特種甘薯TSP-1提取物對環(huán)磷酰胺致血小板減少癥小鼠的初步研究

王洪云 張毅鈕 福祥 孫健 徐飛 朱紅 岳瑞雪 張文婷

摘 要：ICR小鼠連續(xù)3d腹腔注射100mg/kg環(huán)磷酰胺，建立血小板減少癥模型。將造模成功小鼠分別灌胃6g/kg和2g/kg劑量TSP-1水提取物、6g/kg和2g/kg劑量TSP-1石油醚提取物、2g/kg劑量TSP-1正丁醇提取物和1g/kg劑量TSP-1氯仿提取物，造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血測定血小板和白細胞數(shù)量。結果表明：2g/kg TSP-1石油醚提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物可以顯著升高環(huán)磷酰胺模型小鼠的血小板，但各提取物對環(huán)磷酰胺所致白細胞減少無治療作用，提示特種甘薯氯仿與石油醚提取物具有進一步用于治療血小板減少癥的潛在價值。

關鍵詞：特種甘薯TSP-1;環(huán)磷酰胺;血小板減少

甘薯為璇花科甘薯屬一年或多年生草本植物，是一種藥食同源作物，具有重要的藥用保健價值[1]。研究表明，甘薯葉含有樹脂糖苷、萜類、酚酸類、黃酮類和甾體類等化學成分，具有抗氧化、抑制癌細胞增殖和提高免疫力等多種功能[2-3]，某些特種甘薯對過敏性紫癜出血等疾病具有良好的治療作用[4]。近些年來，筆者通過特種甘薯TSP-1對志愿者的臨床試用效果進行觀察，發(fā)現(xiàn)該品種的葉片提取物對血小板減少癥具有良好的治療作用。

目前，臨床上使用的大多數(shù)化療藥物都會對癌癥患者造成較為嚴重的毒副作用，主要的血液學毒性作用表現(xiàn)在血小板數(shù)量明顯降低，患者的免疫功能降低，進而影響化療進程[5]。本研究以化療藥物環(huán)磷酰胺制作血小板減少癥小鼠模型，采用特種甘薯TSP-1不同提取物（水、石油醚、正丁醇、氯仿）對ICR小鼠灌胃，觀察其對血小板減少癥模型小鼠外周血小板和白細胞數(shù)量的影響，為其進一步藥用開發(fā)提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

ICR小鼠，清潔級，18～23g，雌雄各半，共64只，由南京醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.2 主要試劑

環(huán)磷酰胺（上海華聯(lián)制藥有限公司，滬衛(wèi)藥淮字（1995）第012034號）、石油醚（國藥集團）、正丁醇（國藥集團）、氯仿（國藥集團）、羧甲基纖維素（安耐吉）。

1.3 主要儀器與設備

CA-800全自動血球分析儀（日本吉泰）、FA1104 型精密電子天平（上海精密科學儀器有限公司）、灌胃針、采血針等 。

1.4 特種甘薯TSP-1不同提取物的制備

制備流程：特種甘薯TSP-1干燥葉片→清洗、去砂、粉碎→溶劑提?。ㄋ⑹兔?、正丁醇、氯仿）→過濾→真空濃縮→冷凍干燥→真空4℃保存。灌胃前用1%羧甲基纖維素配成混懸液。

1.5 環(huán)磷酰胺致血小板減少癥小鼠模型的建立與給藥

ICR小鼠，雌雄各半，18～23g，隨機分為8組，分別為空白對照組、模型對照組、6g/kg TSP-1水提取物、2g/kg TSP-1水提取物、6g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1石油醚提取物、2g/kg TSP-1正丁醇提取物、1g/kg TSP-1氯仿提取物。各受試組按每10g體重灌服0.2mL受試藥物，空白和模型對照組給予等量的1%羧甲基纖維素溶劑，每日1次，連續(xù)6d。給藥第4天，除空白對照組外，其余各組腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，每日1次，連續(xù)3d，建立血小板減少癥模型。

1.6 外周血小板和白細胞數(shù)量的測定

造模前、造模第3天和造模第6天尾部取血，加入全自動血球分析儀，測定血小板、白細胞數(shù)。

1.7 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 18.0軟件處理數(shù)據(jù)，以平均值±標準誤表示。統(tǒng)計顯著性水平設為：P<0.05有差異、P<0.01差異顯著。

