒治療抑郁癥臨床療效確切，故本研究對(duì)其抗抑郁作用及機(jī)制進(jìn)行了初步的探究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溫陽(yáng)解郁顆粒能增加大鼠的快感程度和興趣程度，并能提高大鼠血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA的含量。可見，溫陽(yáng)解郁顆?？挂钟糇饔妹鞔_，且可能是與調(diào)控5-HT、DA等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝有關(guān)，但其具體的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的深入研究。

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（收稿日期：2019-05-14 修回日期：2019-09-03）

（編輯：林 靜）