2 結果與分析

2.1 TSP-1不同提取物對環(huán)磷酰胺致血小板減少癥模型小鼠外周血血小板的影響

小鼠連續(xù)3d灌胃特種甘薯TSP-1不同提取物，TSP-1石油醚提取物、TSP-1正丁醇提取物和TSP-1氯仿提取物組血小板降低10%～25%，其中2g/kg石油醚提取物、1g/kg氯仿提取物組具有顯著性差異（P<0.01），其余各組血小板數(shù)量相近。連續(xù)3d腹腔注射環(huán)磷酰胺，模型組血小板數(shù)量下降到693×109/L，與造模前比較減少19.8%，與造模前和空白對照組均有顯著性差異（P<0.05）。2g/kg水提取物組血小板數(shù)量降幅最大，與造模前、模型對照組和空白對照組均有極顯著差異（P<0.01）;2g/kg正丁醇提取物組小鼠血小板與造模前也有顯著下降（P<0.05）。6g/kg水提取物和石油醚提取物組的小鼠血小板無明顯減少，分別與造模前和空白對照組相近（P>0.05）;而1g/kg氯仿提取物組血小板數(shù)量較造模前顯著升高（P<0.01）。

造模后第6天，模型對照組血小板數(shù)量已明顯回升，這說明環(huán)磷酰胺骨髓抑制效果結束，但實驗結束時，模型組小鼠血小板數(shù)量仍然明顯低于造模前（P<0.05），說明模型建立成功[6]。造模后隨著給藥時間的延長，給藥小鼠血小板均有所提高，除2g/kg水提取物組外，其余各組血小板數(shù)量均超過造模前水平，其中2g/kg石油醚提取物和1g/kg氯仿提取物組提升效果最好，與造模前比較具有顯著性差異（P<0.01）。試驗結果提示，特種甘薯TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善環(huán)磷酰胺致外周血血小板減少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好。

2.2 TSP-1不同提取物對環(huán)磷酰胺致血小板減少癥模型小鼠外周血白細胞的影響

連續(xù)3d灌胃特種甘薯TSP-1不同提取物，6g/kg水提取物和6g/kg石油醚提取物組小鼠外周血白細胞比空白對照組升高約30%，其中6g/kg甘薯水提取物組升高具有顯著性差異（P<0.05），其余各提取物組均顯著降低（P<0.05或0.01）。造模后第3天，外周血中白細胞數(shù)量即急劇下降，約為給藥前的15%～30%之間，包括模型對照組在內(nèi)，各組與空白對照比較均具有極顯著差異（P<0.01），試藥組與模型組比較無顯著性差異（P>0.05）。造模后第6天，各組小鼠白細胞數(shù)量均無明顯變化。試驗結果提示，特種甘薯TSP-1水提取物6g/kg劑量與石油醚提取物6g/kg劑量具有升高正常小鼠外周血白細胞的作用，但各提取物對環(huán)磷酰胺致外周血白細胞減少均無治療作用。

3 結論與討論

環(huán)磷酰胺為常用抗腫瘤化療藥物，有骨髓抑制等不良反應，給予大劑量環(huán)磷酰胺會使B和T淋巴細胞免疫功能下降，引起體液及細胞免疫功能的全面抑制，從而對血小板生成起抑制作用。已有文獻報道，小鼠連續(xù)3d皮下注射100mg/kg環(huán)磷酰胺，停藥后3d左右血小板可下降20%～30%[7]。本研究應用環(huán)磷酰胺對血小板的抑制作用，以環(huán)磷酰胺100mg/kg連續(xù)3d給小鼠皮下注射，成功建立血小板減少癥模型，造模后第3天血小板數(shù)量降到最低，造模后第6天血小板數(shù)量仍低于造模前。

抗腫瘤化學藥物臨床應用常導致血小板減少，嚴重者可威脅生命。目前臨床上主要治療手段是應用促血小板生成素（TPO）或白細胞介素-11（IL-11）、輸注血小板和應用糖皮質(zhì)激素，降低化療藥物劑量或推遲治療至患者的骨髓造血功能恢復。應用重組人血小板生成素（rhTPO）治療，價格昂貴;輸注血小板有可能增加血源性感染肝炎和艾滋病的危險;而降低化療藥物劑量或推遲治療，對患者的療效會有不利影響[8]。

近年來，相繼有文獻報道，中藥或天然藥物對血小板減少癥有一定療效[9-10]。本研究以特種甘薯TSP-1為研究對象，對TSP-1抗血小板減少癥的有效部位進行篩選，結果表明，TSP-1水、石油醚、正丁醇和氯仿提取物均具有改善環(huán)磷酰胺致外周血血小板減少的作用，其中石油醚和氯仿提取物效果最好，但各提取物對環(huán)磷酰胺致外周血白細胞減少均無治療作用。在外周血血小板數(shù)量方面，石油醚提取物低劑量組的效果強于高劑量組，這說明其最低有效劑量可能低于2g/kg，今后的藥效實驗需進一步測定其最低有效劑量;而高劑量組藥效不如低劑量組，可能是高劑量給藥無法完全吸收。

中藥來源的化合物一直都是國內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點，本實驗顯示，特種甘薯TSP-1在提升血小板減少癥小鼠外周血血小板數(shù)量上有很好的效果，其作用機制還需要更加深入的研究，有效成分也有待進一步鑒別，然而，其用量少、成本低、給藥方便等優(yōu)勢足以使其成為有潛力的候選藥物?！?/p>

參考文獻

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